眼科学常见实验方法课件

眼科学常见实验方法眼科学常见实验方法1眼科学常见实验方法HE染色视网膜血管ADP酶染色视网膜血管FC染色,免疫组织化学染色尼氏染色RT-PCRwestern-blotunnel染色法elisa眼科学常见实验方法2HE染色HE制作的全过程包括组织固定、取材、脱水、包埋、修整蜡块、切片、贴片、烤片、去蜡、加水、苏木素染色返蓝、伊红染色、脱水、透等十多个步骤,每一步都必须仔细操作,即每一环节都必须高度重视,才能制作出高质量的HE染色切片,就每个环节应注意的问题阐述于下HE染色3(1)组织固定固定一定要及时,组织离体3n内必须固定,且越新鲜固定越好,涂片、刷片印片等尤其如此。配制固定液时,称药要准确,pH值调节要适当,固定液的选择与浓度的配制均要做好:固定液的用量以多于组织体积的5-10倍组织固定为宜。盛固定液的容器,瓶口要大,以防人为的挤压。由于10%福尔马林的组织渗透力约为每小时1mm,渗入组织的深度约为2-3mm故大标本要求正中先切开(如肝肺则最好用支气管灌注10%福尔马林后再浸入固定液内、脑及眼球应用悬吊法固定。(1)组织固定固定一定要及时,组织离体34(2)取材大小1.5×1.53cm,厚度不宜超过0.5cm,取材整齐平整、切成方形、圆形或矩形,不要切成三角形要选取具有代表性的病变组织。内窥镜活检、诊断性刮宫等碎组织要用纱布包好,再用大头针扎紧后取材删水固定3)脱水利用梯度酒精逐步脱水,适当掌握其浓度与脱水的时间。加温脱水可使组织固缩,以室温脱水为佳;只有脱水彻底,组织才能透明充分,有利于石蜡的渗入。脱水剂要定期更换,组织块的周围脂肪组织不宜过多,否则将引起脱水不良,难以切片。(2)取材大小1.5×1.55透明浸蜡4)透明一殺同二甲本,小块组织5)浸先放入熔点低(54-56℃),后浸入熔大埃組织1h即可,透的时间过长,组织容易变硬、变底点高的(58-60℃)石;浸蜡的变应高于所石蜡切不成片,甚至一切就成验宋状,故要恰当地常揖组织块的透明度,王谊,制透明的时间。大块组织2-3h,温度过高或时间过长均可使组织收缩、变榎、变脆、切不成片,如能采用饫压真空方法,则浸蜻的时间可以适当地缩短透明浸蜡6(6)包埋石蜡包埋的温度可以比浸蜡的温度高5℃,但动作要快,须将组织块放平整,尤其是两块以上的小组织或多块小组织应仔细地包埋成条直线与包埋框横轴平行,这样既有利于防止病理医师诊断时不小心漏掉一块小组织同时也有利于包埋完整地切片,形成蜡带;更要注意包埋面的解剖组织学关系,凡分层次的组织,层次表面应向下放平皮肤可将表皮放在上端,应保证各层组织结构都能被观察到:如果包埋面的方向有错误,在镜下就无法观察到全层的组织结构,则必然会造成诊断上的困难。(6)包埋石蜡包埋的温度可以比浸蜡的温度高7修整蜡块切片(8)切片须备有一台优质的切片机,切片时,把固定蜡块的各个螺丝旋紊,刀要快,可定期更新一次性刀片,须无缺口,切3(7)修整蜡块包坦的蜡块,在冷却后应5μm厚。组织的长轴应与切片刀平行,切进行修整,组织块周国的蜡边不宜太宽,只片刀应先从刀的一端使用,角度4-6需留下约2mm的空间,以免贴片时不易祓角度太大会将切片刮碎,过小则切不到纽织切片时将组织切齐全,要求厚灣均匀且形成蜡情,避免人为损害。蜡块內的被膜应放上端,组织的脏层应朝下;淋巴瘤或细菌染色宣澎切,观察镫神经軸索则可切厚些修整蜡块切片8烤片脱蜡、水化,苏木素染色(11)脱蜡、水化,苏木素染色染色前,切片须经过两次二甲苯脱蜡,务求将10)烤片烤片时温度的控制与时间石蜡脱尽,再经梯度酒精脱苯,最后至水的把握最为重要,温度过高,组织与纽胞再入苏木素液染色。该染液的配置要准确会出现龟裂;温度过低或烤片时间不足染色时间的控制应依据苏木素的配方、染切下的组织块容易脱落,一般65℃烤2洨的新旧、季节、室温等多种因素综合考0-30min,可防止上述现象虑,一般情况下染5-15min;冬天室温过低苏木素的钾明矾容易析出,影响染色效果,可加温染液烤片脱蜡、水化,苏木素染色9》(12)盐酸分化染苏木素后,除胞核着色外胞浆,间质等也不同程度被染上了淡兰色。分化的日的是让应着色的细胞核更加清晰,使不应着色的部分,尽可能褪尽。分化的时间要看分化液的浓度溶液的新旧,组织本身的特性,切片的厚薄及要求着色的深浅等因素酌情来定,最好是在显微镜观察盐酸分化下控制,一般分化数秒至30s。分化后的切片应立即入水中冲洗,让组织碱化,使胞核返兰。应注意的是:①入水动作要轻;②用细流水冲洗,请勿直接对着切片冲洗,以免脱片。③碱化采用自来水或温水(30-40℃),让其自然返兰并洗净残留的盐酸,有利于切片的长期保存。如果用碳酸锂氨水等弱碱来返兰,切片则较易褪色。》(12)盐酸分化染苏木素后,除胞核着色外10眼科学常见实验方法课件11眼科学常见实验方法课件12眼科学常见实验方法课件13眼科学常见实验方法课件14眼科学常见实验方法课件15眼科学常见实验方法课件16眼科学常见实验方法课件17眼科学常见实验方法课件18眼科学常见实验方法课件19眼科学常见实验方法课件20眼科学常见实验方法课件21眼科学常见实验方法课件22眼科学常见实验方法课件23眼科学常见实验方法课件24眼科学常见实验方法课件25眼科学常见实验方法课件26眼科学常见实验方法课件27眼科学常见实验方法课件28眼科学常见实验方法课件29眼科学常见实验方法课件30眼科学常见实验方法课件31眼科学常见实验方法课件32眼科学常见实验方法课件33眼科学常见实验方法课件34眼科学常见实验方法课件35眼科学常见实验方法课件36眼科学常见实验方法课件37眼科学常见实验方法课件38眼科学常见实验方法课件39眼科学常见实验方法课件40眼科学常见实验方法课件41眼科学常见实验方法课件42眼科学常见实验方法课件43眼科学常见实验方法课件44眼科学常见实验方法课件45眼科学常见实验方法课件46眼科学常见实验方法课件47眼科学常见实验方法课件48眼科学常见实验方法课件49眼科学常见实验方法课件50眼科学常见实验方法课件51眼科学常见实验方法课件52眼科学常见实验方法课件53眼科学常见实验方法课件54眼科学常见实验方法课件55眼科学常见实验方法课件56眼科学常见实验方法课件57眼科学常见实验方法课件58眼科学常见实验方法课件59眼科学常见实验方法课件60眼科学常见实验方法课件61眼科学常见实验方法眼科学常见实验方法62眼科学常见实验方法HE染色视网膜血管ADP酶染色视网膜血管FC染色,免疫组织化学染色尼氏染色RT-PCRwestern-blotunnel染色法elisa眼科学常见实验方法63HE染色HE制作的全过程包括组织固定、取材、脱水、包埋、修整蜡块、切片、贴片、烤片、去蜡、加水、苏木素染色返蓝、伊红染色、脱水、透等十多个步骤,每一步都必须仔细操作,即每一环节都必须高度重视,才能制作出高质量的HE染色切片,就每个环节应注意的问题阐述于下HE染色64(1)组织固定固定一定要及时,组织离体3n内必须固定,且越新鲜固定越好,涂片、刷片印片等尤其如此。配制固定液时,称药要准确,pH值调节要适当,固定液的选择与浓度的配制均要做好:固定液的用量以多于组织体积的5-10倍组织固定为宜。盛固定液的容器,瓶口要大,以防人为的挤压。由于10%福尔马林的组织渗透力约为每小时1mm,渗入组织的深度约为2-3mm故大标本要求正中先切开(如肝肺则最好用支气管灌注10%福尔马林后再浸入固定液内、脑及眼球应用悬吊法固定。(1)组织固定固定一定要及时,组织离体365(2)取材大小1.5×1.53cm,厚度不宜超过0.5cm,取材整齐平整、切成方形、圆形或矩形,不要切成三角形要选取具有代表性的病变组织。内窥镜活检、诊断性刮宫等碎组织要用纱布包好,再用大头针扎紧后取材删水固定3)脱水利用梯度酒精逐步脱水,适当掌握其浓度与脱水的时间。加温脱水可使组织固缩,以室温脱水为佳;只有脱水彻底,组织才能透明充分,有利于石蜡的渗入。脱水剂要定期更换,组织块的周围脂肪组织不宜过多,否则将引起脱水不良,难以切片。(2)取材大小1.5×1.566透明浸蜡4)透明一殺同二甲本,小块组织5)浸先放入熔点低(54-56℃),后浸入熔大埃組织1h即可,透的时间过长,组织容易变硬、变底点高的(58-60℃)石;浸蜡的变应高于所石蜡切不成片,甚至一切就成验宋状,故要恰当地常揖组织块的透明度,王谊,制透明的时间。大块组织2-3h,温度过高或时间过长均可使组织收缩、变榎、变脆、切不成片,如能采用饫压真空方法,则浸蜻的时间可以适当地缩短透明浸蜡67(6)包埋石蜡包埋的温度可以比浸蜡的温度高5℃,但动作要快,须将组织块放平整,尤其是两块以上的小组织或多块小组织应仔细地包埋成条直线与包埋框横轴平行,这样既有利于防止病理医师诊断时不小心漏掉一块小组织同时也有利于包埋完整地切片,形成蜡带;更要注意包埋面的解剖组织学关系,凡分层次的组织,层次表面应向下放平皮肤可将表皮放在上端,应保证各层组织结构都能被观察到:如果包埋面的方向有错误,在镜下就无法观察到全层的组织结构,则必然会造成诊断上的困难。(6)包埋石蜡包埋的温度可以比浸蜡的温度高68修整蜡块切片(8)切片须备有一台优质的切片机,切片时,把固定蜡块的各个螺丝旋紊,刀要快,可定期更新一次性刀片,须无缺口,切3(7)修整蜡块包坦的蜡块,在冷却后应5μm厚。组织的长轴应与切片刀平行,切进行修整,组织块周国的蜡边不宜太宽,只片刀应先从刀的一端使用,角度4-6需留下约2mm的空间,以免贴片时不易祓角度太大会将切片刮碎,过小则切不到纽织切片时将组织切齐全,要求厚灣均匀且形成蜡情,避免人为损害。蜡块內的被膜应放上端,组织的脏层应朝下;淋巴瘤或细菌染色宣澎切,观察镫神经軸索则可切厚些修整蜡块切片69烤片脱蜡、水化,苏木素染色(11)脱蜡、水化,苏木素染色染色前,切片须经过两次二甲苯脱蜡,务求将10)烤片烤片时温度的控制与时间石蜡脱尽,再经梯度酒精脱苯,最后至水的把握最为重要,温度过高,组织与纽胞再入苏木素液染色。该染液的配置要准确会出现龟裂;温度过低或烤片时间不足染色时间的控制应依据苏木素的配方、染切下的组织块容易脱落,一般65℃烤2洨的新旧、季节、室温等多种因素综合考0-30min,可防止上述现象虑,一般情况下染5-15min;冬天室温过低苏木素的钾明矾容易析出,影响染色效果,可加温染液烤片脱蜡、水化,苏木素染色70》(12)盐酸分化染苏木素后,除胞核着色外胞浆,间质等也不同程度被染上了淡兰色。分化的日的是让应着色的细胞核更加清晰,使不应着色的部分,尽可能褪尽。分化的时间要看分化液的浓度溶液的新旧,组织本身的特性,切片的厚薄及要求着色的深浅等因素酌情来定,最好是在显微镜观察盐酸分化下控制,一般分化数秒至30s。分化后的切片应立即入水中冲洗,让组织碱化,使胞核返兰。应注意的是:①入水动作要轻;②用细流水冲洗,请勿直接对着切片冲洗,以免脱片。③碱化采用自来水或温水(30-40℃),让其自然返兰并洗净残留的盐酸,有利于切片的长期保存。如果用碳酸锂氨水等弱碱来返兰,切片则较易褪色。》(12)盐酸分化染苏木素后,除胞核着色外71眼科学常见实验方法课件72眼科学常见实验方法课件73眼科学常见实验方法课件74眼科学常见实验方法课件75眼科学常见实验方法课件76眼科学常见实验方法课件77眼科学常见实验方法课件78眼科学常见实验方法课件79眼科学常见实验方法课件80眼科学常见实验方法课件81眼科学常见实验方法课件82眼科学常见实验方法课件83眼科学常见实验方法课件84眼科学常见实验方法课件85眼科学常见实验方法课件86眼科学常见实验方法课件87眼科学常见实验方法课件88眼科学常见实验方法课件89眼科学常见实验方法课件90眼科学常见实验方法课件91眼科学常见实验方法课件92眼科学常见实验方法课件93眼科学常见实验方法课件94眼科学常见实验方法课件95眼科学常见实验方法课件96眼科学常见实验方法课件97眼科学常见实验方法课件98眼科学常见实验方法课件99眼科学常见实验方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