邻二氮菲光度法测定铁课件

邻二氮菲分光光度法测定微量铁基础化学实验Ⅳ（仪器分析实验）化学国家级实验教学示范中心NorthwestUniversity邻二氮菲分光光度法测定微量铁基础化学实验Ⅳ（仪器分析实验）岛津1700紫外-可见分光光度计的使用（第一次训练）紫外可见吸收光谱光谱的制作（第一次训练）工作曲线法（巩固训练）实验技能训练要点岛津1700紫外-可见分光光度计的使用（第一次训练）实验技能一、实验目的二、实验原理三、实验步骤四、结果处理五、思考题六、实验延伸一、实验目的一、实验目的学习确定实验条件的方法，掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理。掌握岛津-1700紫外-可见分光光度计的使用方法，并了解此仪器的主要构造。一、实验目的学习确定实验条件的方法，掌握邻二氮菲分光光度法测

根据朗伯－比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。用分光光度法测定试样中的微量铁，目前一般采用邻二氮菲法，该法具有高灵敏度、高选择性，且稳定性好，干扰易消除等优点。二、实验原理根据朗伯－比耳定律：A=εbc，当入射光波长

在pH=2～9的溶液中，Fe2+与邻二氮菲(phen)生成稳定的桔红色配合物Fe(phen)32+：此配合物的lgK稳=21.3，摩尔吸光系数ε510=1.1×104L·mol-1·cm-1，而Fe3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。所以在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH2OH·HCl)将Fe3+还原为Fe2+，其反应式如下：2Fe3++2NH2OH·HCl→2Fe2++N2+H2O+4H++2Cl-测定时控制溶液的酸度为pH≈5较为适宜。用邻二氮菲可测定试样中铁的总量。在pH=2～9的溶液中，Fe2+与邻二氮菲(仪器：分光光度计(UV1700型)，50ml容量瓶7个，10ml移液管4支。三、实验仪器与试剂仪器：分光光度计(UV1700型)，50ml容量瓶7个，1100μg·mL-1铁标准溶液:准确称量0.8634gNH4Fe(SO)4·12H2O于烧杯中，加入10mL浓HCl和少量水，溶解后转移至1L容量瓶中，以水稀释至标线，摇匀。用时稀释至10μg·mL-1。

0.15%邻二氮菲水溶液，10%盐酸羟胺溶液（新配），1mol·L-1乙酸钠溶液，1mol·L-1NaOH溶液，6mol·L-1HCl（工业盐酸试样）试剂100μg·mL-1铁标准溶液:准确称量0.容量瓶编号铁标准或样品盐酸羟胺邻二氮菲NaAC加水稀释至刻度1铁标准0ml1ml2ml5ml2铁标准2ml1ml2ml5ml3铁标准4ml1ml2ml5ml4铁标准6ml1ml2ml5ml5铁标准8ml1ml2ml5ml6铁标准10ml1ml2ml5ml7铁样品5ml1ml2ml5ml标准溶液的配制按下列表格进行容量瓶编号铁标准或样品盐酸羟胺邻二氮菲NaAC加水稀释至刻度1.启动计算机，打开主机电源开关，开启主机电源，分光光度计进行自检和初始化。初始化完成后，打开主程序，联接主机和计算机。

2.在工作界面上选择测量项目（光谱扫描，光度测量），本实验选择光谱扫描，设置测量条件（扫描范围，测量波长等）。3.将空白放入测量池中，点击START扫描空白，点击ZERO校零。4.标准曲线的制作。UV1700基本操作1.启动计算机，打开主机电源开关，开启主机电源，分光光度计进吸收曲线的绘制和测量波长的选择：取上述6号溶液,用1cm比色皿,以试剂空白为参比溶液,设置扫描范围400---600nm,扫速快速,点击开始进行扫描，扫描结束后得吸收曲线，从吸收曲线上选用最大吸收波长为分析波长。四、实验步骤吸光度A4005006000.1000.2000.3000.400吸收曲线的绘制和测量波长的选择：四、实验步骤吸光度A4002.标准曲线的绘制：(1)标准曲线的制作:取1-6号溶液,用1cm比色皿,以试剂空白为参比溶液,在所选波长下测量吸光度。然后以波长c为横坐标，吸光度A为纵坐标，作图，得标准曲线曲线。(2)试样测定:在相同条件下，测定样品的吸光度。2.标准曲线的绘制：1.以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸收曲线，选择测量的最适宜波长条件。2.以铁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。根据试样的吸光度，从由线性回归方程求得含量或在工作曲线上查得含量，计算铁样品中的含铁量（以μg/mL表示），计算测量结果的平均值和相对偏差。五、数据处理1.以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸收曲线，选择测注意事项1、配置溶液时使用专用移液管，防止公用溶液污染。2、配置溶液时严格定容至刻度线。3、测定吸光度时，每改变一个波长，都应该用空溶液校零。注意事项1、配置溶液时使用专用移液管，防止公用溶液污染六、思考题1.邻二氮菲分光光度法测定微量铁时为何要加入盐酸羟胺溶液？2.吸收曲线与标准曲线有何区别？在实际应用中有何意义？3.透射比与吸光度两者关系如何？测定条件指哪些？4.邻二氮菲与铁的显色反应，其主要条件有哪些？5.加各种试剂的顺序能否颠倒？六、思考题1.邻二氮菲分光光度法测定微量铁时为何要加入盐酸1、双波长分光光度法的原理：当吸收光谱重叠的a、b两组分共存时，若要消除a组分的干扰测定b组分，可在a组分的吸收光谱上选择两个吸收度相等的两波长λ1和λ2，测定混合物的吸光度差值。然后根据ΔA值计算b的含量。双波长分光光度法的关键是正确选择两波长λ1、λ2，要求被测组分D在两波长处的△A足够大，而干扰组分G和背景在两波长应有相同的吸光度(△A=0)。为满足上述要求，一般是将λ2选在待测组分的最大吸收波长，λ1是选在干扰组分等吸收波长。2、怎样用双波长分光光度法测定水样中的全铁（总铁）和亚铁的含量？试拟出一简单步骤。七、实验延伸1、双波长分光光度法的原理：当吸收光谱重叠的a、b两组分共存邻二氮菲分光光度法测定微量铁基础化学实验Ⅳ（仪器分析实验）化学国家级实验教学示范中心NorthwestUniversity邻二氮菲分光光度法测定微量铁基础化学实验Ⅳ（仪器分析实验）岛津1700紫外-可见分光光度计的使用（第一次训练）紫外可见吸收光谱光谱的制作（第一次训练）工作曲线法（巩固训练）实验技能训练要点岛津1700紫外-可见分光光度计的使用（第一次训练）实验技能一、实验目的二、实验原理三、实验步骤四、结果处理五、思考题六、实验延伸一、实验目的一、实验目的学习确定实验条件的方法，掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理。掌握岛津-1700紫外-可见分光光度计的使用方法，并了解此仪器的主要构造。一、实验目的学习确定实验条件的方法，掌握邻二氮菲分光光度法测

根据朗伯－比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。用分光光度法测定试样中的微量铁，目前一般采用邻二氮菲法，该法具有高灵敏度、高选择性，且稳定性好，干扰易消除等优点。二、实验原理根据朗伯－比耳定律：A=εbc，当入射光波长

在pH=2～9的溶液中，Fe2+与邻二氮菲(phen)生成稳定的桔红色配合物Fe(phen)32+：此配合物的lgK稳=21.3，摩尔吸光系数ε510=1.1×104L·mol-1·cm-1，而Fe3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。所以在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH2OH·HCl)将Fe3+还原为Fe2+，其反应式如下：2Fe3++2NH2OH·HCl→2Fe2++N2+H2O+4H++2Cl-测定时控制溶液的酸度为pH≈5较为适宜。用邻二氮菲可测定试样中铁的总量。在pH=2～9的溶液中，Fe2+与邻二氮菲(仪器：分光光度计(UV1700型)，50ml容量瓶7个，10ml移液管4支。三、实验仪器与试剂仪器：分光光度计(UV1700型)，50ml容量瓶7个，1100μg·mL-1铁标准溶液:准确称量0.8634gNH4Fe(SO)4·12H2O于烧杯中，加入10mL浓HCl和少量水，溶解后转移至1L容量瓶中，以水稀释至标线，摇匀。用时稀释至10μg·mL-1。

0.15%邻二氮菲水溶液，10%盐酸羟胺溶液（新配），1mol·L-1乙酸钠溶液，1mol·L-1NaOH溶液，6mol·L-1HCl（工业盐酸试样）试剂100μg·mL-1铁标准溶液:准确称量0.容量瓶编号铁标准或样品盐酸羟胺邻二氮菲NaAC加水稀释至刻度1铁标准0ml1ml2ml5ml2铁标准2ml1ml2ml5ml3铁标准4ml1ml2ml5ml4铁标准6ml1ml2ml5ml5铁标准8ml1ml2ml5ml6铁标准10ml1ml2ml5ml7铁样品5ml1ml2ml5ml标准溶液的配制按下列表格进行容量瓶编号铁标准或样品盐酸羟胺邻二氮菲NaAC加水稀释至刻度1.启动计算机，打开主机电源开关，开启主机电源，分光光度计进行自检和初始化。初始化完成后，打开主程序，联接主机和计算机。

2.在工作界面上选择测量项目（光谱扫描，光度测量），本实验选择光谱扫描，设置测量条件（扫描范围，测量波长等）。3.将空白放入测量池中，点击START扫描空白，点击ZERO校零。4.标准曲线的制作。UV1700基本操作1.启动计算机，打开主机电源开关，开启主机电源，分光光度计进吸收曲线的绘制和测量波长的选择：取上述6号溶液,用1cm比色皿,以试剂空白为参比溶液,设置扫描范围400---600nm,扫速快速,点击开始进行扫描，扫描结束后得吸收曲线，从吸收曲线上选用最大吸收波长为分析波长。四、实验步骤吸光度A4005006000.1000.2000.3000.400吸收曲线的绘制和测量波长的选择：四、实验步骤吸光度A4002.标准曲线的绘制：(1)标准曲线的制作:取1-6号溶液,用1cm比色皿,以试剂空白为参比溶液,在所选波长下测量吸光度。然后以波长c为横坐标，吸光度A为纵坐标，作图，得标准曲线曲线。(2)试样测定:在相同条件下，测定样品的吸光度。2.标准曲线的绘制：1.以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸收曲线，选择测量的最适宜波长条件。2.以铁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。根据试样的吸光度，从由线性回归方程求得含量或在工作曲线上查得含量，计算铁样品中的含铁量（以μg/mL表示），计算测量结果的平均值和相对偏差。五、数据处理1.以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸收曲线，选择测注意事项1、配置溶液时使用专用移液管，防止公用溶液污染。2、配置溶液时严格定容至刻度线。3、测定吸光度时，每改变一个波长，都应该用空溶液校零。注意事项1、配置溶液时使用专用移液管，防止公用溶液污染六、思考题1.邻二氮菲分光光度法测定微量铁时为何要加入盐酸羟胺溶液？2.吸收曲线与标准曲线有何区别？在实际应用中有何意义？3.透射比与吸光度两者关系如何？测定条件指哪些？4.邻二氮菲与铁的显色反应，其主要条件有哪些？5.加各种试剂的顺序能否颠倒？六、思考题1.邻二氮菲分光光度法测定微量铁时为何要加入盐酸1、双波长分光光度法的原理：当吸收光谱重叠的a、b两组分共存时，若要消