基因工程药物-促红细胞生成素课件

基因工程药物促红细胞生成素(EPO)基因工程药物1EPO的概念EPO的用途EPo的纯化历EPO的销售情及其疗效史及工艺流程情况及其前景EPO2什么是EPO?EPO:是促红细胞生成素(Erythropoietin)的英文简称e促红细胞生成素:最初是从肾脏中分离出来能刺激前体红细胞增生、分化的一种细胞因子。e人体血液中的促红细胞生成素:是由肾脏和肝脏分泌的一种激素样物质,能够促进红细胞生成。它与其受体(EPOR结合后共同介导缺氧的生理反应什么是EPO?3EPo的用途e医疗用途:增加红血球的数目,用于贫血、组织断离、早产儿,用在癌学和血液学方面ca体育用途(兴奋剂):增加训练耐力和训练负荷,属于国际奥委会规定的违禁药物。在2019年北京奥运会中第一例的兴奋剂。EPo的用途4EPO的疗效31、肾性贫血患者EPO水平较低,在进行治疗过程中,往往通过注射EPO来提高体内EPO水平进行治疗,从而帮助病人增加红细胞数量,此时EPO水平有所上升。32、其他贫血如缺铁性贫血、巨细胞性贫血患者EPO水平不降低,但也可以使用EPO治疗,此时浓度也会有所升高33、再生障碍性贫血和骨髓造血功能不全患者EPo水平升高。EPO的疗效5EPo的纯化历史1、Miyake的七步法:纯化步骤太多,对设备及操作要求也较高,不适合工业生产的特点。2、Spivak利用凝集素亲和层析纯化EPO:由于凝集素亲和层析凝胶易被杂蛋白不可逆吸附,使得分离效果降低,成本增高,也不利于大规模生产。>3、近年来则利用三步层析法三步纯化基本流程等EPo的纯化历史6EPO的工艺流程①三步层析法1、染料配基亲和层析→反相疏水层析→离子交换层析;>2、染料配基亲和层析→反相疏水层析→分子筛层析>3、反相疏水层析→离子交换层析→分子筛层析。EPO的工艺流程7EPO的工艺流程②三步纯化基本流程>第一步:反相柱色谱样品浓缩约967%透析>第二步:DEAE离子交换色谱>第三步:分子筛色谱总回收率〉30%比活1510U/g蛋白EPO的工艺流程8第一步:反相色谱◆C6反相柱(2cm*2cm)(创新生物技术公司)令流程:上样50mmin(柱结合量约5mg蛋白/m介质)去离子水平衡至检测基线10%~80%乙醇胍线性梯度洗脱检测并收集含EPO主峰ELSA测定令结果:60%乙醇-1moL盐酸胍洗出EPo第一步:反相色谱9透析令透析液:10倍体积的10mmol/LTrisHCl(pH75}-2%蔗糖缓冲液透析次数:2令时间:5~6h透析10基因工程药物——促红细胞生成素课件11基因工程药物——促红细胞生成素课件12基因工程药物——促红细胞生成素课件13基因工程药物——促红细胞生成素课件14基因工程药物——促红细胞生成素课件15基因工程药物——促红细胞生成素课件16基因工程药物——促红细胞生成素课件17基因工程药物促红细胞生成素(EPO)基因工程药物18EPO的概念EPO的用途EPo的纯化历EPO的销售情及其疗效史及工艺流程情况及其前景EPO19什么是EPO?EPO:是促红细胞生成素(Erythropoietin)的英文简称e促红细胞生成素:最初是从肾脏中分离出来能刺激前体红细胞增生、分化的一种细胞因子。e人体血液中的促红细胞生成素:是由肾脏和肝脏分泌的一种激素样物质,能够促进红细胞生成。它与其受体(EPOR结合后共同介导缺氧的生理反应什么是EPO?20EPo的用途e医疗用途:增加红血球的数目,用于贫血、组织断离、早产儿,用在癌学和血液学方面ca体育用途(兴奋剂):增加训练耐力和训练负荷,属于国际奥委会规定的违禁药物。在2019年北京奥运会中第一例的兴奋剂。EPo的用途21EPO的疗效31、肾性贫血患者EPO水平较低,在进行治疗过程中,往往通过注射EPO来提高体内EPO水平进行治疗,从而帮助病人增加红细胞数量,此时EPO水平有所上升。32、其他贫血如缺铁性贫血、巨细胞性贫血患者EPO水平不降低,但也可以使用EPO治疗,此时浓度也会有所升高33、再生障碍性贫血和骨髓造血功能不全患者EPo水平升高。EPO的疗效22EPo的纯化历史1、Miyake的七步法:纯化步骤太多,对设备及操作要求也较高,不适合工业生产的特点。2、Spivak利用凝集素亲和层析纯化EPO:由于凝集素亲和层析凝胶易被杂蛋白不可逆吸附,使得分离效果降低,成本增高,也不利于大规模生产。>3、近年来则利用三步层析法三步纯化基本流程等EPo的纯化历史23EPO的工艺流程①三步层析法1、染料配基亲和层析→反相疏水层析→离子交换层析;>2、染料配基亲和层析→反相疏水层析→分子筛层析>3、反相疏水层析→离子交换层析→分子筛层析。EPO的工艺流程24EPO的工艺流程②三步纯化基本流程>第一步:反相柱色谱样品浓缩约967%透析>第二步:DEAE离子交换色谱>第三步:分子筛色谱总回收率〉30%比活1510U/g蛋白EPO的工艺流程25第一步:反相色谱◆C6反相柱(2cm*2cm)(创新生物技术公司)令流程:上样50mmin(柱结合量约5mg蛋白/m介质)去离子水平衡至检测基线10%~80%乙醇胍线性梯度洗脱检测并收集含EPO主峰ELSA测定令结果:60%乙醇-1moL盐酸胍洗出EPo第一步:反相色谱26透析令透析液:10倍体积的10mmol/LTrisHCl(pH75}-2%蔗糖缓冲液透析次数:2令时间:5~6h透析27基因工程药物——促红细胞生成素课件