免疫测定的室内质量控制课件

免疫测定的室内质量控制卫生部临床检验中心李金明免疫测定的室内质量控制卫生部临床检验中心李金明1免疫测定技术的发展（1）以抗原抗体的结合反应所致的沉淀或凝集现象判断结果的免疫测定技术，如单双扩，免疫电泳，玻片凝集，胶乳凝集，红细胞凝集试验等；（2）固相标记免疫测定技术，如放射免疫试验，酶免疫试验，荧光免疫试验等；（3）均相免疫测定技术，如酶放大免疫测定技术（EMIT），克隆酶供体免疫测定（CEDIA）等；（4）以单克隆抗体为基础的免疫测定技术的发展；（5）以基因工程技术为基础的免疫测定技术发展时期；（6）免疫测定的自动化；（7）生物芯片技术（免疫测定的集成化和微型化）。免疫测定技术的发展（1）以抗原抗体的结合反应所致的沉2临床实验室对免疫检验技术的要求基本要求是准确和及时,其次是简便易行;常用的免疫检验技术的应用特点:(1)免疫比浊和免疫沉淀:灵敏度低;可用于体内含量较高的Ig、补体、CRP等的测定;(2)标记免疫检验技术:放免酶免灵敏度高;用于含量低的激素、病原体抗原抗体测定等;荧光标记技术有特定的应用;金标则为一种很方便的pointofcare检验技术。临床实验室对免疫检验技术的要求基本要求是准确和及时,其次是简3常用的免疫检验方法ELISA应用酶标原理的自动化分析仪应用其它标记物的自动化分析仪RIA常用的免疫检验方法ELISA4自动化免疫分析仪的基本原理基本上均为固相免疫测定，固相以磁性微粒最为普遍，其次是聚丙烯微孔板条和试管。均为标记免疫测定，标记物最常用的是酶（碱性磷酸酶，辣根过氧化物酶），其次是元素，发光标记物等；通常采用发光或荧光测定方式（常使用的酶发光或荧光底物如AMPPD（Dioxetanes),鲁米诺，4-甲基伞型酮磷酸盐等；自动化免疫分析仪的基本原理基本上均为固相免疫测定，固相以磁性5酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附试验（ELISA）6影响ELISA测定的因素试剂盒的因素实验操作影响ELISA测定的因素试剂盒的因素7影响ELISA试剂盒质量的因素固相材料:聚苯乙烯塑料抗原:纯化、合成和基因工程抗原抗体：多抗、单抗和基因工程抗体酶结合物：酶免疫测定的核心成份色原底物：OPD和TMB运输贮存影响ELISA试剂盒质量的因素固相材料:聚苯乙烯塑料8酶免疫测定操作中的注意事项标本的收集、运送和保存试剂准备加样温育洗板显色比色结果判断结果报告及解释酶免疫测定操作中的注意事项标本的收集、运送和保存9ELISA测定的主要问题HOOKEFFECT结果的判断ELISA测定的主要问题10一步法的“HOOKEFFECT”问题一步法的“HOOKEFFECT”问题11结果判断

按照试剂盒确定的Cut-off值判断结果

ELISA测定的“灰区”（可疑结果的含义）

结果判断12定性酶免疫测定的CUT-OFF值定性酶免疫测定的CUT-OFF值13临床免疫检验的室内质控问题临床免疫检验室内质控不太受重视的原因有三:一方面可能是质控品来源有限或价格因素；其次是尚没有意识到；再有就是不知从何做起。使用统一合格的校准品开展室内质控才是解决各实验室结果可比性差同时也是保证检验质量的唯一有效的途径。室内质控的内涵并不仅仅是使用质控物进行统计学质控，它包括分析前、分析中和分析后的质量控制三个方面。免疫检验室内质控既有与临床生化室内质控共性的一面，也有其特性的地方临床免疫检验的室内质控问题临床免疫检验室内质控不太受重视的原14室内质量控制（IQC）IQC主要包括三个方面：（1）测定前的质量控制；（2）统计学质量控制；（3）质量控制的评价。室内质量控制（IQC）IQC主要包括三个方面：15测定前的质量控制实验室设施、仪器设备及管理理想的试剂和操作方法人员培训测定前的质量控制实验室设施、仪器设备及管理16实验室设施、仪器设备及管理实验室设施：温湿度控制设备、稳压或不间断电源仪器设备及管理：酶标仪、洗板机、全自动免疫分析仪、加样器等应建立技术档案，并定期维护和校准实验室设施、仪器设备及管理实验室设施：温湿度控制设备、稳压或17标准操作程序（SOP）的建立标准操作程序（SOP）的建立18统计质控方法定性免疫测定质控物浓度的选择Levey-Jennings质控图方法“即刻法”质控方法免疫测定IQC的特殊性质控图在不同批试剂间的连续统计质控方法定性免疫测定质控物浓度的选择19定性免疫测定质控物浓度的选择以HBsAg的ELISA测定为例，先按NCCLsEP5文件评价方法对系列质控血清（含量分别为0.2、0.5、1.0、2.0和5.0ng/ml）的批内和批间测定精密度。根据任一次测定值（S/CO）的最好的线性相关确定回归直线方程（y=bx+a）。所选择的质控物浓度=其S/CO值（1-3批间CV%）大于1的质控物，作为室内质控使用。定性免疫测定质控物浓度的选择以HBsAg的ELISA测定为例20Levey-Jennings质控图方法也称Shewhart质控图，是由美国的Shewhart于1924年首先提出，并用于工业产品的质量控制。后来（二十世纪五十年代初），Levey-Jennings将其引入临床检验的质量控制。经Henry和Segalove的改良，即为目前常用的Levey-Jennings质控图。Levey-Jennings质控图方法也称Shewhart质21质控图质控图22Levey-Jennings质控图

基本的统计学含义稳定条件下，在20个IQC结果中不应有多于1个结果超过2SD（95.5%可信限）限度；在1000个测定结果中超过3SD（99.7%可信限）的结果不多于3个。如以±3s为失控限，假失控的概率为0.3%。Levey-Jennings质控图

基本的统计学含义稳定条件23“即刻法”质控方法“即刻法”质控方法的实质是一种统计学方法,即Grubs异常值取舍法；只要有3个以上的数据即可决定是否有异常值的存在。“即刻法”质控方法“即刻法”质控方法的实质是一种统计学方法,24免疫测定IQC的特殊性免疫测定有其本身的独特性，如有些激素或药物测定常覆盖较大的工作范围，且可能有数个“临床决定性水平”，测定中需进行不同浓度的质控物进行质控测定，而标准差（SD）随质控物浓度的增大往往也明显变大，从而使得用不同浓度质控物作图的间隔比例相差较大，因此有必要对质控图绘制的一般方法进行修改，可采用相对误差（测定值与均值的%比差异）(CV)替代绝对误差SD来作质控图。免疫测定IQC的特殊性免疫测定有其本身的独特性，如有些激素或25以CV替代SD作质控图以CV替代SD作质控图26质控图在不同批试剂间的连续质控图在不同批试剂间的连续27y1=3.550x1+0.226（2001081501批）

y2=3.238x2+0.388（2001040501批）

y3=3.428x3+0.148（2001072501批）

y2/y1=0.960

y3/y1=0.908

y1=3.550x1+0.226（2001081501批）28质控图在不同批试剂间的连续质控图在不同批试剂间的连续29室内质量控制的评价IQC是一个集体活动，不光是对实验室一次测定的有效性的判断，也反应了实验室测定趋势的变化。IQC的失控不能做为处罚的依据，应建设性的找出失控的原因，针对其采取措施加以改进。对IQC应定期进行评价。室内质量控制的评价IQC是一个集体活动，不光是对实验室一次测30IQC的局限性在免疫测定中IQC可能测不出的误差

测定前测定中测定后

样本鉴定不对样本吸取不对结果记录错误

样本贮存中变质试剂加入不对此类误差的发生率在不同的实验室有所不同，一般要求小于

0.1%，且应均衡地分布于测定前、测定中和测定后的不同阶段。

IQC的局限性在免疫测定中IQC可能测不出的误差31谢谢！谢谢！32免疫测定的室内质量控制卫生部临床检验中心李金明免疫测定的室内质量控制卫生部临床检验中心李金明33免疫测定技术的发展（1）以抗原抗体的结合反应所致的沉淀或凝集现象判断结果的免疫测定技术，如单双扩，免疫电泳，玻片凝集，胶乳凝集，红细胞凝集试验等；（2）固相标记免疫测定技术，如放射免疫试验，酶免疫试验，荧光免疫试验等；（3）均相免疫测定技术，如酶放大免疫测定技术（EMIT），克隆酶供体免疫测定（CEDIA）等；（4）以单克隆抗体为基础的免疫测定技术的发展；（5）以基因工程技术为基础的免疫测定技术发展时期；（6）免疫测定的自动化；（7）生物芯片技术（免疫测定的集成化和微型化）。免疫测定技术的发展（1）以抗原抗体的结合反应所致的沉34临床实验室对免疫检验技术的要求基本要求是准确和及时,其次是简便易行;常用的免疫检验技术的应用特点:(1)免疫比浊和免疫沉淀:灵敏度低;可用于体内含量较高的Ig、补体、CRP等的测定;(2)标记免疫检验技术:放免酶免灵敏度高;用于含量低的激素、病原体抗原抗体测定等;荧光标记技术有特定的应用;金标则为一种很方便的pointofcare检验技术。临床实验室对免疫检验技术的要求基本要求是准确和及时,其次是简35常用的免疫检验方法ELISA应用酶标原理的自动化分析仪应用其它标记物的自动化分析仪RIA常用的免疫检验方法ELISA36自动化免疫分析仪的基本原理基本上均为固相免疫测定，固相以磁性微粒最为普遍，其次是聚丙烯微孔板条和试管。均为标记免疫测定，标记物最常用的是酶（碱性磷酸酶，辣根过氧化物酶），其次是元素，发光标记物等；通常采用发光或荧光测定方式（常使用的酶发光或荧光底物如AMPPD（Dioxetanes),鲁米诺，4-甲基伞型酮磷酸盐等；自动化免疫分析仪的基本原理基本上均为固相免疫测定，固相以磁性37酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附试验（ELISA）38影响ELISA测定的因素试剂盒的因素实验操作影响ELISA测定的因素试剂盒的因素39影响ELISA试剂盒质量的因素固相材料:聚苯乙烯塑料抗原:纯化、合成和基因工程抗原抗体：多抗、单抗和基因工程抗体酶结合物：酶免疫测定的核心成份色原底物：OPD和TMB运输贮存影响ELISA试剂盒质量的因素固相材料:聚苯乙烯塑料40酶免疫测定操作中的注意事项标本的收集、运送和保存试剂准备加样温育洗板显色比色结果判断结果报告及解释酶免疫测定操作中的注意事项标本的收集、运送和保存41ELISA测定的主要问题HOOKEFFECT结果的判断ELISA测定的主要问题42一步法的“HOOKEFFECT”问题一步法的“HOOKEFFECT”问题43结果判断

按照试剂盒确定的Cut-off值判断结果

ELISA测定的“灰区”（可疑结果的含义）

结果判断44定性酶免疫测定的CUT-OFF值定性酶免疫测定的CUT-OFF值45临床免疫检验的室内质控问题临床免疫检验室内质控不太受重视的原因有三:一方面可能是质控品来源有限或价格因素；其次是尚没有意识到；再有就是不知从何做起。使用统一合格的校准品开展室内质控才是解决各实验室结果可比性差同时也是保证检验质量的唯一有效的途径。室内质控的内涵并不仅仅是使用质控物进行统计学质控，它包括分析前、分析中和分析后的质量控制三个方面。免疫检验室内质控既有与临床生化室内质控共性的一面，也有其特性的地方临床免疫检验的室内质控问题临床免疫检验室内质控不太受重视的原46室内质量控制（IQC）IQC主要包括三个方面：（1）测定前的质量控制；（2）统计学质量控制；（3）质量控制的评价。室内质量控制（IQC）IQC主要包括三个方面：47测定前的质量控制实验室设施、仪器设备及管理理想的试剂和操作方法人员培训测定前的质量控制实验室设施、仪器设备及管理48实验室设施、仪器设备及管理实验室设施：温湿度控制设备、稳压或不间断电源仪器设备及管理：酶标仪、洗板机、全自动免疫分析仪、加样器等应建立技术档案，并定期维护和校准实验室设施、仪器设备及管理实验室设施：温湿度控制设备、稳压或49标准操作程序（SOP）的建立标准操作程序（SOP）的建立50统计质控方法定性免疫测定质控物浓度的选择Levey-Jennings质控图方法“即刻法”质控方法免疫测定IQC的特殊性质控图在不同批试剂间的连续统计质控方法定性免疫测定质控物浓度的选择51定性免疫测定质控物浓度的选择以HBsAg的ELISA测定为例，先按NCCLsEP5文件评价方法对系列质控血清（含量分别为0.2、0.5、1.0、2.0和5.0ng/ml）的批内和批间测定精密度。根据任一次测定值（S/CO）的最好的线性相关确定回归直线方程（y=bx+a）。所选择的质控物浓度=其S/CO值（1-3批间CV%）大于1的质控物，作为室内质控使用。定性免疫测定质控物浓度的选择以HBsAg的ELISA测定为例52Levey-Jennings质控图方法也称Shewhart质控图，是由美国的Shewhart于1924年首先提出，并用于工业产品的质量控制。后来（二十世纪五十年代初），Levey-Jennings将其引入临床检验的质量控制。经Henry和Segalove的改良，即为目前常用的Levey-Jennings质控图。Levey-Jennings质控图方法也称Shewhart质53质控图质控图54Levey-Jennings质控图

基本的统计学含义稳定条件下，在20个IQC结果中不应有多于1个结果超过2SD（95.5%可信限）限度；在1000个测定结果中超过3SD（99.7%可信限）的结果不多于3个。如以±3s为失控限，假失控的概率为0.3%。Levey-Jennings质控图

基本的统计学含义稳定条件55“即刻法”质控方法“即刻法”质控方法的实质是一种统计学方法,即Grubs异常值取舍法；只要有3个以上的数据即可决定是否有异常值的存在。“即刻法”质控方法“即刻法”质控方法的实质是一种统计学方法,56免疫测定IQC的特殊性免疫测定有其本身的独特性，如有些激素或药物测定常覆盖较大的工作范围，且可能有数个“临床决定性水平”，测定中需进行不同浓度的质控物进行质控测定，而标准差（SD）随质控