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文档简介

L-色氨酸含量和纯度的测定实验指导书一、实验目的色氨酸的反应机理；了解高效液相色谱分析的基本原理；色氨酸的测定方法。二、概述和原理L-色氨酸的分析方法主要有氨基酸自动分析仪分析法、高效液相色谱分析法、毛细管电泳法、薄层色谱法和分光光度法等。本原理为：在硫酸溶液中，L-色氨酸与对二甲氨基苯甲醛发生缩合反应，生成的希夫碱对二甲氨基苯甲醛缩色氨酸为蓝色，颜色深度在一定范围内与L-色氨酸含量成线性关系，可在分光光度计下定量测定。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，其系统主要由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，由于该法具有高效、快速和灵敏等特点，不仅可用压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由复多次的吸附-谱形式打印出来。三、实验试剂及仪器试剂L-甲醇（液相纯；纯净水；乙腈（液相纯。仪器紫外可见分光光度计，Agilent1200Series高效液相色谱仪。四、发酵液中L-色氨酸含量的测定对二甲氨基苯甲醛溶液（3g/L）制备准确称取0.3g对二甲氨基苯甲醛，溶于100mL1:1浓硫酸中。亚硝酸钠溶液（2%）制备准确称取亚硝酸钠0.2g于10mL容量瓶中，以蒸馏水定容，新鲜配制。L-色氨酸标准储备液（100mg/L）制备25mgL-250mL100mg/L4℃冰箱保存备用。L-色氨酸标准曲线的测定20、40、60、80、100mg/L1mL稀释后9mL对二甲氨基苯甲醛溶液混合于试管中，沸水加热2min13min600nm处测定吸色氨酸标准曲线。发酵样品的处理1mL发酵液加入离心管中，10000rpm5min100倍后用于L-色氨酸含量的测定。发酵样品的测定色氨酸的含量。五、L-色氨酸结晶纯度的测定流动相的制备1.3265gNaH2PO4·2H2O850mL0.5mL150mL甲醇。过滤，超声。色谱条件色谱柱：Sunfire-C1（4.6250mm,Agilent1200SeriesLN流速：1mL/min；检测波长：278nm；温度：36℃。标准样品的制备25mgL-25mL1g/LL-410、20、40、60、80、100mg/L0.22μm一次性针头过滤器过滤。L-色氨酸标准曲线的测定HPLC色氨酸标准曲线。L-色氨酸结晶样品的处理25mgL-250mL100mg/L0.22μmHPLC测定。结晶样品纯度的测定再将结晶样品峰的峰面积对照标准曲线可得到结晶样品中的L-色氨酸含量，从而计算色氨酸结晶纯度。六、实验结果及其处理色氨酸标准曲线。色氨酸含量。色氨酸含量

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