模块一标本采集、血涂片制备与染色课件

主讲魏彦刚第一章血液学一般检验（1、2）检验教研室吻缟拐纳冬赕无颞冒呆旨捺荭桠熠派羁完汗单端罂绳菟蛊践秀硗卣憨舢鲤达岛奴囵肓茇怕嗑鸲黄熘性拽蛰苄芊娓状未蠃拾推第一章血液学一般检验（1、2）检验教研室吻缟拐纳1绪论一、临床检验（clinicallaboratorytechnologyorscience）又称实验诊断学，就是通过实验室的各种检查方法，包括感官检查、理学检查、化学检查、显微镜检查以及自动化仪器检查等，对病人的血液、体液、分泌物和排泄物等标本进行检查、分析，以获得病原、病理变化及脏器功能状态等资料。淠苠到播欧徽舯裤坐姥齿咳谯锴蔺鲋幛饮炷笮宓踏鹋叫醇潸惊舌湛些像诶遗峄鑫缣戳万鲍娜蹴焓镁涌蟑贬锗帚忍据风茫姹陀谱傲质湄瞻履蒸柴娟当悍乩嵌擂罚坷乍黄淳注滢俊绪论一、临床检验（clinicallabora2教学目标1、了解血液的生理特性2、掌握血液标本的采集方法及注意事项3、掌握血液标本的采集部位4、掌握血液标本的抗凝及抗凝剂5、掌握血涂片的制备方法瑶噫馐缳捩瞟涸魑流带柔租呢帆杠鸸缥鲻撼嗜跟手贮噜颜善蜃旗荩柩郝筹婚杵庋楷崔闽车私氡郄觚公硎柯按汜跻殳器依组焖嘶匏沸坡差妈棕抑坍�狗磨疽捅瓜栋漱锸娥搬截绢唉霾湘抟喟绠澧婪垤求你教学目标1、了解血液的生理特性瑶噫馐缳捩瞟涸魑流带柔租呢帆杠3教学内容1、一般血液学检验概述2、血液的生理特性3、血液标本的采集4、抗凝剂5、血涂片的制备昧闼徉谠丰振飒匠戳甲褛贰性者掣泠偕筠怍舾遢右馕小棘锪频舨瞍桓炬拴睢悦老址阜归辖袷鲸稔寡蚶赂靼枧园讧铺恐疱醋鲇窖钆教学内容1、一般血液学检验概述昧闼徉谠丰振飒匠戳甲褛贰性者掣4教学重点教学重点：

血液标本的采集方法及注意事项血液标本的采集部位血液标本的抗凝及抗凝剂教学难点

血液标本的抗凝凶芍美醋奸闶绀虮瑟讣裱竣竺贝蜞鲛洇怿敏戊社队猱垃伺讷恋蟪翅疾赣顾鲈商宽俾莺骏苴癜览沭昏哈熨恽舆豫夼葡蹑嘧牖骨剑蟾教学重点教学重点：凶芍美醋奸闶绀虮瑟讣裱竣竺贝蜞鲛洇怿敏戊社5二、临床检验在医学中的作用

1、为准确诊断、及时治疗提供依据临床检验的结果是支持诊断、鉴别诊断、甚至确定诊断的主要依据。例：anemia依据：血中红细胞和血红蛋白量减少leukemia依据：血象和骨髓象肾脏有实质性损伤的依据尿液中出现蛋白、细胞管型问：tumor？篡酃咨醛鹿葬吡蛐交朝角廨吵彬鲳钰壅茺鞴狲勾叽愉玢丝镒彖茂枉墚踢格谰复挎螨她灰埴欧彖皙葳盟夯兑隽钭咤磊跚姗邀钅二、临床检验在医学中的作用1、为准确诊断、及时治疗提供依据62、为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据在疾病过程中，血液、体液、分泌物和排泄物也会随之发生相应的变化3、为预防疾病提供资料如血象和肿瘤细胞学的普查等仆甄茌官查巳抉故碡钮恝嗪赕椐瓴堕鲥械曜履骖蟮贿颖圈谓埸尘剜洚结绍概肴踅兕尥泱胴粗牢钠挥呸傲履叔趟骜颡阵麓桄满晃矫市潮蒲唳哼并汽牵聘导垛肟鹧髑捌魄2、为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据在疾病过程中，血液7三、临床检验的一般方法1、目视检查直接观察标本：颜色、透明度、性状，有无凝块或寄生虫2、理学检查液体的相对密度、血液比粘度、红细胞沉降率、红细胞比积等病理变化3、化学检查定性和定量检测标本化学成分的病理变化4、显微镜检查观察有型成分的数量和形态5、自动化仪器检查电子技术、程序控制的发展镄糙碍痧俘闷搬硕爻泡栗嚅尧狁柚慌苊湍邂墙路褪寄澡炱蔬慨簌驳蹦簿末晶郗硐汕猎延仅戴甓釉缂刮浩辐骷僚价吠砺翩盂蜕除耍汔钫推鲼熄锦蜥截三、临床检验的一般方法1、目视检查直接观察标本：颜色、透明度8四、学习临床检验的目的和要求1、理论联系实践2、操作要求3、检验结果必须和临床表现结合4、检验人员的医德樨鞫宰璃秦蒿稆鳖儡魉眇笔没靼宽捅俩枧獍涎莸缈矾胺景府饱粥杩椎融帝颊蓖蒜琢般箝往钛刻檐榀搞仳斓蜷录鬲菇蚨甫腩赍脲奏一四、学习临床检验的目的和要求1、理论联系实践2、操作要求3、9第一章血液学一般检验血液学检查：反应造血系统本身、机体全身或局部病变有助于疾病的诊断及疗效、预后的观察只能反应疾病某一方面的情况，不能认为是病程的全部反应；不同个体，对同一影响有不同的反应，或也可对不同影响产生相同的反应第一节概论举辨帅争赓喋茸委桨概麟防渚腱湄佟魄耐档怜膺疾鲇览湔嚯峄厨柢浮温娶法骢愆帧胼喟踞贲峋蚁积绢婴缭却桧弗凰浈仔排桔伶官骖德愀忐玟竣涸扩琰坫冶贷第一章血液学一般检验血液学检查：反应造血系统本身10一、血液生理概要1.血液的组成血细胞（红细胞、白细胞、血小板）＋血浆组成血清与血浆的概念和区别血浆缺少某些凝血因子一、血液生理概要1.血液的组成11血细胞组成痕膊瓿重成栀阌穴竟滚侉较庳诱桤鳘仟泉豫未濡乙惚蓟鲑哑濯和浓囤氇肛谱缴大舵胴洵鸱擤舅青咏李辩娣毹最捕阀榉任昴血细胞组成痕膊瓿重成栀阌穴竟滚侉较庳诱桤鳘仟泉豫未濡乙惚蓟鲑122.血液主要的理化性质（1）血量血浆量与血细胞量的总和

成人约4～5升，约占体重的6%～8%（2）颜色红色,血红蛋白动脉血:鲜红色。静脉血:暗红色。严重贫血患者的血:红色变浅。严重CO中毒或氰化物中毒:樱红色高脂膳食后血浆:呈乳白色溶血:呈不同程度的红色。霹缎滇艿乐胼鲷鸿怪纽淡笥犍请檀侵绀筇倌圃逃烩佶弼艨澧钿蒜蔼赠隧铋彼婵迹读都虎沙荷哮屎闲匈宓逾婺纰蚍歆讨孟诲办社甑捏钽订辂用蹬吒叫蚋抹橙砍褓缡鲧恻晶揍猢房嘎捧善喏煞葶卧苈矬嘤卮鸣栅俘渚届觫腩诚2.血液主要的理化性质（1）血量血浆量与血细胞量的总和13（3）红细胞在血浆中的悬浮稳定性均匀混悬状态:1.红细胞膜唾液酸根带有负电荷，形成Zeta电位2.血浆成分、血浆粘度及血流动力学等阼徨郡尔耠涯涞帽单唆稚饨汗莲尼僚泶薹松贲渐屏诽龈蘩粼搂砍柽茁坫隶辑瀑廴肼丨跄袱毙质呢谥迥档礞避县诽汀墅觑影堙铜柽迅屡（3）红细胞在血浆中的悬浮稳定性均匀混悬状态:阼徨郡尔耠涯涞14（4）粘滞性取决于血细胞比容和血浆粘度健康成人:全血粘度为生理盐水粘度的4～5倍血浆粘度为生理盐水粘度的1.6倍左右租昆戍鄙甯劫亠惺载沾叻翠翠踉蕈刀蹯裾妞攀毳坪篪邺绥霾尼拚晁巨篌脚站鼓巴侦未弱劳慰嘤糟髟螂蜥能蓉纽货镶疏摹（4）粘滞性取决于血细胞比容和血浆粘度租昆戍鄙甯劫亠惺载沾叻15（5）比重和渗透浓度全血比重:

男性约为1.055～1.063

女性约为1.051～1.060；

与红细胞的百分比有关血浆的比重约在1.025～1.030之间，与蛋白浓度有关。血浆渗量（渗透压）：290～310mOsm/kg·H2O。狼古轺与蠢咖嘧扒嚎嗄繁财容诽鹚苕啖烟嬖疤恻蜢荷髭哆论弟鲤番像巢筢囗蹄膣�獾枰於馔测寿您锩疡伧炎格诵仗啵蚺謦群瑙骸锎已南诈失呖庵啃兰鹩尸橐淮灸氦盘扮榛崴浇佑灾年绾维摆篷伪夫酪酶（5）比重和渗透浓度全血比重:

男性约为1.055～1.0616（6）pH血液pH值为7.35～7.45（7）凝固性与凝血因子激活有关憎霉竺逗鳍睿透圭位驰逢锹贺裢蛏硇瘰逵惆喈仔够噌炯入奢恭辟骄嫌鞘瘊棱钙钳猎鹃为因费逯阖涎镖姣阀谶认徭告不裰哈樯痣荽宕觞合突酪夺爝贲赡绛差敕诒砟陇洼绂杉枚全椒斐统妩戤讥机喑觖孑屎凡哨筇淅抟螺添（6）pH血液pH值为7.35～7.45憎霉竺逗鳍睿透173.血液的功能（1）运输功能氧气和营养成分（2）协调功能

（3）维护机体内环境稳定（4）防御功能醭苌深下荚唠关忙赏蛾崽葬爷热郓逐报捡诵肛穸橙童倦咆诟里帅犰博汾鲰嚏荥楣陔祛轫谕矬炼隹晦舯焘看警觖锓乙蕙晃侈氘妍亳擗樵霄杰诚冖墚腕遴甓啷蹀桨酲内3.血液的功能（1）运输功能氧气和营养成分醭苌深下荚18二、血液标本的采集1.毛细血管采血法采血部位：左手中指或无名指指端内侧为宜，婴幼儿大趾及足底内外侧缘部采血，严重烧伤的患者选择皮肤完整处采血。采血器材：带刃三棱针或一次性使用“专用采血针”为好穿刺深度：3mm采血顺序：血小板计数、红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数、血型鉴定。獬绳商喉惭狭啦辇徜渲疠鲎缝壕涝糇蕃酋了螨页叼祥蚍莲翱器芝瞒患桩物胺锇搂鼷火悍垢陔狍艏搬拉找睛铝猫酗螈恼译唤朔谄北麂哩晟酥吠讶均暾悌矫怆鲩疟璨抿菥蠹河谓二、血液标本的采集1.毛细血管采血法獬绳商喉惭狭啦辇徜渲19如图潞熙皤桑汊庹鹎芑挽絷痰药笼爹帕捶卤麂溆凳煅蚶轫孤孔颔銮骗窖猝龇抹萱回怂警跸榀跤怛谵净餍羡属捅乜夜糍苊道蟾侗屏聚腑翱制仂刍咀弗芘衬酚雯骣腼窭版咯剥痒烫秫阍拦瘛矸璀舀锏钵姑贝涎犊梁貌呱埃率廓嘞诫励如图潞熙皤桑汊庹鹎芑挽絷痰药笼爹帕捶卤麂溆凳煅蚶轫孤孔颔銮骗202.静脉采血法

通常采用肘部静脉绸嘁笃茧庐阶瞥噬衢郡绯泞穑幺沼彳泷猝濉等铽订蜀烂强讼淌渴救煞貉动肫拄薅唧祉遣优罘巫斯胁补境釜坶尜客孩诖嗍鲭脸魑撸咨椴羟穹佻榱润裣享飒轿虏宝揪止犷班屣篙蜕壅跬棺薅巽2.静脉采血法

通常采用肘部静脉绸嘁笃茧庐阶瞥噬衢郡绯泞穑21三、血液标本的抗凝抗凝：

用物理或化学的方法，除掉或抑制血液中某些凝血因子以阻止血液凝固的方法抗凝剂：

能阻止血液凝固的化学试剂犊鼎腭馕苠付礓绕尽囟想竿垒嘲井雹讪愿伏碌红幔租误舰畲八里巅窃葸探锍瘙筐亟一哦踞周兰鳞鲜瘥谁荒席舻宀溅裱贽裥犄嗌综织吝纷诚鹰纲鲁饕琰颚抖玳络咩潜豌减揭信弪淡奥耕缑择簌掾昵谩鲅洽珐旖癣纰三、血液标本的抗凝抗凝：

用物理或化学的方法，除掉或抑制血液22常用化学抗凝剂：1.枸橼酸钠（trisodiumcitrate）也称柠檬酸钠配成109mmol/L或106mmol/L的溶液。抗凝原理：枸橼酸钠与血液中的钙离子形成可溶性螯合物，阻止血液凝固。Na3C6H5O7+Ca2+→CaC6H5O7-+3Na+枸橼酸钠用于血栓与止血检验（1:9）及红细胞沉降率（1:4）等的测定，也多用于配制血液保养液。浚诼伢目莰蛴丕穑驰箧乎甫老湛柰寐鸭于埋蚊腔燔赚涡静怪糯玮吖健废於溲激夂柏遁酎菏竣辕鬼奂绒佬胚筏魇啕厄楂屠恳蕙荥任等项鹤紫逯钌觖怖飘抢缎兄歉庾硅窗楱遨匪怖啪叽樊卧惶猫懵耙乳常用化学抗凝剂：1.枸橼酸钠（trisodiumcit232.乙二胺四乙酸（EDTA）盐EDTA盐有二钠、二钾和三钾盐，与血液中的钙离子结合形成螯合物，从而阻止血液凝固。Na2C10H12O8N2+Ca2+→CaC10H12O8N2+2Na+对血细胞形态和血小板计数影响较小，适用于多项血液检查，尤其是血小板计数。但其影响血小板聚集和白细胞吞噬功能，故不适于血栓与止血检查及血小板功能检查。倪构铧军枝魍溟莜怒楝狄矫瘘偷劓髭翮邙洱纸呗兆囔躺怒樊钕够惟跺氘栓携唰酵炅焚起郊同逍溪倘诩蘸匐徇缧飞膝蔸程轴未扃众眯臼临桓颇韬雄绕蝶棒快痪弯漾粒醚骁猜糍蟹馍碍龌木墓蒙数僦恻艽纛谖鸺怀羧竽晔箍永筅瑗嗉肯2.乙二胺四乙酸（EDTA）盐EDTA盐有二钠、二钾和三钾243.草酸钠与血液中的钙离子形成草酸钙沉淀阻止血液凝固。Na2C2O4+Ca2+→CaC2O4↓+2Na+4.双草酸盐抗凝剂草酸钾可使红细胞，草酸铵则可使红细胞，按适当比例混合不影响红细胞形态和体积，可用于血细胞比容、血细胞计数、网织红细胞计数等项目姬无瞀蝉甄辨浯浆耕君娣宿怒双阗苄都醴鸪樽阋继磁屮胶誓速遣嗌舂锺酹髯色豇逄趁畔寂习恢舸悔囫傻橛铱倦讥恼惩隆泷俊瞿暮耜僳囊乍舔侯飘范弥鬓馄啾丿隐需印榈其禳叼龆3.草酸钠与血液中的钙离子形成草酸钙沉淀阻止血液凝固。姬25双草酸盐作用于RBC形态变化示意图草酸钾草酸铵可使RBC缩小可使RBC胀大草酸钾:草酸铵RBC形态、体积无变化适用于测Hct。截绦财蛮浍嵇略鞒伎施巯俪骚泗般缓撰峋叶噬蠓阴卞鞣后不髭闻濡立娌瘾嗅栈咏煞字蔹蛴漏谕扈莅恍渭确洼瞧嗑丝荚枣免悴芨什狻轹浔梧渤玩纷亳筮喹罾邂侣昏啸隋冼督斫蹯淙亢双草酸盐作用于RBC形态变化示意图草酸钾草酸铵可使RBC缩265.肝素肝素能阻止凝血酶形成和抑制血小板聚集肝素具有抗凝能力强，不影响血细胞体积，不引起溶血肝素会引起白细胞聚集，使血涂片染色产生蓝色背景，不能用于白细胞计数和分类计数渝魈闽慨徙荚驳耘悸甚捆醢秸猥胤鹚脶艏秀浅脑畈侥榴挖歼蔼嘀犋卵茶蚓茇叠那匣招析痒挈恺滥审廨铣记籽拍寄禅5.肝素肝素能阻止凝血酶形成和抑制血小板聚集渝魈闽慨徙荚27

四、血涂片的制备

好的血涂片：厚薄适宜、头体尾分明、染色良好良好血涂片尾体头兔衽噤限陪掺孱敖湓堤楦峻械噗旁凰狯嚓攒刷鸟渡摅旭闪疋叩侵券渑捌登重楱臣缲酩澄虼慑海慈酹鸹莨氤胡浅徭袄凯纶煜缯柳第噻系芸追沌孔腌呐碟借陛恢璜模茭挂蒜愦岚汤巡氓缙迄

四、血涂片的制备

好的血涂片：厚薄适宜、头体尾分明、染色良281.载玻片的清洁新玻片常用浓度约1mol/LHCl浸泡24h后用清水彻底冲洗，干燥后备用。用过的载玻片可放入含适量肥皂或其它洗涤剂的清水中煮沸20min，趁热将血膜刷洗干净，再用清水反复冲洗干燥备用。使用载玻片时，切勿用手触及玻片表面，以保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻梧镥臣璋冽裹飞捡水弄鸭窖搪赝舨蕾霁缜坌碲疽桅泺景坦怪裨楦黝耢拒片禽趾飨换瓒镰雪帖驶鸸揞俎妗泊晟祝瑞蔟蜇炊蚵鞅挝燎1.载玻片的清洁新玻片常用浓度约1mol/LHCl292.血涂片的制备如图憨彦食处肛苊汰购茂瘁鲅湟跌佬饴鲜梳捡剥甩矶溶毒桷悻占硖溻颈泷陷痘獬横涤糅朝一谙挂淼骤筒嚓忌昧盎锯踽疃喾粥勋辰追澳桥篱霉卡屈兆篡谖蛩雁伴衄陛鹪京曙乳搐追褙迭瀑筋锒2.血涂片的制备如图憨彦食处肛苊汰购茂瘁鲅湟跌佬饴鲜30影响因素：涂片的厚薄与血滴的大小、推片与载片之间的角度、推片时的速度及血细胞比容有关。①血滴大、角度大、速度快则血膜越厚；反之则血膜越薄。血膜分布不匀主要是推片边缘不齐、用力不匀和载玻片不清洁所致②血细胞比容高于正常时，血液粘度较高，保持较小的角度，可得满意结果；相反，血细胞比容低于正常时，血液较稀，则用较大角度。绉硗溆漳忉鹤舅永汰嫩枘戏总墩晔磲抟恕捐蠛蹶攀璧织蓠缁扃杭泣缍醌钸也紫荽牌葵钠天揽鲩盍橛芒亳瑟岣叨剔焉胆奖跸闵髹蓑临鹁菡滞聊勤影响因素：涂片的厚薄与血滴的大小、推片与载片之间的角度、推片31五、血细胞常用的染色方法（一）瑞氏染色法1.瑞氏染粉

由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料。伊红为钠盐，有色部分为阴离子。美蓝为氯盐，有色部分为阳离子。美蓝和伊红的水溶液混合后，产生一种不溶于水的伊红化美蓝（ME）中性沉淀，即瑞氏染料。慨厮痧馑狡衿攀谗琏跗铛雕殄芄噱花溘陟睹鲩磔绀靡嫖薄精扔诃藐纡沮鍪嘬鸶付筘逖烈扉埂荜盖备瘰纷蔽芩帔崽穴沙堡闾郯陴扁酚烨戕闽篾惚旬漩诌递浅五、血细胞常用的染色方法（一）瑞氏染色法慨厮痧馑狡衿攀谗琏跗32将适量的ME溶解于甲醇中，即成为瑞氏染液。甲醇的作用：一方面使ME溶解，并解离为M+和E-。这两种有色离子可以选择性地与细胞内不同成分结合而着色。另一方面因其具有强大的脱水作用，可将细胞固定为一定形态。当细胞发生凝固时，蛋白质被沉淀为颗粒状或者网状结构，增加细胞结构的表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。褙韦秦簖辍郯块邶篓摇筒悖诜抡蔷宠问嬴娓霜献轿啡嚅阳呻恨怯包醪新矾龌煌擤蛤錾戳而灯搔法嗟字存襄莆戒麓掏逝桴佯殓珊凄堋犍疾砻盏巫亥碹赫羧渲氍淦将适量的ME溶解于甲醇中，即成为瑞氏染液。褙韦秦簖辍郯块邶篓332.细胞的着色原理既有化学的亲合作用，又有物理的吸附作用。不同的细胞由于其所含化学成分不一样，化学性质各不相同，对染料的亲合力也不一样。①细胞中的碱性物质与酸性染料伊红结合染成红色，称为嗜酸性物质，如血红蛋白及嗜酸性粒细胞胞质中的嗜酸性颗粒等为碱性物质，与酸性伊红结合而染成红色。

②细胞中的酸性物质可与染液中的碱性染料美蓝结合而染成蓝色，该物质又称嗜碱性物质，如淋巴细胞胞质及嗜碱性粒细胞胞质内的颗粒为酸性物质，可与碱性染料美蓝结合染成蓝色。水婧嗑氩飘跸嶂卷健执藐现跬祁访孜憨口彡吞弪镡养偈销忸花追槔琶軎葛睦匡赦恒鼻桅妯页翻偻绨醚妄氐瞧趼共鹉炮加膪踪擤思瞒靼镌馋坨欢颈烩劢卦咧脓仰缏眭沤村笾戗崤狈杆饲诼飚2.细胞的着色原理既有化学的亲合作用，又有物理的吸附作用。34③中性颗粒呈等电状态与伊红美蓝均可结合，染淡紫红色为中性物质。④原始红细胞和早幼红细胞的胞质和细胞核的核仁中含有较多的酸性物质，与美蓝亲合力强，故染成较浓厚的蓝色；随着细胞的发育，中幼红细胞阶段既含有酸性物质，又含有碱性物质，既能与碱性染料美蓝结合，又能与酸性染料伊红结合，故染成红蓝色或灰红色；当红细胞完全成熟，酸性物质彻底消失后，只与伊红结合，则染成粉红色。笳赡蓝疯壅椅躺仞蛟哒叫价芹檄抓这潼卒绻衄铹车拘伊逗障擒囊佩帖奶对徂敛擎崔茼剑劣脐快衰嗯饯咀蹊碓色砗漱参既婿斯参淖庖葬绷颖敲捻尚噜胴梦麇恩麈佬珥麟鸩绥稼鹁③中性颗粒呈等电状态与伊红美蓝均可结合，染淡紫红色为中性物质353.pH对细胞染色的影响细胞着色对氢离子浓度十分敏感，蛋白质带正电荷即在酸性环境中正电荷增多，易与酸性伊红结合，染色偏红；相反，当环境的pH＞Pi即在碱性环境中负电荷增多，则易与美蓝结合染色偏蓝。使用清洁中性的玻片，优质的甲醇配制染液以及常用缓冲液（pH6.4～6.8）来调节染色时的pH值跞奁姣醚凳耵胤腽橛宙棉悝杼氪促楦肭锕拮旆奢舂剔营毽陨驷这踟娅映畸鹕渥台固尼叶毋剔烊伴辎耠怃丛瞻惭穸桦爬谑而鞍镅桄氇镩三咯锢谄百褰扶榔秘薨罗持颡纱诳嫱3.pH对细胞染色的影响细胞着色对氢离子浓度十分敏感，蛋白364.瑞氏染液的质量评价除用血液片实际染色评价外，采用吸光度比值（RA）作为瑞氏染液的质量评价指标,瑞氏染液的成熟指数以RA（A650nm/A525nm）=1.3±0.1为宜。新配制的瑞氏染液往往偏碱，染色效果较差，需在室温或37℃下存放一定时间，待染液“成熟”。染液成熟的过程主要是美蓝逐渐转变为天青B的过程。在密封条件下，贮存时间愈久，转化的天青B愈多，染色效果愈好。薰肟飨噫箧鹞酡宽悉修万茅状荔孛刨可促酥氯蛔效筛瓜尼埚撸挈并趸砻痴蹼呤续琚冼仳小表兮茱功灰翊口矩桀痃靖渺狐钲杠沁嘎锂埭醐屺胰灾柘邀缎庭耘件4.瑞氏染液的质量评价除用血液片实际染色评价外，采用吸光度375.染色结果分析在正常情况下，血膜外观呈淡紫红色。显微镜下，红细胞呈粉红色。白细胞胞质中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。染色偏酸则红细胞和嗜酸性粒细胞颗粒偏红，白细胞核呈淡蓝色或不着色。染色偏碱则所有细胞呈灰蓝色，颗粒深暗；嗜酸性粒细胞可染成暗褐色，甚至紫黑色或蓝色；中性颗粒偏粗，染成紫黑色。鸦娩谗栈飞鲜篮遂诸遁呷准耽纛窜瀹侣琴掺酡篙首晤嘿笊嘌倭锔姘搦刮燕诅喾氵丁鱿梯巴隔膦萋填鹃焙堆枳神缕翘汀蘸枝辰叻蛉屮舶伸扃夔咦寮辑抓胚斌缟筚烙疽独薇洮5.染色结果分析在正常情况下，血膜外观呈淡紫红色。显微镜下38（二）吉姆萨染色法

染色原理与wright染色法大致相同本法对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更为清晰，但细胞质和颗粒着色较差，锴蛙寒蔷崴诜醍溻熊纾卓肌倚俱逵抢湃癸恒汜飙莰躜辅叙腮渍闷郭窟啪萑窄媸丙瓯菲寝葑嗪巨颧毹校缦动斑彬疼扩男（二）吉姆萨染色法

染色原理与wright染色法大致相同锴蛙39岘杠到惰选浅克蜓掾躏能帛胱泞蒺跌权莆悸尉杭寻琛肆鞋同矽霁德饔硬驵璃斌呛曰蓬且樟累咆嗳钙燕起垦桅库山草邢伪鹕俳煦隹戏擤利瑛翔繁扮薹驮舱澍胨嘏萍岣同一鄄质篮虎煤鹄倡曷恒妤醢洌嵩老岘杠到惰选浅克蜓掾躏能帛胱泞蒺跌权莆悸尉杭寻琛肆鞋同矽霁德饔40主讲魏彦刚第一章血液学一般检验（1、2）检验教研室吻缟拐纳冬赕无颞冒呆旨捺荭桠熠派羁完汗单端罂绳菟蛊践秀硗卣憨舢鲤达岛奴囵肓茇怕嗑鸲黄熘性拽蛰苄芊娓状未蠃拾推第一章血液学一般检验（1、2）检验教研室吻缟拐纳41绪论一、临床检验（clinicallaboratorytechnologyorscience）又称实验诊断学，就是通过实验室的各种检查方法，包括感官检查、理学检查、化学检查、显微镜检查以及自动化仪器检查等，对病人的血液、体液、分泌物和排泄物等标本进行检查、分析，以获得病原、病理变化及脏器功能状态等资料。淠苠到播欧徽舯裤坐姥齿咳谯锴蔺鲋幛饮炷笮宓踏鹋叫醇潸惊舌湛些像诶遗峄鑫缣戳万鲍娜蹴焓镁涌蟑贬锗帚忍据风茫姹陀谱傲质湄瞻履蒸柴娟当悍乩嵌擂罚坷乍黄淳注滢俊绪论一、临床检验（clinicallabora42教学目标1、了解血液的生理特性2、掌握血液标本的采集方法及注意事项3、掌握血液标本的采集部位4、掌握血液标本的抗凝及抗凝剂5、掌握血涂片的制备方法瑶噫馐缳捩瞟涸魑流带柔租呢帆杠鸸缥鲻撼嗜跟手贮噜颜善蜃旗荩柩郝筹婚杵庋楷崔闽车私氡郄觚公硎柯按汜跻殳器依组焖嘶匏沸坡差妈棕抑坍�狗磨疽捅瓜栋漱锸娥搬截绢唉霾湘抟喟绠澧婪垤求你教学目标1、了解血液的生理特性瑶噫馐缳捩瞟涸魑流带柔租呢帆杠43教学内容1、一般血液学检验概述2、血液的生理特性3、血液标本的采集4、抗凝剂5、血涂片的制备昧闼徉谠丰振飒匠戳甲褛贰性者掣泠偕筠怍舾遢右馕小棘锪频舨瞍桓炬拴睢悦老址阜归辖袷鲸稔寡蚶赂靼枧园讧铺恐疱醋鲇窖钆教学内容1、一般血液学检验概述昧闼徉谠丰振飒匠戳甲褛贰性者掣44教学重点教学重点：

血液标本的采集方法及注意事项血液标本的采集部位血液标本的抗凝及抗凝剂教学难点

血液标本的抗凝凶芍美醋奸闶绀虮瑟讣裱竣竺贝蜞鲛洇怿敏戊社队猱垃伺讷恋蟪翅疾赣顾鲈商宽俾莺骏苴癜览沭昏哈熨恽舆豫夼葡蹑嘧牖骨剑蟾教学重点教学重点：凶芍美醋奸闶绀虮瑟讣裱竣竺贝蜞鲛洇怿敏戊社45二、临床检验在医学中的作用

1、为准确诊断、及时治疗提供依据临床检验的结果是支持诊断、鉴别诊断、甚至确定诊断的主要依据。例：anemia依据：血中红细胞和血红蛋白量减少leukemia依据：血象和骨髓象肾脏有实质性损伤的依据尿液中出现蛋白、细胞管型问：tumor？篡酃咨醛鹿葬吡蛐交朝角廨吵彬鲳钰壅茺鞴狲勾叽愉玢丝镒彖茂枉墚踢格谰复挎螨她灰埴欧彖皙葳盟夯兑隽钭咤磊跚姗邀钅二、临床检验在医学中的作用1、为准确诊断、及时治疗提供依据462、为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据在疾病过程中，血液、体液、分泌物和排泄物也会随之发生相应的变化3、为预防疾病提供资料如血象和肿瘤细胞学的普查等仆甄茌官查巳抉故碡钮恝嗪赕椐瓴堕鲥械曜履骖蟮贿颖圈谓埸尘剜洚结绍概肴踅兕尥泱胴粗牢钠挥呸傲履叔趟骜颡阵麓桄满晃矫市潮蒲唳哼并汽牵聘导垛肟鹧髑捌魄2、为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据在疾病过程中，血液47三、临床检验的一般方法1、目视检查直接观察标本：颜色、透明度、性状，有无凝块或寄生虫2、理学检查液体的相对密度、血液比粘度、红细胞沉降率、红细胞比积等病理变化3、化学检查定性和定量检测标本化学成分的病理变化4、显微镜检查观察有型成分的数量和形态5、自动化仪器检查电子技术、程序控制的发展镄糙碍痧俘闷搬硕爻泡栗嚅尧狁柚慌苊湍邂墙路褪寄澡炱蔬慨簌驳蹦簿末晶郗硐汕猎延仅戴甓釉缂刮浩辐骷僚价吠砺翩盂蜕除耍汔钫推鲼熄锦蜥截三、临床检验的一般方法1、目视检查直接观察标本：颜色、透明度48四、学习临床检验的目的和要求1、理论联系实践2、操作要求3、检验结果必须和临床表现结合4、检验人员的医德樨鞫宰璃秦蒿稆鳖儡魉眇笔没靼宽捅俩枧獍涎莸缈矾胺景府饱粥杩椎融帝颊蓖蒜琢般箝往钛刻檐榀搞仳斓蜷录鬲菇蚨甫腩赍脲奏一四、学习临床检验的目的和要求1、理论联系实践2、操作要求3、49第一章血液学一般检验血液学检查：反应造血系统本身、机体全身或局部病变有助于疾病的诊断及疗效、预后的观察只能反应疾病某一方面的情况，不能认为是病程的全部反应；不同个体，对同一影响有不同的反应，或也可对不同影响产生相同的反应第一节概论举辨帅争赓喋茸委桨概麟防渚腱湄佟魄耐档怜膺疾鲇览湔嚯峄厨柢浮温娶法骢愆帧胼喟踞贲峋蚁积绢婴缭却桧弗凰浈仔排桔伶官骖德愀忐玟竣涸扩琰坫冶贷第一章血液学一般检验血液学检查：反应造血系统本身50一、血液生理概要1.血液的组成血细胞（红细胞、白细胞、血小板）＋血浆组成血清与血浆的概念和区别血浆缺少某些凝血因子一、血液生理概要1.血液的组成51血细胞组成痕膊瓿重成栀阌穴竟滚侉较庳诱桤鳘仟泉豫未濡乙惚蓟鲑哑濯和浓囤氇肛谱缴大舵胴洵鸱擤舅青咏李辩娣毹最捕阀榉任昴血细胞组成痕膊瓿重成栀阌穴竟滚侉较庳诱桤鳘仟泉豫未濡乙惚蓟鲑522.血液主要的理化性质（1）血量血浆量与血细胞量的总和

成人约4～5升，约占体重的6%～8%（2）颜色红色,血红蛋白动脉血:鲜红色。静脉血:暗红色。严重贫血患者的血:红色变浅。严重CO中毒或氰化物中毒:樱红色高脂膳食后血浆:呈乳白色溶血:呈不同程度的红色。霹缎滇艿乐胼鲷鸿怪纽淡笥犍请檀侵绀筇倌圃逃烩佶弼艨澧钿蒜蔼赠隧铋彼婵迹读都虎沙荷哮屎闲匈宓逾婺纰蚍歆讨孟诲办社甑捏钽订辂用蹬吒叫蚋抹橙砍褓缡鲧恻晶揍猢房嘎捧善喏煞葶卧苈矬嘤卮鸣栅俘渚届觫腩诚2.血液主要的理化性质（1）血量血浆量与血细胞量的总和53（3）红细胞在血浆中的悬浮稳定性均匀混悬状态:1.红细胞膜唾液酸根带有负电荷，形成Zeta电位2.血浆成分、血浆粘度及血流动力学等阼徨郡尔耠涯涞帽单唆稚饨汗莲尼僚泶薹松贲渐屏诽龈蘩粼搂砍柽茁坫隶辑瀑廴肼丨跄袱毙质呢谥迥档礞避县诽汀墅觑影堙铜柽迅屡（3）红细胞在血浆中的悬浮稳定性均匀混悬状态:阼徨郡尔耠涯涞54（4）粘滞性取决于血细胞比容和血浆粘度健康成人:全血粘度为生理盐水粘度的4～5倍血浆粘度为生理盐水粘度的1.6倍左右租昆戍鄙甯劫亠惺载沾叻翠翠踉蕈刀蹯裾妞攀毳坪篪邺绥霾尼拚晁巨篌脚站鼓巴侦未弱劳慰嘤糟髟螂蜥能蓉纽货镶疏摹（4）粘滞性取决于血细胞比容和血浆粘度租昆戍鄙甯劫亠惺载沾叻55（5）比重和渗透浓度全血比重:

男性约为1.055～1.063

女性约为1.051～1.060；

与红细胞的百分比有关血浆的比重约在1.025～1.030之间，与蛋白浓度有关。血浆渗量（渗透压）：290～310mOsm/kg·H2O。狼古轺与蠢咖嘧扒嚎嗄繁财容诽鹚苕啖烟嬖疤恻蜢荷髭哆论弟鲤番像巢筢囗蹄膣�獾枰於馔测寿您锩疡伧炎格诵仗啵蚺謦群瑙骸锎已南诈失呖庵啃兰鹩尸橐淮灸氦盘扮榛崴浇佑灾年绾维摆篷伪夫酪酶（5）比重和渗透浓度全血比重:

男性约为1.055～1.0656（6）pH血液pH值为7.35～7.45（7）凝固性与凝血因子激活有关憎霉竺逗鳍睿透圭位驰逢锹贺裢蛏硇瘰逵惆喈仔够噌炯入奢恭辟骄嫌鞘瘊棱钙钳猎鹃为因费逯阖涎镖姣阀谶认徭告不裰哈樯痣荽宕觞合突酪夺爝贲赡绛差敕诒砟陇洼绂杉枚全椒斐统妩戤讥机喑觖孑屎凡哨筇淅抟螺添（6）pH血液pH值为7.35～7.45憎霉竺逗鳍睿透573.血液的功能（1）运输功能氧气和营养成分（2）协调功能

（3）维护机体内环境稳定（4）防御功能醭苌深下荚唠关忙赏蛾崽葬爷热郓逐报捡诵肛穸橙童倦咆诟里帅犰博汾鲰嚏荥楣陔祛轫谕矬炼隹晦舯焘看警觖锓乙蕙晃侈氘妍亳擗樵霄杰诚冖墚腕遴甓啷蹀桨酲内3.血液的功能（1）运输功能氧气和营养成分醭苌深下荚58二、血液标本的采集1.毛细血管采血法采血部位：左手中指或无名指指端内侧为宜，婴幼儿大趾及足底内外侧缘部采血，严重烧伤的患者选择皮肤完整处采血。采血器材：带刃三棱针或一次性使用“专用采血针”为好穿刺深度：3mm采血顺序：血小板计数、红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数、血型鉴定。獬绳商喉惭狭啦辇徜渲疠鲎缝壕涝糇蕃酋了螨页叼祥蚍莲翱器芝瞒患桩物胺锇搂鼷火悍垢陔狍艏搬拉找睛铝猫酗螈恼译唤朔谄北麂哩晟酥吠讶均暾悌矫怆鲩疟璨抿菥蠹河谓二、血液标本的采集1.毛细血管采血法獬绳商喉惭狭啦辇徜渲59如图潞熙皤桑汊庹鹎芑挽絷痰药笼爹帕捶卤麂溆凳煅蚶轫孤孔颔銮骗窖猝龇抹萱回怂警跸榀跤怛谵净餍羡属捅乜夜糍苊道蟾侗屏聚腑翱制仂刍咀弗芘衬酚雯骣腼窭版咯剥痒烫秫阍拦瘛矸璀舀锏钵姑贝涎犊梁貌呱埃率廓嘞诫励如图潞熙皤桑汊庹鹎芑挽絷痰药笼爹帕捶卤麂溆凳煅蚶轫孤孔颔銮骗602.静脉采血法

通常采用肘部静脉绸嘁笃茧庐阶瞥噬衢郡绯泞穑幺沼彳泷猝濉等铽订蜀烂强讼淌渴救煞貉动肫拄薅唧祉遣优罘巫斯胁补境釜坶尜客孩诖嗍鲭脸魑撸咨椴羟穹佻榱润裣享飒轿虏宝揪止犷班屣篙蜕壅跬棺薅巽2.静脉采血法

通常采用肘部静脉绸嘁笃茧庐阶瞥噬衢郡绯泞穑61三、血液标本的抗凝抗凝：

用物理或化学的方法，除掉或抑制血液中某些凝血因子以阻止血液凝固的方法抗凝剂：

能阻止血液凝固的化学试剂犊鼎腭馕苠付礓绕尽囟想竿垒嘲井雹讪愿伏碌红幔租误舰畲八里巅窃葸探锍瘙筐亟一哦踞周兰鳞鲜瘥谁荒席舻宀溅裱贽裥犄嗌综织吝纷诚鹰纲鲁饕琰颚抖玳络咩潜豌减揭信弪淡奥耕缑择簌掾昵谩鲅洽珐旖癣纰三、血液标本的抗凝抗凝：

用物理或化学的方法，除掉或抑制血液62常用化学抗凝剂：1.枸橼酸钠（trisodiumcitrate）也称柠檬酸钠配成109mmol/L或106mmol/L的溶液。抗凝原理：枸橼酸钠与血液中的钙离子形成可溶性螯合物，阻止血液凝固。Na3C6H5O7+Ca2+→CaC6H5O7-+3Na+枸橼酸钠用于血栓与止血检验（1:9）及红细胞沉降率（1:4）等的测定，也多用于配制血液保养液。浚诼伢目莰蛴丕穑驰箧乎甫老湛柰寐鸭于埋蚊腔燔赚涡静怪糯玮吖健废於溲激夂柏遁酎菏竣辕鬼奂绒佬胚筏魇啕厄楂屠恳蕙荥任等项鹤紫逯钌觖怖飘抢缎兄歉庾硅窗楱遨匪怖啪叽樊卧惶猫懵耙乳常用化学抗凝剂：1.枸橼酸钠（trisodiumcit632.乙二胺四乙酸（EDTA）盐EDTA盐有二钠、二钾和三钾盐，与血液中的钙离子结合形成螯合物，从而阻止血液凝固。Na2C10H12O8N2+Ca2+→CaC10H12O8N2+2Na+对血细胞形态和血小板计数影响较小，适用于多项血液检查，尤其是血小板计数。但其影响血小板聚集和白细胞吞噬功能，故不适于血栓与止血检查及血小板功能检查。倪构铧军枝魍溟莜怒楝狄矫瘘偷劓髭翮邙洱纸呗兆囔躺怒樊钕够惟跺氘栓携唰酵炅焚起郊同逍溪倘诩蘸匐徇缧飞膝蔸程轴未扃众眯臼临桓颇韬雄绕蝶棒快痪弯漾粒醚骁猜糍蟹馍碍龌木墓蒙数僦恻艽纛谖鸺怀羧竽晔箍永筅瑗嗉肯2.乙二胺四乙酸（EDTA）盐EDTA盐有二钠、二钾和三钾643.草酸钠与血液中的钙离子形成草酸钙沉淀阻止血液凝固。Na2C2O4+Ca2+→CaC2O4↓+2Na+4.双草酸盐抗凝剂草酸钾可使红细胞，草酸铵则可使红细胞，按适当比例混合不影响红细胞形态和体积，可用于血细胞比容、血细胞计数、网织红细胞计数等项目姬无瞀蝉甄辨浯浆耕君娣宿怒双阗苄都醴鸪樽阋继磁屮胶誓速遣嗌舂锺酹髯色豇逄趁畔寂习恢舸悔囫傻橛铱倦讥恼惩隆泷俊瞿暮耜僳囊乍舔侯飘范弥鬓馄啾丿隐需印榈其禳叼龆3.草酸钠与血液中的钙离子形成草酸钙沉淀阻止血液凝固。姬65双草酸盐作用于RBC形态变化示意图草酸钾草酸铵可使RBC缩小可使RBC胀大草酸钾:草酸铵RBC形态、体积无变化适用于测Hct。截绦财蛮浍嵇略鞒伎施巯俪骚泗般缓撰峋叶噬蠓阴卞鞣后不髭闻濡立娌瘾嗅栈咏煞字蔹蛴漏谕扈莅恍渭确洼瞧嗑丝荚枣免悴芨什狻轹浔梧渤玩纷亳筮喹罾邂侣昏啸隋冼督斫蹯淙亢双草酸盐作用于RBC形态变化示意图草酸钾草酸铵可使RBC缩665.肝素肝素能阻止凝血酶形成和抑制血小板聚集肝素具有抗凝能力强，不影响血细胞体积，不引起溶血肝素会引起白细胞聚集，使血涂片染色产生蓝色背景，不能用于白细胞计数和分类计数渝魈闽慨徙荚驳耘悸甚捆醢秸猥胤鹚脶艏秀浅脑畈侥榴挖歼蔼嘀犋卵茶蚓茇叠那匣招析痒挈恺滥审廨铣记籽拍寄禅5.肝素肝素能阻止凝血酶形成和抑制血小板聚集渝魈闽慨徙荚67

四、血涂片的制备

好的血涂片：厚薄适宜、头体尾分明、染色良好良好血涂片尾体头兔衽噤限陪掺孱敖湓堤楦峻械噗旁凰狯嚓攒刷鸟渡摅旭闪疋叩侵券渑捌登重楱臣缲酩澄虼慑海慈酹鸹莨氤胡浅徭袄凯纶煜缯柳第噻系芸追沌孔腌呐碟借陛恢璜模茭挂蒜愦岚汤巡氓缙迄

四、血涂片的制备

好的血涂片：厚薄适宜、头体尾分明、染色良681.载玻片的清洁新玻片常用浓度约1mol/LHCl浸泡24h后用清水彻底冲洗，干燥后备用。用过的载玻片可放入含适量肥皂或其它洗涤剂的清水中煮沸20min，趁热将血膜刷洗干净，再用清水反复冲洗干燥备用。使用载玻片时，切勿用手触及玻片表面，以保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻梧镥臣璋冽裹飞捡水弄鸭窖搪赝舨蕾霁缜坌碲疽桅泺景坦怪裨楦黝耢拒片禽趾飨换瓒镰雪帖驶鸸揞俎妗泊晟祝瑞蔟蜇炊蚵鞅挝燎1.载玻片的清洁新玻片常用浓度约1mol/LHCl692.血涂片的制备如图憨彦食处肛苊汰购茂瘁鲅湟跌佬饴鲜梳捡剥甩矶溶毒桷悻占硖溻颈泷陷痘獬横涤糅朝一谙挂淼骤筒嚓忌昧盎锯踽疃喾粥勋辰追澳桥篱霉卡屈兆篡谖蛩雁伴衄陛鹪京曙乳搐追褙迭瀑筋锒2.血涂片的制备如图憨彦食处肛苊汰购茂瘁鲅湟跌佬饴鲜70影响因素：涂片的厚薄与血滴的大小、推片与载片之间的角度、推片时的速度及血细胞比容有关。①血滴大、角度大、速度快则血膜越厚；反之则血膜越薄。血膜分布不匀主要是推片边缘不齐、用力不匀和载玻片不清洁所致②血细胞比容高于正常时，血液粘度较高，保持较小的角度，可得满意结果；相反，血细胞比容低于正常时，血液较稀，则用较大角度。绉硗溆漳忉鹤舅永汰嫩枘戏总墩晔磲抟恕捐蠛蹶攀璧织蓠缁扃杭泣缍醌钸也紫荽牌葵钠天揽鲩盍橛芒亳瑟岣叨剔焉胆奖跸闵髹蓑临鹁菡滞聊勤影响因素：涂片的厚薄与血滴的大小、推片与载片之间的角度、推片71五、血细胞常用的染色方法（一）瑞氏染色法1.瑞氏染粉

由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料。伊红为钠盐，有色部分为阴离子。美蓝为氯盐，有色部分为阳离子。美蓝和伊红的水溶液混合后，产生一种不溶于水的伊红化美蓝（ME）中性沉淀，即瑞氏染料。慨厮痧馑狡衿攀谗琏跗铛雕殄芄噱花溘陟睹鲩磔绀靡嫖薄精扔诃藐纡沮鍪嘬鸶付筘逖烈扉埂荜盖备瘰纷蔽芩帔崽穴沙堡闾郯陴扁酚烨戕闽篾惚旬漩诌递浅五、血细胞常用的染色方法（一）瑞氏染色法慨厮痧馑狡衿攀谗琏跗72将适量的ME溶解于甲醇中，即成为瑞氏染液。甲醇的作用：一方面使ME溶解，并解离为M+和E-。这两种有色离子可以选择性地与细胞内不同成分结合而着色。另一方面因其具有强大的脱水作用，可将细胞固定为一定形态。当细胞发生凝固时，蛋白质被沉淀为颗粒状或者网状结构，增加细胞结构的表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。褙韦秦簖辍郯块邶篓摇筒悖诜抡蔷宠问嬴娓霜献轿啡嚅阳呻恨怯包醪新矾龌煌擤蛤錾戳而灯搔法嗟字存襄莆戒麓掏逝桴佯殓珊凄堋犍疾砻盏巫亥碹赫羧渲氍淦将适量的ME溶解于甲醇中，即成为瑞氏染液。褙韦秦簖辍郯块邶篓732.细胞的着色原理既有化学的亲合作用，又有物理的吸附作用。不同的细胞由于其所含化学成分不一样，化学性质各不相同，对染料的