无菌检查法方法的验证试验-程樱课件

无菌检查法方法的验证试验

湖北省药品检验所程樱

同其他分析方法一样，无菌检查也必须通过证明所采用的检验方法和检验条件是可靠的，来保证该检查方法的完整性和试验结果的准确性。概述一．2005年版药典的修订与完善

2005年版药典强调应充分验证供试品本身对微生物生长的影响。2005年版药典无菌检查法中将抑细菌和抑真菌试验改变为方法验证试验。二．方法验证试验建立及要求

验证实际是伴随着整个试验过程，试验过程中的每一个环节都应该有合理的证明，以确保在实际检验条件下，该供试品的无菌检查法的可靠性。

主要内容怎么做:一选方法二看性质三除抑菌性四计菌数五定取样量

注意什么:七注意怎么做一选定试验方法:可靠、稳定、简便供试品形状允许,应采用薄膜过滤法.二看有无抑菌性:

间接方法:说明书、文献、技术资料直接方法:体外抑菌试验三消除抑菌性的方法1.中和法——利用化学（生物）专属性灭活如:对氨基苯甲酸2.稀释法——降低供试品的相对浓度3.薄膜法——利用体积差异分离各方法组合运用，效果更佳！四计细菌数：

菌液的制备和菌液的计数。五确定取样量：见表2-1和表2-21.薄膜过滤法

(1)验证试验的方法(2)验证结果的判断无抑菌作用

有抑菌作用:应采用增加冲洗量、增加冲洗次数、增加培养基的用量、改变冲洗液的种类、更换滤膜品种等方法，以消除供试品的抑菌作用，并再用相应的方法重复验证试验，最后确认所采用的无菌检查方法的可行性。四．方法验证试验最少取样量

表2-1液体制剂验证试验的最少取样量

供试品装量V(ml)单株菌的最少取样量(ml)

≤1V×101＜V＜5V/2×105≤V＜202020≤V＜505050≤V＜10010050≤V＜100（静脉给药）V/2×10100≤V＜500V/2×6≥5003000

表2-2固体制剂验证试验的最少样品量

供试品装量M单株菌的最少取样量

M＜50mgM×1050mg≤M＜300mgM/2×10300≤M＜5g1.5gM≥5g5g五．方法验证试验的实例

（示教内容）

以注射用阿奇霉素为例，对其无菌检查法进行方法学验证。1、材料和仪器1.1供试品1.2培养基及冲洗液1.3验证试验用菌种

1.4仪器和滤器

2、方法与结果

按照中国药典2005年版二部无菌检查法（附录ⅪH）方法验证进行试验。2.1菌液的制备

2.2菌液的计数菌液的制备和菌液的计数均为验证试验的预试验，以初步确定小于100cfu的试验菌的稀释倍数，为验证试验的加菌量提供参考。3、结论

根据上述验证试验结果可知：注射用阿奇霉素的无菌检查至少需要0.1％的蛋白胨水溶液1500ml（500ml/滤筒×3个滤筒）冲洗，以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌。本方法适合于注射用阿奇霉素的无菌检查，即注射用阿奇霉素的无菌检查法通过验证。

(二)液体制剂

以氯化钠注射液为例，对其无菌检查法进行方法学验证。1、材料和仪器1.1供试品1.2培养基1.3验证试验用菌种1.4仪器和滤器3、结论

根据上述验证试验结果可知，氯化钠注射液的无菌检查，不需冲洗，以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌。本方法适合于氯化钠注射液的无菌检查，即氯化钠注射液的无菌检查法通过验证。

六、注意事项1.

预试验2.

稀释液与冲洗液:作用、种类、冲洗量3.

菌液:保