DB1692-2018八眉猪细管冻精生产技术规程

ICS 65.020.30B43备案：60856-2018 DB63B43青 海 省 地 方 标 准DB63/T1692—2018八眉猪细管冻精生产技术规程2018-09-25发布 2018-12-01实施青海省质量技术监督局 发布DB63/T1692DB63/T1692—2018II前 言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由青海省农牧厅提出并归口。本标准起草单位：青海省家畜改良中心。、DB63/T1692DB63/T1692—2018PAGEPAGE6八眉猪细管冻精生产技术规程范围本规程适用于八眉猪细管冻精的生产。GB4143牛冷冻精液GB/T5458液氮生物容器NY/T2823八眉猪种公猪应符合NY/T2823要求，三代系谱清楚。28.45kgkgA3531E11IU。1h~2h。2~3器械37℃恒温箱、17器具保温集精杯、过滤膜、比色皿、锥形瓶、载玻片、盖玻片、离心管、烧杯、量筒、0.25ml细管、提筒、试管、细管剪。160℃恒温60min0.25ml75采精场所保持安静，地面保持清洁卫生，采精前应喷洒0.1%高锰酸钾进行消毒。1000ml37g1.250.6g、1.25g0.075g15min0.6g11000ml11g14.8g24.2g，150.6g1g冷冻稀释液I向锥形瓶中加入800ml冷冻基础液、200ml新鲜卵黄，搅拌均匀，置于17℃备用。冷冻稀释液II向锥形瓶中加入940ml冷冻稀释液I液、60ml甘油，搅拌均匀，置于5℃备用。向锥形瓶中加入1000ml双蒸水，分别称取葡萄糖50g、二水柠檬酸钠3g、乙二胺四乙酸1g，溶解于双蒸水中，搅拌均匀，用定性滤纸过滤至另一锥形瓶中，滤液煮沸15min，待温度降至常温。采精0.01后备种公猪每周采精一次，成年种公猪每周可采精两次。从37准备3737℃水浴锅待常温保37精液为乳白色，无皮毛等异物，略带腥味。体积将精液倒入量杯内直读精液体积。精液体积≥100ml。用移液枪吸取3960l生理盐水于比色皿中，再吸取40l精液，同生理盐水混合均匀，用密度测定仪测定精子密度。每毫升精液精子密度≥1×108个。取一小滴精液于载玻片，加盖盖玻片在带有38℃恒温装置的显微镜下检查精子活力和畸形率。精子活力≥60%，精子畸形率≤15%。用37℃常温保存稀释液按1︰1的比例等温稀释精液，将混合液放入17℃恒温箱待其温度降至17℃，并于72h内完成冻精。将常温稀释后的混合液倒入50ml离心管中，在17℃、重力800g的条件下离心12min，吸取上清液于量筒，直读体积。离心后精子总数按式（1）计算：式中：n—最终精子总数，单位为个；

n(1)ρ—每毫升精液精子密度，单位为个；v1—精液体积，单位为毫升（ml）。离心后沉淀精子体积按式（2）计算：vv1v2

(2)式中：v—精子体积，单位为毫升（ml）；v1—精液体积，单位为毫升（ml）；v2—上清液体积，单位为毫升（ml）。保证最终每毫升精液中精子密度≥3×108个，最终稀释后精液总量按式（3）计算：sn3 (3)式中：s—最终精液总量，单位为毫升（ml）；n—最终精子总数，单位为个。冷冻稀释液I液和II液添加量按式（4）计算：式中：

a1a2

sv2

(4)a1—冷冻稀释液I液添加量，单位为毫升（ml）；a2—冷冻稀释液II液添加量，单位为毫升（ml）；s—最终精液总量，单位为毫升（ml）；v—精子体积，单位为毫升（ml）。用17℃的冷冻稀释液I6.3175℃冰箱平衡25II5℃的精液。冷冻稀释液I液和II液添加量按照6.5.4计算。细管为无毒、耐低温的专用塑料管，0.25ml剂型，保证清洁、无菌。封装在4℃低温柜中采用细管封装一体机通过计算机程序控制，进行灌装、封口、打印标识。细管标识清晰，信息齐全，包括冻精产地、品种、冻精生产日期、猪号。上架封装后的细管整齐的码放在专用细管架上。冷冻4℃~1℃（降温速率2℃/min），共1min30s；1℃~-25℃（降温速率30℃/min），共2min24s；-25℃~-14030/min）6min12s；-14030。3838383838方法见本标准的6.2.4。活力≥30%的细管冻精作为初检合格品妥善贮存。包装用无菌纱布袋包装，包装应在-140℃以下环境中进行。标记包装袋外应进行明显标记。注明公猪号、生产日期、数量、精子活力。贮存GB/T54585。每季度每头公猪细管冻精型式检验不少于一次，检验方法按照GB4143进行。出站时