关于无菌技术学习心得

Word———关于无菌技术学习心得下面就是我带来的无菌技术学习心得，盼望能关心大家!

无菌技术学习心得1

无菌操作基本技术

1.在开头试验前要制定好试验方案和操作程序。有关数据的计算要事先做好。依据试验要求，预备各种所需器材和物品、清点无误后将其放于操作场所(培育室、超净台)内，然后开头消毒，以避开来回拿取造成污染机率增大。

超净工作台台面每次试验前用75%酒精擦拭，根据顶板→侧壁→器械→挡风玻璃→操作台面的挨次对超净台内部进行彻底的消毒。然后开启超净台和无菌培育室的紫外灯照耀30min，关闭紫外，启动风机运转15分钟后，方可开头试验操作。在工作台面消毒时切勿将培育细胞和培育用液同时照耀紫外线。

2.无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以临时放置，其它试验用品用完即应移出，以利于气流流通。试验用品以75%酒精擦拭后放入无菌操作台内。试验操作应在台面政府的无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。

3.当心取用无菌试验物品，避开造成污染。勿碰触吸管尖端或容器瓶口，亦不要在开口容器的正上方操作。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用。

4.操作人员应留意自身平安，须穿戴试验衣及手套后才进行试验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特殊当心操作，并选择适当等级的无菌操作台。操作过程中，应避开引起气溶胶的产生，当心毒性药品，例如DMSO，并避开尖锐针头的损害等。

5.每次操作只处理一株细胞株，且即使培育基相同也不共享培育基，以避开失误混淆或细胞间污染。为拿取便利，工作台面上的用品要有合理的布局，原则上应是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左侧，酒精灯置于政府。工作由始至终要保持肯定挨次性，组织或细胞在未做处理之前，勿过早暴露在空气中。同样，培育液在未用前，不要过早开瓶;用过之后如不再重复使用，应马上封闭瓶口。

6.试验完毕后，关闭超净台风机，以75%酒精擦拭操作台面及其他试验物品，将多余的物品拿出超净台，打开风机运转15min，关闭风机并打开紫外灯照耀30min。

7.定期检测CO2钢瓶的CO2压力;CO2培育箱的CO2浓度、温度、水盘是否有污染(水盘的水为无菌水，每周更换);定期更换紫外线灯管及HEPA过滤膜，预滤网(300小时/预滤网，3000小时/HEPA)。

预防是防止细胞培育过程中发生污染的最好方法。只有预防工作做在前，才能将发生污染的可能性降到最小程度。

一般预防可从以下几方面着手：

1、添加抗生素

2、从物品、用品消毒灭菌着手

(1)细胞培育所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要认真，并在无菌试验阴性后才能使用。

(2)操作室及剩余的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。

3、从操做起

(1)进无菌室前要用肥皂洗手，按规定穿隔离衣。工作开头要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。

(2)操动作要轻，必需在火焰四周无菌区内打开瓶口，并将瓶口转动烧灼。操作时尽量不要谈话，若打喷嚏或咳嗽应转向背面。

(3)操作时要常更换吸管，一旦发觉吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。试验完毕用消毒水浸泡的纱布擦台面。

4、防止细胞交叉污染

(1)在进行多种细胞培育操作时，所用器具要严格区分。吸取养分液、PBS、细胞悬液

及其它各种用液时，均应分别使用吸管，不能混用，以防扩大污染或导致细胞交叉污染。

(2)在进行换液或传代操作时，手或注射器、滴管等不能经过开口瓶口上方，不能触及瓶口，以免把细胞带到培育液中污染其他细胞。加液时如吸管尖遇到瓶口，则应将吸管丢掉。

(3)细胞一旦购置或从别处引入，均应及早留种冻存，一旦发生污染可重新复苏培育。

5、无菌室的彻底消毒

(1)0.1%新洁尔灭全面彻底擦洗无菌室;

(2)甲醛熏蒸法：甲醛是一种广谱灭菌剂菌，其水溶液和气休对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。

容器破裂及感染性物质的溢出的处理：

1小玻璃瓶及其他容器等被传染性物质污染的破裂物品，以及培育物等溅洒的传染性物质，应当马上佩戴手套用布或纸巾掩盖。

2在上面倒上消毒剂，并使其作用适当时间。

3清理破裂物品及污染物，再用消毒剂擦拭污染区域。