病毒感染的预防诊断和治疗概要课件

第四章病毒感染的预防、诊断和治疗第四章病毒感染的预防、诊断和治疗1第一节

病毒性疾病的预防病毒感染的预防、诊断和治疗第一节病毒感染的预防、诊断和治疗2Preventionisbetterthan

cure!良好的公众健康

预防接种Vaccinationisakeytoolagainstviraldiseases.有效的公共措施适当的营养良好的个人卫生习惯Preventionisbetterthancure3病毒疫苗人类运用病毒疫苗的历史：1796年EdwardJenner用牛痘预防天花感染；1884年LouisPasteur制备狂犬疫苗；20世纪30年代抗黄热病、流感病毒疫苗出现；此后，大量病毒疫苗问世，实施大规模预防接种。

免疫是20世纪在公共卫生上的最伟大的胜利。

病毒疫苗人类运用病毒疫苗的历史：4计划免疫（第一类疫苗）自费免疫（第二类疫苗）计划免疫的主要内容是“接种五苗防七病”，即：按照免疫程序，对7周岁以下儿童有计划地进行卡介苗、脊髓灰质炎减毒活疫苗、百白破三联混合制剂、麻疹疫苗和乙肝疫苗的基础免疫及加强免疫接种。另一部分国家没有纳入计划免疫范畴。例如，预防水痘、甲肝等疾病的疫苗。我国的疫苗接种计划免疫（第一类疫苗）计5

1980年WHO宣布已在全世界范围内消灭天花。脊髓灰质炎病毒、麻疹病毒也将随后灭绝.1980年WHO宣布已在全世界范围内消灭天花。6导致某种病毒灭绝的必要因素是什么？该病毒必须没有可替代的宿主；感染或接种必须能产生维持一生的持久免疫力。导致某种病毒灭绝的必要因素是什么？该病毒必须没有可替代的宿主7Attributesofagoodvaccine

1.Abilitytoelicittheappropriateimmuneresponsefortheparticularpathogen2.Longtermprotection

ideallylife-long

3.Safety

vaccineitselfshouldnotcausedisease

4.Stable

5.InexpensiveAttributesofagoodvaccine8病毒疫苗根据其存在状态和化学组成可分为：活疫苗(减毒活疫苗、重组活病毒载体疫苗）灭活疫苗亚单位疫苗（基因工程疫苗）DNA疫苗多肽疫苗……病毒疫苗根据其存在状态和化学组成可分为：活疫苗(减毒活疫苗、9减毒活疫苗(liveattenuatedvaccine)指通过不同的方法手段使病毒的毒力即致病性减弱或丧失。疫苗由完整的活病毒组成。如麻疹疫苗、脊髓灰质炎疫苗（Sabin苗）减毒活疫苗(liveattenuatedvaccine)10如何获得减毒株？野毒株在非自然宿主中反复传代如何获得减毒株？野毒株在非自然宿主中反复传代113型减毒脊髓灰质炎病毒P3/Leon/37(分离自严重瘫痪病人）invivo繁殖21代（猴脑内）invitro培养8代（猴睾丸培养物）invitro培养39代（猴肾培养物）病斑纯化3次（猴肾培养物）invitro培养3代(制备，猴肾培养物）Sabin疫苗株P3/Leon12a1bKP3/563型减毒脊髓灰质炎病毒活疫苗Sabin的由来Sabin疫苗株P3/Leon12a1bKP3/563型12如何获得减毒株？野毒株在非正常宿主中反复传代冷适应病毒株（ts株）如流感疫苗

重组病毒株如轮状病毒疫苗反向遗传学方法如何获得减毒株？野毒株在非正常宿主中反复传代冷适应病毒株13Attributesofliveattenuatedvaccines

Immuneresponse

BothCellMediatedImmunityandantibodyresponses.ImmunityislonglivedSingledose

Safety

Dangerofreversiontovirulence,orSeverediseaseinimmunocompromisedAttributesofliveattenuated14Stability

OrganismsinthevaccinemustremainviableinordertoinfectandreplicateinthehostVaccinepreparationsarethereforeverysensitivetoadversestorageconditionsMaintenanceofthecoldchainisveryimportant.

Expense

CheaptoprepareAttributesofliveattenuatedvaccines

(continued)StabilityExpenseAttributeso15重组活病毒载体疫苗将编码某一蛋白抗原的基因转入减毒的病毒的基因组而制成的疫苗.重组活病毒载体疫苗将编码某一蛋白抗原的基因转入减毒的病毒的基16灭活病毒疫苗(inactivatedvirusvaccines)

指用灭活剂处理活的病毒，使其失去感染性，但仍然保留病毒的全部或部分免疫原性。是由完整病毒组成。如流感灭活疫苗、狂犬疫苗指用灭活剂处理活的病毒，使其失去感染性，但仍然保留病17

Mostwidelyusedmethodsofinactivation:

Formaldehyde甲醛

Propiolactoneß-丙酸内酯Ethyleneoxide环氧乙烷Thesesubstancesproducecrossedlinkinginthenucleicacidchains,inactivatingthevirionbutnotitsproteins.Mostwidelyusedmethodsof18Attributesofinactivatedvaccines

Immuneresponse

poor;

onlyantibody-nocellmediatedimmuneresponse.responseisshort-livedandmultipledosesareneeded.maybeenhancedbytheincorporationofadjuvantsintothevaccinepreparation.Safety

Inactivated,thereforecannotreplicateinthehostandcausedisease.Localreactionsatthesiteofinjectionmayoccur.

Attributesofinactivatedvacc19Attributesofinactivatedvaccines(continued)Stability

Efficacyofthevaccinedoesnotrelyontheviabilityoftheorganisms.Thesevaccinestendtobeabletowithstandmoreadversestorageconditions.

Expense

Expensivetoprepare.Attributesofinactivatedvac20亚单位疫苗(subunitvaccine)：用纯化的病毒抗原性组分而不是全病毒作疫苗。如乙肝疫苗:Canbepurifiedfromorganism(血源疫苗)Canberecombinantprotein(基因工程疫苗)亚单位疫苗(subunitvaccine)：用纯21Attributesofsubunitvaccine:

Similartoinactivatedvaccine:stable,poorimmunogenicity,expensive……Safeandfewerlocalreactionsoccurattheinjectionsite.Attributesofsubunitvaccine:22核酸疫苗（nucleicacidvaccines)：

将能引起机体保护性免疫反应的病原体抗原的编码基因克隆入表达载体，将其直接导入机体细胞后，通过宿主细胞的转录系统表达蛋白抗原，诱导宿主产生特异性细胞免疫和体液免疫应答。Onlyexperimental.

核酸疫苗（nucleicacidvaccines)：23

AttributesofDNAvaccines

EffectiveatbothCellularandhumoralimmuneresponses;Long-livedprotection;Easyandinexpensivetomanufacture;Stable;Safe.

Attrib24多肽疫苗(peptidevaccines)：

Generalizedmembrane-boundproteinwithexternalepitopes根据抗原蛋白的抗原表位合成的疫苗。多肽疫苗(peptidevaccines)：25免疫保护机制明确病毒易于培养传统疫苗免疫保护机制不清楚可能诱导免疫病理反应有潜在致肿瘤作用病毒不易进行培养新型疫苗免疫保护机制明确传统疫苗免疫保护机制不清楚新型疫苗26第二节

病毒感染的实验室诊断第二节27举例:常见临床症状与相关病毒上呼吸道感染:鼻病毒、合胞病毒、腺病毒、冠状病毒、腮腺炎病毒、流感病毒、副流感病毒、肠道病毒、呼肠病毒…病毒性腹泻:轮状病毒、诺瓦克病毒、腺病毒、冠状病毒…肝炎:肝炎病毒、巨细胞病毒、EB病毒、柯萨奇病毒A4,9，B5型、埃可病毒4,9型…皮疹：麻疹病毒、风疹病毒、人类疱疹病毒6型、柯萨奇病毒A4-6,9,16型、埃可病毒2,4,6,9,11,16,18型…举例:常见临床症状与相关病毒上呼吸道感染:鼻病毒、合胞病28病毒感染的实验室检查病毒的分离与鉴定病毒核酸的直接检出病毒抗原的直接检出特异性抗体的检测病毒感染的实验室检查病毒的分离与鉴定29一、标本的采集与送检供病毒分离、核酸和抗原检出的标本

早：在发病初期（急性期）采集近：在病变部位取样快：采得的新鲜标本应尽快冷藏送检多:标本的量不能太少,一次取多种标本净:加入抗生素,避免标本污染…一、标本的采集与送检供病毒分离、核酸和抗原检出的标本早：30鼻咽洗漱液或咯痰粪便脑脊液病灶组织血液……呼吸道感染肠道感染脑内感染皮肤感染有病毒血症……鼻咽洗漱液或咯痰呼吸道感染31

供特异性抗体检测的标本采取急性期和恢复期双份血清(IgG)血清标本放4℃保存.长期-20℃检测前血清标本56℃30分钟处理供特异性抗体检测的标本采取急性期和恢复期双份血清(IgG32采取标本的时期检查病毒及其成分

测定抗体潜伏期及前驱期刚发病或急性期恢复期及康复期较难查见最多查见很难查见未增多未增多或增多不明显明显增多（常超过4倍）病毒检材采集与检验结果的关系采取标本的时期检查病毒及其成分测定抗体潜伏期及前驱期较难33二、病毒的分离与鉴定意义：从病变部位或血液中分离到病毒是病毒性疾病诊断的金标准。

However

耗时长，一般只能做回顾性诊断成本和技术要求高敏感性不高有些病毒无法或极难培养，不同的病毒需要不同的分离方法二、病毒的分离与鉴定意义：从病变部位或血液中分离到病毒是病34病毒分离鉴定的一般程序待检标本→杀灭杂菌→接种易感的动物→出现病状鸡胚→病变或死亡细胞培养→细胞病变→鉴定病毒病毒分离鉴定的一般程序待检标本→杀灭杂菌→接种易感的动物→35

病毒分离培养的方法动物接种:最早最原始的病毒培养方法.鸡胚接种:用受精孵化的活鸡胚

细胞培养:用分散的活细胞,适于绝大多数病毒的培养.病毒分离培养的方法动物接种:最早最原始的病毒培养方法.36

根据细胞的来源、染色体特征及传代次数将培养细胞分为三类：1）原代细胞：直接从动物或人的组织中分离获得的细胞。2）二倍体细胞：细胞染色体维持正常的二倍体数目，经有限次数的传代后逐渐衰老死亡的细胞。3）传代细胞：具有无限繁殖能力，能反复进行传代的细胞。根据细胞的来源、染色体特征及传代次数37

分离病毒的鉴定1.

病毒在细胞内增殖的指征细胞病变效应（cytopathiceffect,CPE):

指某些病毒在细胞内增殖时引起的特有的细胞病变。包括……分离病毒的鉴定1.病毒在细胞内增殖的指征细胞病变效应（38fibroblasticcells-herpessimplexvirusuninfectedearlyinfectionlate

infectionslidesfromCDCfibroblasticcells-herpessi39epithelialcells-respiratorysyncytialvirusuninfectedrespiratorysyncytialvirusslidesfromCDCepithelialcells-respiratory40

分离病毒的鉴定1.

病毒在细胞内增殖的指征细胞病变效应（cytopathiceffect,CPE):

红细胞吸附现象(hemadsorption):

流感病毒和某些副粘病毒感染细胞后24-48小时，细胞膜上出现病毒的血凝素，能吸附豚鼠、鸡等动物及人的红细胞，发生红细胞吸附现象。分离病毒的鉴定1.病毒在细胞内增殖的指征细胞病变效应（41

分离病毒的鉴定1.

病毒在细胞内增殖的指征细胞病变效应（cytopathiceffect,CPE):

红细胞吸附现象(hemadsorption):干扰现象（interference):细胞代谢的改变：……分离病毒的鉴定1.病毒在细胞内增殖的指征细胞病变效应（422.病毒形态和结构的观察3.血清学鉴定4.病毒感染性的定量测定

蚀斑形成单位测定半数感染量测定Virustiter

病毒效价滴度2.病毒形态和结构的观察3.血清学鉴定4.病毒感染性的43蚀斑：病毒在细胞内复制后形成的肉眼可见的局限性病灶。蚀斑形成单位(plaqueformingunit,pfu)：

由一个感染性病毒体复制而形成的蚀斑。PFU/ml蚀斑：病毒在细胞内复制后形成的肉眼可见的局限性病灶。44蚀斑形成单位测定蚀斑形成单位测定45半数感染量(ID50,50%infectivedose):

病毒感染动物、鸡胚或细胞后，引起50%发生死亡或病变的最小病毒剂量。用来估算病毒感染性的强弱或含量。LD50=50%lethaldoseEID50=50%egginfectivedoseTCID50=50%tissuecultureinfectivedose)半数感染量(ID50,50%infectivedose46三、病毒核酸的直接检出核酸杂交多聚酶链式反应优、缺点意义：病毒核酸阳性一般可作为诊断病毒感染的依据.三、病毒核酸的直接检出核酸杂交优、缺点意义：病毒核酸阳性一47四、病毒抗原的直接检出基本原理：标记的抗病毒抗体与相应的病毒抗原结合或反应，通过某种指示系统显示病毒抗原的存在。意义:：对大多数病毒而言，病毒抗原阳性一般可作为诊断急性病毒感染的依据。该方法能用于早期快速诊断病毒感染，特别适用于临床.四、病毒抗原的直接检出基本原理：标记的抗病毒抗体与相应的病毒48MoleculesusedtolabelantibodiesandtechniquesusedtodetectthemMoleculesusedtolabelantibo49五、特异性抗体的检测基本原理:已知的病毒抗原和相应的抗体特异性地结合或反应，通过某种指示系统显示病毒抗体的存在。意义：恢复期血清中抗病毒抗体滴度≥4倍升高有诊断意义；血清抗病毒IgM抗体阳性可作为诊断该病毒近期感染的依据.

不能用于早期诊断用于流行病学调查五、特异性抗体的检测基本原理:已知的病毒抗原和相应的抗体特异50中和试验(neutralizingtest,NTtest)病毒在活体内或细胞培养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验..

补体结合试验（complementfixationtest,CFtest)

血凝抑制试验（hemagglutinationinhibitiontest,HItest)IgM捕捉ELISA中和试验(neutralizingtest,NTtes51六、病毒感染的快速检测指直接从标本中检测病毒或其成分、IgM等，快速得出结果。形态学检查病毒抗原检查检测病毒核酸特异性IgM检测六、病毒感染的快速检测指直接从标本中检测病毒或其52第三节抗病毒治疗第三节抗病毒治疗53

*抗病毒化学制剂----抑制病毒复制

*

抗病毒生物制剂----抗病毒、提高机体的免疫应答

*抗病毒化学制剂----抑制病毒复制

54一、抗病毒化学制剂

核苷类似物（Nucleotideanalogues）疱疹净病毒唑叠氮胸苷双脱氧肌苷一、抗病毒化学制剂核苷类似物（Nucleotideana55如：碘尿苷(IDU,疱疹净)与脱氧胸苷竞争，掺入病毒DNA分子对选择性不强，对细胞有一定毒性。（皮肤疱疹、痘病毒感染）

核苷类似物如：碘尿苷(IDU,疱疹净)核苷类似物56如：无环鸟苷(acyclovir,ACV,阿昔洛韦)

对病毒选择性高，对细胞毒性小。（HSV,VZV)如：无环鸟苷(acyclovir,ACV,阿昔洛韦)57如：叠氮胸苷(Azidothymidine,AZT)

脱氧胸苷类似物与逆转录酶有强亲和力，但也抑制细胞DNA合成。如：拉米夫定(Lamivudine,3TC)

脱氧胞苷类似物

抑制逆转录酶（HIV,HBV）如：双脱氧肌苷，双脱氧胞苷

抑制逆转录酶（HIV）

如：叠氮胸苷(Azidothymidine,AZT)58

病毒酶抑制剂蛋白酶抑制剂逆转录酶抑制剂整合酶抑制剂神经氨酸酶抑制剂病毒DNA聚合酶抑制剂阻止病毒的脱壳(流感病毒)

金刚烷胺（Amantadine）甲基金刚烷胺(Rimantadine)

核苷类似物一、抗病毒化学制剂病毒酶抑制剂蛋白酶抑制剂逆转录酶抑制剂阻止病毒的59

部分有疗效的抗病毒药物：HSV----无环鸟苷(Acyclovir)

VZV----无环鸟苷(Acyclovir)

CMV----丙氧鸟苷(Gancyclovir),甲酸磷霉素（Foscarnet)

AIDS----叠氮胸苷(Zidovudine),双脱氧肌苷（didanosine）,Proteaseinhibitors，……

（incombination）

HBV----拉米夫定(Lamivudine)

RSV----病毒唑(Ribavirin)

Influenza----金刚烷胺(Amantadine)

部分有疗效的抗病毒药物：60二、抗病毒生物制剂干扰素（Interferon,IFN）及干扰素诱生剂胸腺肽（Thymosinα1）：通过对T细胞的免疫调控作用而清除病毒感染、增强免疫。白细胞介素2（Interleukin2,IL-2）：能诱导和增强NK、T细胞、单核细胞和巨噬细胞的活力，以及抗体依赖的Tc杀伤力。病毒特异性免疫球蛋白二、抗病毒生物制剂干扰素（Interferon,IFN）61中草药防治病毒感染：如黄芪、板蓝根、大青叶等也具有抑制病毒复制作用。作用机理在研究中。抗病毒基因治疗：作用靶位—病毒核酸

三、其他抗病毒治疗方法中草药防治病毒感染：如黄芪、板蓝根、大青叶等也具有抑制病毒复62第四章病毒感染的预防、诊断和治疗第四章病毒感染的预防、诊断和治疗63第一节

病毒性疾病的预防病毒感染的预防、诊断和治疗第一节病毒感染的预防、诊断和治疗64Preventionisbetterthan

cure!良好的公众健康

预防接种Vaccinationisakeytoolagainstviraldiseases.有效的公共措施适当的营养良好的个人卫生习惯Preventionisbetterthancure65病毒疫苗人类运用病毒疫苗的历史：1796年EdwardJenner用牛痘预防天花感染；1884年LouisPasteur制备狂犬疫苗；20世纪30年代抗黄热病、流感病毒疫苗出现；此后，大量病毒疫苗问世，实施大规模预防接种。

免疫是20世纪在公共卫生上的最伟大的胜利。

病毒疫苗人类运用病毒疫苗的历史：66计划免疫（第一类疫苗）自费免疫（第二类疫苗）计划免疫的主要内容是“接种五苗防七病”，即：按照免疫程序，对7周岁以下儿童有计划地进行卡介苗、脊髓灰质炎减毒活疫苗、百白破三联混合制剂、麻疹疫苗和乙肝疫苗的基础免疫及加强免疫接种。另一部分国家没有纳入计划免疫范畴。例如，预防水痘、甲肝等疾病的疫苗。我国的疫苗接种计划免疫（第一类疫苗）计67

1980年WHO宣布已在全世界范围内消灭天花。脊髓灰质炎病毒、麻疹病毒也将随后灭绝.1980年WHO宣布已在全世界范围内消灭天花。68导致某种病毒灭绝的必要因素是什么？该病毒必须没有可替代的宿主；感染或接种必须能产生维持一生的持久免疫力。导致某种病毒灭绝的必要因素是什么？该病毒必须没有可替代的宿主69Attributesofagoodvaccine

1.Abilitytoelicittheappropriateimmuneresponsefortheparticularpathogen2.Longtermprotection

ideallylife-long

3.Safety

vaccineitselfshouldnotcausedisease

4.Stable

5.InexpensiveAttributesofagoodvaccine70病毒疫苗根据其存在状态和化学组成可分为：活疫苗(减毒活疫苗、重组活病毒载体疫苗）灭活疫苗亚单位疫苗（基因工程疫苗）DNA疫苗多肽疫苗……病毒疫苗根据其存在状态和化学组成可分为：活疫苗(减毒活疫苗、71减毒活疫苗(liveattenuatedvaccine)指通过不同的方法手段使病毒的毒力即致病性减弱或丧失。疫苗由完整的活病毒组成。如麻疹疫苗、脊髓灰质炎疫苗（Sabin苗）减毒活疫苗(liveattenuatedvaccine)72如何获得减毒株？野毒株在非自然宿主中反复传代如何获得减毒株？野毒株在非自然宿主中反复传代733型减毒脊髓灰质炎病毒P3/Leon/37(分离自严重瘫痪病人）invivo繁殖21代（猴脑内）invitro培养8代（猴睾丸培养物）invitro培养39代（猴肾培养物）病斑纯化3次（猴肾培养物）invitro培养3代(制备，猴肾培养物）Sabin疫苗株P3/Leon12a1bKP3/563型减毒脊髓灰质炎病毒活疫苗Sabin的由来Sabin疫苗株P3/Leon12a1bKP3/563型74如何获得减毒株？野毒株在非正常宿主中反复传代冷适应病毒株（ts株）如流感疫苗

重组病毒株如轮状病毒疫苗反向遗传学方法如何获得减毒株？野毒株在非正常宿主中反复传代冷适应病毒株75Attributesofliveattenuatedvaccines

Immuneresponse

BothCellMediatedImmunityandantibodyresponses.ImmunityislonglivedSingledose

Safety

Dangerofreversiontovirulence,orSeverediseaseinimmunocompromisedAttributesofliveattenuated76Stability

OrganismsinthevaccinemustremainviableinordertoinfectandreplicateinthehostVaccinepreparationsarethereforeverysensitivetoadversestorageconditionsMaintenanceofthecoldchainisveryimportant.

Expense

CheaptoprepareAttributesofliveattenuatedvaccines

(continued)StabilityExpenseAttributeso77重组活病毒载体疫苗将编码某一蛋白抗原的基因转入减毒的病毒的基因组而制成的疫苗.重组活病毒载体疫苗将编码某一蛋白抗原的基因转入减毒的病毒的基78灭活病毒疫苗(inactivatedvirusvaccines)

指用灭活剂处理活的病毒，使其失去感染性，但仍然保留病毒的全部或部分免疫原性。是由完整病毒组成。如流感灭活疫苗、狂犬疫苗指用灭活剂处理活的病毒，使其失去感染性，但仍然保留病79

Mostwidelyusedmethodsofinactivation:

Formaldehyde甲醛

Propiolactoneß-丙酸内酯Ethyleneoxide环氧乙烷Thesesubstancesproducecrossedlinkinginthenucleicacidchains,inactivatingthevirionbutnotitsproteins.Mostwidelyusedmethodsof80Attributesofinactivatedvaccines

Immuneresponse

poor;

onlyantibody-nocellmediatedimmuneresponse.responseisshort-livedandmultipledosesareneeded.maybeenhancedbytheincorporationofadjuvantsintothevaccinepreparation.Safety

Inactivated,thereforecannotreplicateinthehostandcausedisease.Localreactionsatthesiteofinjectionmayoccur.

Attributesofinactivatedvacc81Attributesofinactivatedvaccines(continued)Stability

Efficacyofthevaccinedoesnotrelyontheviabilityoftheorganisms.Thesevaccinestendtobeabletowithstandmoreadversestorageconditions.

Expense

Expensivetoprepare.Attributesofinactivatedvac82亚单位疫苗(subunitvaccine)：用纯化的病毒抗原性组分而不是全病毒作疫苗。如乙肝疫苗:Canbepurifiedfromorganism(血源疫苗)Canberecombinantprotein(基因工程疫苗)亚单位疫苗(subunitvaccine)：用纯83Attributesofsubunitvaccine:

Similartoinactivatedvaccine:stable,poorimmunogenicity,expensive……Safeandfewerlocalreactionsoccurattheinjectionsite.Attributesofsubunitvaccine:84核酸疫苗（nucleicacidvaccines)：

将能引起机体保护性免疫反应的病原体抗原的编码基因克隆入表达载体，将其直接导入机体细胞后，通过宿主细胞的转录系统表达蛋白抗原，诱导宿主产生特异性细胞免疫和体液免疫应答。Onlyexperimental.

核酸疫苗（nucleicacidvaccines)：85

AttributesofDNAvaccines

EffectiveatbothCellularandhumoralimmuneresponses;Long-livedprotection;Easyandinexpensivetomanufacture;Stable;Safe.

Attrib86多肽疫苗(peptidevaccines)：

Generalizedmembrane-boundproteinwithexternalepitopes根据抗原蛋白的抗原表位合成的疫苗。多肽疫苗(peptidevaccines)：87免疫保护机制明确病毒易于培养传统疫苗免疫保护机制不清楚可能诱导免疫病理反应有潜在致肿瘤作用病毒不易进行培养新型疫苗免疫保护机制明确传统疫苗免疫保护机制不清楚新型疫苗88第二节

病毒感染的实验室诊断第二节89举例:常见临床症状与相关病毒上呼吸道感染:鼻病毒、合胞病毒、腺病毒、冠状病毒、腮腺炎病毒、流感病毒、副流感病毒、肠道病毒、呼肠病毒…病毒性腹泻:轮状病毒、诺瓦克病毒、腺病毒、冠状病毒…肝炎:肝炎病毒、巨细胞病毒、EB病毒、柯萨奇病毒A4,9，B5型、埃可病毒4,9型…皮疹：麻疹病毒、风疹病毒、人类疱疹病毒6型、柯萨奇病毒A4-6,9,16型、埃可病毒2,4,6,9,11,16,18型…举例:常见临床症状与相关病毒上呼吸道感染:鼻病毒、合胞病90病毒感染的实验室检查病毒的分离与鉴定病毒核酸的直接检出病毒抗原的直接检出特异性抗体的检测病毒感染的实验室检查病毒的分离与鉴定91一、标本的采集与送检供病毒分离、核酸和抗原检出的标本

早：在发病初期（急性期）采集近：在病变部位取样快：采得的新鲜标本应尽快冷藏送检多:标本的量不能太少,一次取多种标本净:加入抗生素,避免标本污染…一、标本的采集与送检供病毒分离、核酸和抗原检出的标本早：92鼻咽洗漱液或咯痰粪便脑脊液病灶组织血液……呼吸道感染肠道感染脑内感染皮肤感染有病毒血症……鼻咽洗漱液或咯痰呼吸道感染93

供特异性抗体检测的标本采取急性期和恢复期双份血清(IgG)血清标本放4℃保存.长期-20℃检测前血清标本56℃30分钟处理供特异性抗体检测的标本采取急性期和恢复期双份血清(IgG94采取标本的时期检查病毒及其成分

测定抗体潜伏期及前驱期刚发病或急性期恢复期及康复期较难查见最多查见很难查见未增多未增多或增多不明显明显增多（常超过4倍）病毒检材采集与检验结果的关系采取标本的时期检查病毒及其成分测定抗体潜伏期及前驱期较难95二、病毒的分离与鉴定意义：从病变部位或血液中分离到病毒是病毒性疾病诊断的金标准。

However

耗时长，一般只能做回顾性诊断成本和技术要求高敏感性不高有些病毒无法或极难培养，不同的病毒需要不同的分离方法二、病毒的分离与鉴定意义：从病变部位或血液中分离到病毒是病96病毒分离鉴定的一般程序待检标本→杀灭杂菌→接种易感的动物→出现病状鸡胚→病变或死亡细胞培养→细胞病变→鉴定病毒病毒分离鉴定的一般程序待检标本→杀灭杂菌→接种易感的动物→97

病毒分离培养的方法动物接种:最早最原始的病毒培养方法.鸡胚接种:用受精孵化的活鸡胚

细胞培养:用分散的活细胞,适于绝大多数病毒的培养.病毒分离培养的方法动物接种:最早最原始的病毒培养方法.98

根据细胞的来源、染色体特征及传代次数将培养细胞分为三类：1）原代细胞：直接从动物或人的组织中分离获得的细胞。2）二倍体细胞：细胞染色体维持正常的二倍体数目，经有限次数的传代后逐渐衰老死亡的细胞。3）传代细胞：具有无限繁殖能力，能反复进行传代的细胞。根据细胞的来源、染色体特征及传代次数99

分离病毒的鉴定1.

病毒在细胞内增殖的指征细胞病变效应（cytopathiceffect,CPE):

指某些病毒在细胞内增殖时引起的特有的细胞病变。包括……分离病毒的鉴定1.病毒在细胞内增殖的指征细胞病变效应（100fibroblasticcells-herpessimplexvirusuninfectedearlyinfectionlate

infectionslidesfromCDCfibroblasticcells-herpessi101epithelialcells-respiratorysyncytialvirusuninfectedrespiratorysyncytialvirusslidesfromCDCepithelialcells-respiratory102

分离病毒的鉴定1.

病毒在细胞内增殖的指征细胞病变效应（cytopathiceffect,CPE):

红细胞吸附现象(hemadsorption):

流感病毒和某些副粘病毒感染细胞后24-48小时，细胞膜上出现病毒的血凝素，能吸附豚鼠、鸡等动物及人的红细胞，发生红细胞吸附现象。分离病毒的鉴定1.病毒在细胞内增殖的指征细胞病变效应（103

分离病毒的鉴定1.

病毒在细胞内增殖的指征细胞病变效应（cytopathiceffect,CPE):

红细胞吸附现象(hemadsorption):干扰现象（interference):细胞代谢的改变：……分离病毒的鉴定1.病毒在细胞内增殖的指征细胞病变效应（1042.病毒形态和结构的观察3.血清学鉴定4.病毒感染性的定量测定

蚀斑形成单位测定半数感染量测定Virustiter

病毒效价滴度2.病毒形态和结构的观察3.血清学鉴定4.病毒感染性的105蚀斑：病毒在细胞内复制后形成的肉眼可见的局限性病灶。蚀斑形成单位(plaqueformingunit,pfu)：

由一个感染性病毒体复制而形成的蚀斑。PFU/ml蚀斑：病毒在细胞内复制后形成的肉眼可见的局限性病灶。106蚀斑形成单位测定蚀斑形成单位测定107半数感染量(ID50,50%infectivedose):

病毒感染动物、鸡胚或细胞后，引起50%发生死亡或病变的最小病毒剂量。用来估算病毒感染性的强弱或含量。LD50=50%lethaldoseEID50=50%egginfectivedoseTCID50=50%tissuecultureinfectivedose)半数感染量(ID50,50%infectivedose108三、病毒核酸的直接检出核酸杂交多聚酶链式反应优、缺点意义：病毒核酸阳性一般可作为诊断病毒感染的依据.三、病毒核酸的直接检出核酸杂交优、缺点意义：病毒核酸阳性一109四、病毒抗原的直接检出基本原理：标记的抗病毒抗体与相应的病毒抗原结合或反应，通过某种指示系统显示病毒抗原的存在。意义:：对大多数病毒而言，病毒抗原阳性一般可作为诊断急性病毒感染的依据。该方法能用于早期快速诊断病毒感染，特别适用于临床.四、病毒抗原的直接检出基本原理：标记的抗病毒抗体与相应的病毒110MoleculesusedtolabelantibodiesandtechniquesusedtodetectthemMoleculesusedtolabelantibo111五、特异性抗体的检测基本原理:已知的病毒抗原和相应的抗体特异性地结合或反应，通过某种指示系统显示病毒抗体的存在。意义：恢复期血清中抗病毒抗体滴度≥4倍升高有诊断意义；血清抗病毒IgM抗体阳性可作为诊断该病毒近期感染的依据.

不能用于早期