《酶工程》课程实验教学大纲

《酶工程》课程实验教学大纲承担单位生物与制药工程学院承担单位生物与制药工程学院承担实验室生物工程实验室先修课程生物化学适用对象制药工程（生物药剂工程）专业。实验教材和主要参考资料1月参考资料：61课程代码课程类别专业任选课课程性质任选课课程学时数54实验学时数12课程学分数3二、实验课程简介三、实验教学目的和基本要求四、实验内容与学时分配计项目序号实验项目名称实验类别划学实验类型实验要求时1 淀粉酶动力学分析专业任选课4验证必修2 淀粉酶的离子交换层析专业任选课2验证必修3 SOD的提取和分离专业任选课2验证必修4 尼龙固定化木瓜蛋白酶专业任选课2验证必修5 果胶酶在果汁生产中的作用专业任选课2验证必修五、实验方式及具体要求课堂教学与实验教学结合。课堂教学合班上课，实验课分小班进行，每4安排每个人动手。通过实际操作巩固掌握教材相关理论知识。六、考核方法20%。主要考察学生每次实验的表现：动手操作能七、实验内容安排【实验一】淀粉酶动力学分析 （4学时一、实验目的：二、实验要求：三、实验步骤：11318×180mmpH5.0α-淀粉酶溶液，50℃102、酶反应速度测定：酶反应液稀释一定倍数（51mL4mL1mLDNS2min500mL（注意换冷水9.0mL，540nm。3、酶反应动力学分析：分析酶反应动力学。【实验二】淀粉酶的离子交换层析（2一、实验目的：通过实验，掌握离子交换柱层析法的基本操作技术。二、实验要求：掌握离子交换柱层析法的基本操作技术。三、实验步骤：11cm，20cm15cm2、平衡并调整流速：在层析柱中充满平衡缓冲液，将上端柱头旋紧，用大约20ml平衡缓冲液平衡树脂，同时将流速调整为2.0ml/min。30.5ml，打开出口，让样品进入树脂，同时开0.5ml0.5ml42.0ml/min50ml50ml50ml3min6ml，A280nm。5、绘制洗脱曲线，收集吸收峰的试管。【实验三】大蒜细胞SOD（2一、实验目的：SOD二、实验要求：SOD三、实验步骤：1、组织细胞破碎：将新鲜的大蒜用大量清水洗净，再用蒸馏水洗净，滤纸40g（录体积，测酶活性和蛋白浓度）。2、有机溶剂除杂蛋白：上清液加1～1.1倍体积去离子水，再分别缓慢加入0.2595%0.1515min30min（4℃），4000r/min20min（5000rpm15min）性蛋白沉淀，收集滤液，过滤（记录体积，测酶活性和蛋白浓度）。360℃15min，使杂蛋白热10000rpm10min，收集上清液（蛋白浓度）。4、SOD-5℃以下的操作温度下，1.52～3min，4000r/min离心除去不溶物。上清液装入透析袋用pH7.62.5mmol/LK2HPO4-KH2PO4SOD（记录体积，测酶活性和蛋白浓度）。【实验四】尼龙固定化木瓜蛋白酶（2学时）一、实验目的：二、实验要求：掌握固定化酶的方法。三、实验步骤：1(1)518.6%CaCl218.6%10s粘。取出后用水冲去污物，用吸水纸吸干。(23.65mol/LHCI45min，PH(3)5%戊二醛溶液在20min。(4)0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.8)反复洗涤，洗去多余的戊二醛，吸干之后，立即用酶液(0.5～1mg/mL)在4℃下3.5h(0.8mL)(5)从酶液中取出尼龙布(保留0.5mol/LNaCl0.1mol/L(pH7.2)配制)，洗去多余的酶蛋白，即为尼龙固定化酶。2、酶活力测定(1)0.2mL1.8mL37℃10min37℃0.5%1mL，10min，10%2.0mL10%4000r/min5min280nm10min0.0011(U)(以下同)。(2)残留酶活力测定：方法同溶液酶活力测定。(3)2.0mL【实验五】果胶酶在果汁生产中的作用（2一、实验目的：探究不同温度对果胶酶活性的影响，探究不同pH对果胶酶活性的影响，探究果胶酶的用量对果汁生产的影响。二、实验要求：三、实验步骤：1a.制备果汁选取一个中等大小的苹果(约200g)200mL得到果汁；b99分别放入30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃的水浴锅10；d.过滤果汁用量筒测量果汁的里量，并记录数据2pH制备果汁；b.5等量的果汁和果胶酶；c.540℃恒温水浴锅中加热；d.5PH、6、7、8、9；e.10min；f.过滤果汁用量筒测量果汁的里量，并记录数据。3、果胶酶的用量对果汁生产的影响：a.配制不同浓度的果胶酶溶液:准确1mg2mg3mg4mg5mg6mg7mg8mg9mg9