单克隆抗体制备技术课件

第四节单克隆抗体

第四节单克隆抗体

1

理化性状高度均一、生物活性单一、只与一种抗原表位发生发应、具有高度的特异性一、单克隆抗体的概念及特点概念：特点：

指由B细胞杂交瘤产生的,只识别抗原分子上一种抗原决定簇的抗体分子理化性状高度均一、生物活性单一、只与一种抗原2由一个B细胞杂交瘤细胞分裂增殖，形成的单克隆所产生的抗体。二、杂交瘤技术的原理及流程克隆：由一个细胞进行无性分裂增殖，形成的均一细胞集团。单克隆抗体：由一个B细胞杂交瘤细胞分裂增殖，形成的单克隆所产生的抗体。3

B细胞杂交瘤1.杂交瘤技术的原理：致敏B细胞骨髓瘤细胞B细胞杂交瘤分泌抗体能力无限繁殖能力融合B细胞杂交瘤1.杂交瘤技术的原理：致敏B细胞骨髓瘤细胞4

是B细胞系恶性肿瘤，具有在体外长期增殖的特性。

免疫脾细胞是经过抗原诱导活化的脾细胞，主要是B淋巴细胞，它具有分泌抗体的能力。骨髓瘤细胞是B细胞系恶性肿瘤，具有在体外长期增殖的特性。免疫5与B细胞融合后形成稳定的杂交瘤细胞，能无限增殖传代和分泌特异性抗体缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤转换酶（HGPRT）和胸腺嘧啶激酶（TK）的条件该具备骨髓瘤细胞应与B细胞有较高的融合率本身不合成Ig与B细胞融合后形成稳定的杂交瘤细胞，能无限增殖传代和分泌特异62.细胞融合的方法融合剂融合法

聚乙二醇（PEG）（最常用）仙台病毒溶血卵磷脂2.细胞融合的方法融合剂融合法聚乙二醇仙台病毒溶血卵磷73.选择性培养基的作用原理①HAT培养基是一种筛选B细胞杂交瘤的选择性培养基，含有：次黄嘌呤（H）氨基蝶呤（A）胸腺嘧啶（T）3.选择性培养基的作用原理①HAT培养基是一种筛选B细胞8辅助途径

主要途径HGPRTTK次黄嘌呤+胸腺嘧啶DNA

②细胞DNA生物合成途径氨基酸

核苷酸

DNA叶酸辅助途径主要途径HGPRTTK次黄嘌呤+胸腺嘧啶DNA②9TK缺陷细胞+-HGPRT缺陷细胞+-杂交瘤细胞++

细胞类型正常培养基HAT培养基

③HAT培养基作用原理TK缺陷细胞+10HAT培养基中的氨基蝶呤为叶酸拮抗剂，故所有细胞的DNA合成主要途径被阻断，只能由辅助途径合成DNA。

未融合的瘤细胞因缺乏HGPRT和TK，不能合成DNA，即不能生存而死亡。HAT培养基中的氨基蝶呤为叶酸拮抗剂，故所有细胞的DNA11只有融合的杂交瘤细胞从B细胞中获得了HGPRT和TK，又能在体外培养繁殖，因而存活。未融合的B细胞不能在体外长期生存而自然死亡只有融合的杂交瘤细胞从B细胞中获得了HGPRT和TK，又能在124.制备单克隆抗体的技术流程（一）杂交瘤技术流程4.制备单克隆抗体的技术流程（一）杂交瘤技术流程13融合前应经过含有特殊成分的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT或TK的活性。（二）技术要点

①制备免疫脾细胞同一般血清的制备采用脾内直接免疫

③细胞融合条件

②筛选骨髓瘤细胞

④选择阳性克隆无菌、温度、瘤细胞与脾细胞的比例、50%PEG

融合前应经过含有特殊成分的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复H14根据抗原的性质及所需单克隆抗体的功能，常用方法有RIA、ELISA、免疫荧光等，鉴定抗体的特异性、亲和力、纯度等。根据抗原的性质及所需单克隆抗体的功能，15

克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体。要尽早进行、反复筛选。因初期杂交瘤细胞不稳定，有丢失染色体的倾向。反复克隆可获得稳定的杂交瘤。常用有限稀释法，按每孔一个细胞接种在培养皿中。⑤克隆化克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体。要尽早进行、16⑥单克隆抗体的制备大量生产分体内和体外两种方法，目前以体内法为主。先给小鼠腹腔注射降植烷，造成无菌性腹膜炎，7天后将杂交瘤注入小鼠腹腔，10—14天后从小鼠腹腔获得高浓度的单克隆抗体。⑥单克隆抗体大量生产分体内和体外两种方法，目前以体内法为主。17单克隆抗体制备技术课件18接种小鼠腹腔收集腹水接种于微孔营养板，在HAT培养基中培养免疫小鼠（融合前3—4周）骨髓瘤细胞强化免疫（融合前3—4天）融合前2—4周复苏培养取脾制成细胞悬液(融合当天）

收集对数增长期细胞融合（PEG）阳性孔再次克隆化克隆扩大培养收集上清收获抗体杂交瘤细胞冻存于液氮检测抗体接种小鼠腹腔收集腹水接种于微孔营养板，在HAT培养基中培养免19三、单克隆抗体的应用可大量生产且稳定性好特异性强纯度高效价高无血清交叉反应1.McAb的优点：三、单克隆抗体的应用可大量生产且稳定性好特异性强纯度高效价高202.McAb的应用（5）细胞因子测定

放射免疫酶免疫荧光免疫免疫组化试剂盒（1）病原微生物抗原、抗体的检测（2）肿瘤抗原的检测（3）免疫细胞及其亚群的检测（4）激素测定医学检验诊断试剂2.McAb的应用（5）细胞因子测定放射免疫酶21（2）放射免疫显像：将放射性标记物与McAb连接，注入患者体内可进行放射免疫显像，以诊断早期肿瘤的小转移灶，或用于术前定位及术后追踪观察。（1）导向治疗作用：用McAb或连接药物、毒素的McAb治疗肿瘤，称“免疫导弹”。目前在动物实验中已获满意效果。蛋白质的提纯McAb作为配体，用于分离纯化相应抗原肿瘤导向治疗和射免显像技术（2）放射免疫显像：将放射性标记物与McAb连接，注入患者22第五节

基因工程抗体技术

基因工程抗体又称重组抗体，是指应用NDA重组及蛋白工程技术对编码抗体的基因按不同的需要进行改造和装配，经导入适当的受体细胞后重新表达的抗体。

第五节

基因工程抗体技术

23目前临床上使用的单克隆抗体和多克隆抗体均为动物源性抗体，具有免疫原性，在反复使用时常会诱导机体的免疫应答而产生抗抗体，这大大限制了异源性抗体在人体内的应用。随着基因工程技术的发展，人们逐渐可根据需要制备各种特异性的抗体，通过降低抗体的免疫原性，获得更佳的生物学活性。

目前临床上使用的单克隆抗体和多克隆抗体均为动物源性抗24目前基因工程抗体技术主要包括两部分内容：一是应用DNA重组和蛋白工程技术对已有的单抗进行改造，包括人源化抗体、小分子抗体、双价特异性抗体和抗体融合蛋白等的制备；二是用抗体库技术筛选、克隆新的单抗。

目前基因工程抗体技术主要包括两部分内容：25一、人源化抗体（一）嵌合抗体嵌合抗体（chimericantibody）又称人-鼠嵌合抗体，是从杂交瘤细胞中分离出鼠源单抗功能性V区基因，经基因重组与人抗体C区基因连接成嵌合基因后，插入适当的表达载体中，再共同转染宿主细胞，表达人-鼠嵌合抗体分子。嵌合抗体保留了单抗对抗原的特异亲和性，又含有人抗体C区的成分及其功能。

一、人源化抗体261．抗体V区基因的克隆

准确获得抗体可变区基因是制备嵌合抗体的关键所在。鼠源单抗VL和VH基因可通过以下两种方法获得：①用适当的探针从其杂交瘤细胞系的基因组文库中筛选出V区基因；②用PCR方法从该细胞的RNA或mRNA中扩增所需的V区基因。

1．抗体V区基因的克隆准确获得抗体可变区基因是制备嵌合272．抗体C区的选择

抗体恒定区基因的序列相对恒定，比较容易得到，可根据需要进行选择。如选择人IgG1或IgG3的恒定区可使嵌合抗体保留其介导抗体依赖性细胞毒作用（antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC）和增强激活补体的能力,如果抗体只是用于激活和阻断受体时，可选择人IgG2或IgG4恒定区。

2．抗体C区的选择283．表达载体的构建

为了产生具有功能活性的人-鼠嵌合抗体，需要将编码V区和C区的基因插入表达载体。

构建表达载体的方法主要有二种：①分别构建表达VL和VH基因的载体，用两个载体分别带上不同的标记基因，通过二次转染（将载体DNA导入真核细胞称为转染）选择获得嵌合抗体基因的细胞；②将VL和VH基因构建于同一载体中，这样虽然增加了重组体构建的难度，但可提高转染的成功率，同时增加表达量。

3．表达载体的构建为了产生具有功能活性的人-鼠嵌合抗体294．表达

嵌合抗体的重组基因一般利用哺乳动物细胞等进行表达。因为抗体分子需要经过正确的装配和加工等过程才能维持其生物学功能，而原核细胞等往往不能表达完整的抗体，只有哺乳动物细胞能够表达具有良好功能的抗体。

4．表达嵌合抗体的重组基因一般利用哺乳动物细胞等进行表达30（二）改形抗体改形抗体（reshapedantibody，RAb）是应用基因工程技术在嵌合抗体基础上用人抗体可变区的骨架区序列取代鼠源单抗CDR以外的骨架区序列，重新构成既有鼠源单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体，该抗体对人体几乎无免疫原性。

（二）改形抗体31二、小分子抗体小分子抗体指分子量较小但具有抗原结合功能的分子片段。它的优点表现为：①免疫原性低且分子量小，易于穿透血管或组织到靶细胞部位，可用于免疫治疗；②可在大肠杆菌等原核细胞中表达，降低生产成本；③不含FC段，不会与带有FC段受体的细胞结合，副作用小；④半衰期短，有利于中和并及时清除毒素。二、小分子抗体小分子抗体指分子量较小但具有抗原结合32（一）FabFab段由一条完整的L链以及H链的V区和CH1区组成，具有与完整抗体相同的抗原结合特性，但只有一个抗原结合位点。

小分子抗体包括：抗原结合片段（Fab）、

可变区片段（Fv）

单链抗体

（singlechainFv，ScFv）等。

（一）Fab小分子抗体包括：抗原结合片段（Fab）、

33（二）Fv和ScFvFv和ScFv是用基因工程技术构建的抗体片段。

Fv是抗体分子中保留抗原结合部位的最小功能性片段，若将抗体VL和VH通过连接肽连接为单一的肽链则称为单链抗体（ScFv）。其特点为：分子量小、穿透力强、免疫原性低、能较好的保持亲和性并易于进行遗传改造。

（二）Fv和ScFv34（三）

单域抗体又称VH结构域片段，由单个抗体VH功能区构成。一般是将抗体VH功能区基因通过基因工程技术在大肠杆菌中表达所得到的抗体片段。它与相应抗原结合的亲密程度与完整抗体的作用相似，但单域抗体的亲和力比完整抗体下降了一个数量级。

（三）

单域抗体35三、双特异性抗体双特异性抗体（bispecificantibody，BsAb）又称双功能抗体。它不同于天然抗体，其两个抗原结合部位具有不同的特异性，可以同时与两种不同特异性的抗原发生结合。BsAb可通过化学交联法或将两种杂交瘤细胞融合而制备，也可采用基因工程技术制备。

三、双特异性抗体36（一）化学交联BsAb分别分离纯化两种不同抗原的单抗，先使Ig解离后，获得单价抗体，再使两种不同抗原特异性的单价抗体或其片段交联起来。具体制备方法因实验室而异。此法易致抗体失活，其产物亦难以保证均质性。

（一）化学交联BsAb37（二）细胞工程BsAb是将两种分泌不同特异性单抗的杂交瘤细胞进行融合产生二次杂交瘤。但后者所分泌的并非均一产物，两套重链、轻链之间随机重新组合的形式可多达10种。可能仅分泌两种亲本单抗，而无BsAb形成，也可能既分泌亲本单抗又可分泌BsAb。BsAb在所有Ig形式中所占比例可为10%～50%不等。

（二）细胞工程BsAb38（三）基因工程BsAb一般采用抗体分子片段，如ScFv或Fab等，经基因操作修饰后，或在体外组装成为BsAb，或直接导入受体细胞表达为分泌型的BsAb。

（三）基因工程BsAb39四、抗体融合蛋白

抗体融合蛋白是指将抗体分子片段与其他蛋白融合所得到的产物。这种抗体融合蛋白具有多种生物学功能。例如将抗体Fab段或Fv与其他生物活性蛋白融合，就可将特定的生物学效应导向靶部位；将ScFv与某些细胞膜蛋白融合，则可形成嵌合受体，赋予特定细胞以结合抗原的能力；若将非抗体蛋白与抗体分子的Fc段融合，可改善其药代动力学特性，并可使某些生物学活性与抗体的生物学功能相联。

四、抗体融合蛋白

抗体融合蛋白是指将抗体分子片段与其他40五、抗体库技术抗体库技术是指用细菌克隆代替B细胞克隆来表达抗体谱。抗体库技术的主要特点为：①方法简单快速，与单抗制备相比，既省去细胞融合之繁琐，又避免动物免疫之局限；②选择范围广泛，抗体基因库的抗原特异性可高达108～1010；③可模拟体内免疫系统亲和力成熟过程制备高亲和力抗体；④无需人体免疫接种过程即可获得特异性人抗体；⑤大规模生产方便。

五、抗体库技术41抗体库技术的主要步骤如下：①从经免疫或未经免疫的B细胞中克隆全套抗体的VL和VH基因；②用PCR方法扩增各种抗体轻链和重链基因片段后，将其随机克隆入相应的载体形成组合文库；③转化细菌，再从表达产物中通过与抗原特异性结合的方式筛选出所需抗体并大量生产。

抗体库技术的主要步骤如下：42思考题1.名词解释:McAb，克隆2.简述杂交瘤技术的原理及流程3.简述HAT培养基的关键成分及其作用原理思考题1.名词解释:McAb，克隆43第四节单克隆抗体

第四节单克隆抗体

44

理化性状高度均一、生物活性单一、只与一种抗原表位发生发应、具有高度的特异性一、单克隆抗体的概念及特点概念：特点：

指由B细胞杂交瘤产生的,只识别抗原分子上一种抗原决定簇的抗体分子理化性状高度均一、生物活性单一、只与一种抗原45由一个B细胞杂交瘤细胞分裂增殖，形成的单克隆所产生的抗体。二、杂交瘤技术的原理及流程克隆：由一个细胞进行无性分裂增殖，形成的均一细胞集团。单克隆抗体：由一个B细胞杂交瘤细胞分裂增殖，形成的单克隆所产生的抗体。46

B细胞杂交瘤1.杂交瘤技术的原理：致敏B细胞骨髓瘤细胞B细胞杂交瘤分泌抗体能力无限繁殖能力融合B细胞杂交瘤1.杂交瘤技术的原理：致敏B细胞骨髓瘤细胞47

是B细胞系恶性肿瘤，具有在体外长期增殖的特性。

免疫脾细胞是经过抗原诱导活化的脾细胞，主要是B淋巴细胞，它具有分泌抗体的能力。骨髓瘤细胞是B细胞系恶性肿瘤，具有在体外长期增殖的特性。免疫48与B细胞融合后形成稳定的杂交瘤细胞，能无限增殖传代和分泌特异性抗体缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤转换酶（HGPRT）和胸腺嘧啶激酶（TK）的条件该具备骨髓瘤细胞应与B细胞有较高的融合率本身不合成Ig与B细胞融合后形成稳定的杂交瘤细胞，能无限增殖传代和分泌特异492.细胞融合的方法融合剂融合法

聚乙二醇（PEG）（最常用）仙台病毒溶血卵磷脂2.细胞融合的方法融合剂融合法聚乙二醇仙台病毒溶血卵磷503.选择性培养基的作用原理①HAT培养基是一种筛选B细胞杂交瘤的选择性培养基，含有：次黄嘌呤（H）氨基蝶呤（A）胸腺嘧啶（T）3.选择性培养基的作用原理①HAT培养基是一种筛选B细胞51辅助途径

主要途径HGPRTTK次黄嘌呤+胸腺嘧啶DNA

②细胞DNA生物合成途径氨基酸

核苷酸

DNA叶酸辅助途径主要途径HGPRTTK次黄嘌呤+胸腺嘧啶DNA②52TK缺陷细胞+-HGPRT缺陷细胞+-杂交瘤细胞++

细胞类型正常培养基HAT培养基

③HAT培养基作用原理TK缺陷细胞+53HAT培养基中的氨基蝶呤为叶酸拮抗剂，故所有细胞的DNA合成主要途径被阻断，只能由辅助途径合成DNA。

未融合的瘤细胞因缺乏HGPRT和TK，不能合成DNA，即不能生存而死亡。HAT培养基中的氨基蝶呤为叶酸拮抗剂，故所有细胞的DNA54只有融合的杂交瘤细胞从B细胞中获得了HGPRT和TK，又能在体外培养繁殖，因而存活。未融合的B细胞不能在体外长期生存而自然死亡只有融合的杂交瘤细胞从B细胞中获得了HGPRT和TK，又能在554.制备单克隆抗体的技术流程（一）杂交瘤技术流程4.制备单克隆抗体的技术流程（一）杂交瘤技术流程56融合前应经过含有特殊成分的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT或TK的活性。（二）技术要点

①制备免疫脾细胞同一般血清的制备采用脾内直接免疫

③细胞融合条件

②筛选骨髓瘤细胞

④选择阳性克隆无菌、温度、瘤细胞与脾细胞的比例、50%PEG

融合前应经过含有特殊成分的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复H57根据抗原的性质及所需单克隆抗体的功能，常用方法有RIA、ELISA、免疫荧光等，鉴定抗体的特异性、亲和力、纯度等。根据抗原的性质及所需单克隆抗体的功能，58

克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体。要尽早进行、反复筛选。因初期杂交瘤细胞不稳定，有丢失染色体的倾向。反复克隆可获得稳定的杂交瘤。常用有限稀释法，按每孔一个细胞接种在培养皿中。⑤克隆化克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体。要尽早进行、59⑥单克隆抗体的制备大量生产分体内和体外两种方法，目前以体内法为主。先给小鼠腹腔注射降植烷，造成无菌性腹膜炎，7天后将杂交瘤注入小鼠腹腔，10—14天后从小鼠腹腔获得高浓度的单克隆抗体。⑥单克隆抗体大量生产分体内和体外两种方法，目前以体内法为主。60单克隆抗体制备技术课件61接种小鼠腹腔收集腹水接种于微孔营养板，在HAT培养基中培养免疫小鼠（融合前3—4周）骨髓瘤细胞强化免疫（融合前3—4天）融合前2—4周复苏培养取脾制成细胞悬液(融合当天）

收集对数增长期细胞融合（PEG）阳性孔再次克隆化克隆扩大培养收集上清收获抗体杂交瘤细胞冻存于液氮检测抗体接种小鼠腹腔收集腹水接种于微孔营养板，在HAT培养基中培养免62三、单克隆抗体的应用可大量生产且稳定性好特异性强纯度高效价高无血清交叉反应1.McAb的优点：三、单克隆抗体的应用可大量生产且稳定性好特异性强纯度高效价高632.McAb的应用（5）细胞因子测定

放射免疫酶免疫荧光免疫免疫组化试剂盒（1）病原微生物抗原、抗体的检测（2）肿瘤抗原的检测（3）免疫细胞及其亚群的检测（4）激素测定医学检验诊断试剂2.McAb的应用（5）细胞因子测定放射免疫酶64（2）放射免疫显像：将放射性标记物与McAb连接，注入患者体内可进行放射免疫显像，以诊断早期肿瘤的小转移灶，或用于术前定位及术后追踪观察。（1）导向治疗作用：用McAb或连接药物、毒素的McAb治疗肿瘤，称“免疫导弹”。目前在动物实验中已获满意效果。蛋白质的提纯McAb作为配体，用于分离纯化相应抗原肿瘤导向治疗和射免显像技术（2）放射免疫显像：将放射性标记物与McAb连接，注入患者65第五节

基因工程抗体技术

基因工程抗体又称重组抗体，是指应用NDA重组及蛋白工程技术对编码抗体的基因按不同的需要进行改造和装配，经导入适当的受体细胞后重新表达的抗体。

第五节

基因工程抗体技术

66目前临床上使用的单克隆抗体和多克隆抗体均为动物源性抗体，具有免疫原性，在反复使用时常会诱导机体的免疫应答而产生抗抗体，这大大限制了异源性抗体在人体内的应用。随着基因工程技术的发展，人们逐渐可根据需要制备各种特异性的抗体，通过降低抗体的免疫原性，获得更佳的生物学活性。

目前临床上使用的单克隆抗体和多克隆抗体均为动物源性抗67目前基因工程抗体技术主要包括两部分内容：一是应用DNA重组和蛋白工程技术对已有的单抗进行改造，包括人源化抗体、小分子抗体、双价特异性抗体和抗体融合蛋白等的制备；二是用抗体库技术筛选、克隆新的单抗。

目前基因工程抗体技术主要包括两部分内容：68一、人源化抗体（一）嵌合抗体嵌合抗体（chimericantibody）又称人-鼠嵌合抗体，是从杂交瘤细胞中分离出鼠源单抗功能性V区基因，经基因重组与人抗体C区基因连接成嵌合基因后，插入适当的表达载体中，再共同转染宿主细胞，表达人-鼠嵌合抗体分子。嵌合抗体保留了单抗对抗原的特异亲和性，又含有人抗体C区的成分及其功能。

一、人源化抗体691．抗体V区基因的克隆

准确获得抗体可变区基因是制备嵌合抗体的关键所在。鼠源单抗VL和VH基因可通过以下两种方法获得：①用适当的探针从其杂交瘤细胞系的基因组文库中筛选出V区基因；②用PCR方法从该细胞的RNA或mRNA中扩增所需的V区基因。

1．抗体V区基因的克隆准确获得抗体可变区基因是制备嵌合702．抗体C区的选择

抗体恒定区基因的序列相对恒定，比较容易得到，可根据需要进行选择。如选择人IgG1或IgG3的恒定区可使嵌合抗体保留其介导抗体依赖性细胞毒作用（antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC）和增强激活补体的能力,如果抗体只是用于激活和阻断受体时，可选择人IgG2或IgG4恒定区。

2．抗体C区的选择713．表达载体的构建

为了产生具有功能活性的人-鼠嵌合抗体，需要将编码V区和C区的基因插入表达载体。

构建表达载体的方法主要有二种：①分别构建表达VL和VH基因的载体，用两个载体分别带上不同的标记基因，通过二次转染（将载体DNA导入真核细胞称为转染）选择获得嵌合抗体基因的细胞；②将VL和VH基因构建于同一载体中，这样虽然增加了重组体构建的难度，但可提高转染的成功率，同时增加表达量。

3．表达载体的构建为了产生具有功能活性的人-鼠嵌合抗体724．表达

嵌合抗体的重组基因一般利用哺乳动物细胞等进行表达。因为抗体分子需要经过正确的装配和加工等过程才能维持其生物学功能，而原核细胞等往往不能表达完整的抗体，只有哺乳动物细胞能够表达具有良好功能的抗体。

4．表达嵌合抗体的重组基因一般利用哺乳动物细胞等进行表达73（二）改形抗体改形抗体（reshapedantibody，RAb）是应用基因工程技术在嵌合抗体基础上用人抗体可变区的骨架区序列取代鼠源单抗CDR以外的骨架区序列，重新构成既有鼠源单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体，该抗体对人体几乎无免疫原性。

（二）改形抗体74二、小分子抗体小分子抗体指分子量较小但具有抗原结合功能的分子片段。它的优点表现为：①免疫原性低且分子量小，易于穿透血管或组织到靶细胞部位，可用于免疫治疗；②可在大肠杆菌等原核细胞中表达，降低生产成本；③不含FC段，不会与带有FC段受体的细胞结合，副作用小；④半衰期短，有利于中和并及时清除毒素。二、小分子抗体小分子抗体指分子量较小但具有抗原结合75（一）FabFab段由一条完整的L链以及H链的V区和CH1区组成，具有与完整抗体相同的抗原结合特性，但只有一个抗原结合位点。

小分子抗体包括：抗原结合片段（Fab）、

可变区片段（Fv）

单链抗体

（singlechainFv，ScFv）等。

（一）Fab小分子抗体包括：抗原结合片段（Fab）、

76（二）Fv和ScFvFv和ScFv是用基因工程技术构建的抗体片段。

Fv是抗体分子中保留抗原结合部位的最小功能性片段，若将抗体VL和VH通过连接肽连接为单一的肽链则称为单链抗体（ScFv）。其特点为：分子量小、穿透力强、免疫原性低、能较好的保持亲和性并易于进行遗传改造。

（二）Fv和ScFv77（三）

单域抗体又称VH结构域片段，由单个抗体VH功能区构成。一般是将抗体VH功能区基因通过基因工程技术在大肠杆菌中表达所得到的抗体片段。它与相应抗原结合的亲密程度与完整抗体的作用相似，但单域抗体的亲和力比完整抗体下降了一个数量级。

（三）

单域抗体78三、双特异性抗体双特异性抗体（