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文档简介

实验二人类外周血淋巴细胞培养

及染色体标本的制备

温州医学院生命科学学院生物系唐霄雯

1、学习人类外周血淋巴细胞的培养技术。

2、掌握人类淋巴细胞染色体标本的制备。目的要求实验原理有丝分裂中期相的染色体具有一定形态和大小，且轮廓结构最为典型。1952年美籍华人徐道觉发现低渗可以使细胞膨胀，染色体分散。1956年美籍华人蒋有兴和Leran等人，在染色体制片中利用了可以破坏纺锤丝使细胞分裂停止在中期的秋水仙素。1960年Nowell等人发现植物凝集素（简称PHA）可以使处于G1期或G0期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞，从而进入分裂期。在制备人类染色体标本时，外周血淋巴细胞常做为首选材料。加固定液至5ml,静置15’5ml培养液+0.5ml血70h

加秋水仙素继续培养至72h

收集细胞1000rpm,8’

弃上清

37℃0.075MKCl6ml,混匀37℃,水浴15’预固定(加固定液1ml,轻混匀)

1000rpm,8’

1000rpm,8’弃上清弃上清沉淀沉淀加固定液5ml，静置15’

制备片：每人1张(滴片、微烤、晾干)

1000rpm,8’弃上清镜检

Ⅲ、Ⅳ号片待用Ⅱ号片染色5’,水洗正常人类染色体各组的主要形态组号染色体号形态着丝粒位置随体A1-3最大1、3号中央着丝粒无2号亚中着丝粒B4-5次大亚中着丝粒无C6-12+X中等亚中着丝粒无D13-15中等近端着丝粒有E16-18小16号中央着丝粒无17、18号亚中着丝粒F19-20次小中央着丝粒无G21-22+Y最小近端着丝粒21、22有、Y无注意事项1、两人一组，每组一个培养瓶，共制备四张染色体标本，每张玻片请标上Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。2、培养瓶分普通培养和加BrdU培养两种，请拿到标有Brdu培养瓶的小组在制备好的玻片上

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