基于TLR4NF-κB信号通路的苏木乙酸乙酯提取物抗动脉粥样硬化作用机制研究

基于TLR4/NF-κ信号通路苏木乙酸酯提取物动脉粥样硬化作用机研究目的:通过建立动物模型及LPS诱导的内皮细胞损伤模型,应用苏木乙酸乙酯提取物进行干预,观察其与TLR4/NF-κ

B号通路的关系,探讨苏木乙酸乙酯提取物抗AS的作用机理方法实验一:将60只体重在200±20gSPF级SD大鼠随机分为6组,每组10只。分别为空白对照组、模型对照组、苏木低剂量组、苏木中剂量组、苏木高剂量组和辛伐他汀组。空白对照组给予普通饲料喂养其余5组给予腹腔注射维生素D3联合高脂饲料喂养进行模型复制。12周后空白对照组模型对照组给予等体积羧甲基纤维素钠悬浊液灌胃其余4组分别给予相应剂量的苏木乙酸乙酯提取物悬浊液和辛伐他汀悬浊液灌胃每日给药1次,连续给药4周。HE染色法观察大鼠腹主动脉病理形态学的变化;全自动生化分析仪测定血清TGTC、LDL-C、HDL--C水平;ELISA法检测血清IL-1β含量;实时荧光定量PCR法检测主动脉、NF-κBp65mRNA的表达。实验二:将HUVECs分为7组,分别为空白对照组、模型对照组、苏木低剂量组、苏木中剂量组、苏木高剂量组、辛伐他汀组和苏木预防组。采LPS溶液(1μg/mL)处理12h诱导内皮细胞损伤进行模型复制。空白对照组细胞正常培养模型对照组细胞进行模型复制后正常培养12h;苏木低、中、高剂量和辛伐他汀组细胞进行模型复制后分别加入苏木乙酸乙酯提取物低、中、高剂量含药血清和辛伐他汀含药血清治疗苏木预防组细胞用苏木中剂量含药血清预处理12h,加入溶液处理内皮细胞察各

组内皮细胞形态的改变;流式细胞仪检测内皮细胞的凋亡ELISA法观察细胞上清TNF-α水平;实时荧光定量PCR法检测细胞、NF-κ表达;Western-blot法检测TLR4、NF-KBp65蛋白的表达。

Bp65mRNA的结果:1.大鼠腹主动脉病理形态结果显示:苏木低剂量组苏木中剂量组苏木高剂量组伐他汀组内皮细胞轻度肿胀,中层平滑肌细胞排列轻度紊乱,细胞核数量增多,与模型对照组比较,病理损伤减轻。大鼠血脂结果显示与模型对照组比较,苏木中剂量组、苏木高剂量组、辛伐他汀组大鼠血清、TC、LDL-C含量降低,差异有统计学意义(P><0.05);木低剂量组大鼠血清LDL-C含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。3.大鼠血清ELISA结果显示:与模型对照组比较,苏木低剂量组木中剂量组、苏木高剂量组、辛伐他汀组大鼠血清IL-1β含量降低,差异有显著统计学意义(P<0.05)大鼠腹主动脉RealTimePCR果显示:与模型对照组比较,苏木中剂量组、苏木高剂量组、辛伐他汀组mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。5.细胞凋亡结果显示:与模型对照组比较,苏木中剂量组苏木高剂量组辛代他汀组、苏木预防组细胞调亡比例降低,差异有统计学意义(P<0.05)。6.细胞上清ELISA结果显示:与模型对照组比较苏木中剂量组苏木高剂量组辛伐他汀组、苏木预防组TNF-α含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)7.细胞RealTimePCR果显示:与模型对照组比较,苏木中剂量组、苏木高剂量组、辛伐他汀组、苏木预防组TLR4mRNA、NF-κ

Bp65mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。8.细胞WesternBlot结果显示:与模型对照组比较,苏木中剂量组苏木高剂量组辛伐他汀组苏木预防组细胞NF-κ

B

p65蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)结论:1.苏木乙酸乙酯提取物能改善模型大鼠腹主动脉病理损伤,降低模型大鼠血清TGTCLDL-CIL-1β含量2.苏木乙酸乙酯提取物能够改善LPS诱导内皮损伤细胞形态,降低内皮细胞凋亡率降低细胞上清TNF-α含量。3.苏木乙酸乙酯提取物能够