免疫组化结果判断及常见问题的分析课件

免疫组化结果判断

及常见问题分析武汉大学病理学教研室杨飞1精选版课件ppt免疫组化结果判断

及常见问题分析武汉大学病理学教研室2精选版课件ppt2精选版课件ppt肝脏：CK8理想着色，胆管上皮细胞强阳性，肝细胞呈不同层次阳性。3精选版课件ppt肝脏：CK8理想着色，胆管上皮细胞强阳性，3精选版课件ppt

panCK（AE1/AE3）在肝脏理想的染色，采用了热修复。肝细胞膜、胆管强而清晰的着色。背景干净。4精选版课件pptpanCK（AE1/AE3）在肝脏理想的染色，一、特异性染色的判断1.特定的定位

细胞阳性——根据靶抗原不同而呈现胞膜型、胞浆型或胞核型间质阳性——表现为细胞外着色，局限性或弥散性2.染色的不均一性阳性细胞的染色分布不均，片状或点状散在分布染色强弱不等，颜色深浅反映抗原量的多少3.排除人为造成的非特异性染色

切片的折叠、刀痕，色素沉着，组织细胞坏死。4.颗粒性显色

DAB显色在高倍镜下呈颗粒状而非均匀着色。5精选版课件ppt一、特异性染色的判断1.特定的定位5精选版课件ppt免疫组化标准化照片CK10CD44v6ER6精选版课件ppt免疫组化标准化照片CK10CD44v6ER6精选版课件ppt7精选版课件ppt7精选版课件ppt8精选版课件ppt8精选版课件ppt9精选版课件ppt9精选版课件ppt10精选版课件ppt10精选版课件ppt11精选版课件ppt11精选版课件ppt合格的免疫组化染色切片

是正确判断染色结果的基础和前提

不合格的免疫组化染色切片

容易导致误判12精选版课件ppt合格的免疫组化染色切片

是正确判断染色结果的基础和前提

不C-erbB-2优良中差13精选版课件pptC-erbB-2优良中差13精选版课件ppt4321ER14精选版课件ppt4321ER14精选版课件ppt子宫内膜PR染色，修复不足子宫内膜PR染色，修复良好

PR15精选版课件ppt子宫内膜PR染色，修复不足子宫内膜PR编号阳性片待检片阴性对照结论12345－＋－＋＋－＋＋－＋－＋－－－操作失误，抗体失效非特异性着色阳性片不含靶抗原待检片不含定位抗原待检片含定位抗原二、染色结果的判断16精选版课件ppt编号阳性片待检片阴性对照结论1－－－操作失误，抗体失效二、PCNAS-P×400S-P×4001-dayCM4-dayCM阳性强度20×10视野下，随机选取5个视野，测100个阳性细胞的平均光密度即为此片的阳性强度。三、结果分析17精选版课件pptPCNAS-P×400S-P×4001-dayCM4-P53阳性细胞百分比计数100个瘤细胞，其中阳性细胞的比例：＜5%（－）5%~30%（＋）30%~50%（＋＋）＞50%（＋＋＋）18精选版课件pptP53阳性细胞百分比18精选版课件pptPCNABarnes法A：瘤细胞显色有无及深浅0（不着色）1（浅黄色）2（棕黄色）3（棕褐色）B：显色细胞的比例1（1%~10%）2（11%~50%）3（51%~80%）4（＞80%）评分=A×B0分：阴性1~4分：弱阳性＞4分：强阳性19精选版课件pptPCNABarnes法19精选版课件ppt胶原染色阳性面积百分比40×10视野，选取5个视野，计算阳性区域面积占整个参考面积的百分率。20精选版课件ppt胶原染色阳性面积百分比20精选版课件pptCD34Weidner法（MVD计数）孤立的棕黄色细胞族代表一条微血管。低倍镜下找到组织内密度最高区域。40×10视野下计数微血管数目。21精选版课件pptCD34Weidner法（MVD计数）21精选版课件pptK-rasVEGF22精选版课件pptK-rasVEGF22精选版课件ppt附：定量分析——图象处理系统

1、图象处理：利用仪器按照不同的目的进行图象的修正、变换、特征提取和测量。1）“狭义”指消除图象的模糊不清部分，校正畸变。2）“广义”包括对图象的结构分析，提取特征进行测量。

23精选版课件ppt附：定量分析——图象处理系统23精选版课件ppt2、图象处理系统组成图象输入（显微镜、扫描仪）图象处理运算（病理图文分析软件）图象、数据输出

24精选版课件ppt2、图象处理系统组成24精选版课件ppt

3、图象处理系统功能

几何形态学定量分析细胞核、浆的大小、面积、核浆比；细胞分布密度、个数；血管、腺体的面积、密度；间质的面积

免疫组织化学分析按着色灰度分类，计算阳性、阴性细胞的面积含量DNA倍体分析计算正常细胞及肿瘤细胞DNA含量，给出倍体参数、DNA参数分布直方图

AgNOR分析颗粒分析：数目、大小、面积、比例

25精选版课件ppt25精选版课件ppt26精选版课件ppt26精选版课件ppt四、免疫组化异常着色及对策1.非特异性着色及其对策非特异性着色原因对策操作过程冲洗不充分每步冲洗3×5min内源性过氧化物酶3％H2O2封闭内源性生物素使用生物素阻断试剂盒阻断电荷吸附非免疫动物血清封闭抗体不纯采用单克隆抗体切片制片不当改善取材和制片加试剂后切片干燥防止切片干燥27精选版课件ppt四、免疫组化异常着色及对策1.非特异性着色及其对策非特异性着内源性生物素—肾小管28精选版课件ppt内源性生物素—肾小管28精选版课件ppt内源性生物素—淋巴结转移性甲状腺腺癌29精选版课件ppt内源性生物素—淋巴结转移性甲状腺腺癌29精选版课件ppt蜕膜组织部分胞核PR阳性，血管内红细胞过氧化物酶显色30精选版课件ppt蜕膜组织部分胞核PR阳性，血管内红细胞过氧化物酶显色30精嗜酸性粒细胞中细胞色素显色31精选版课件ppt嗜酸性粒细胞中细胞色素显色31精选版课件ppt吞噬细胞内

含铁血黄素

32精选版课件ppt吞噬细胞内含铁血黄素32精选版课件ppt坏死组织着色：AE1/AE333精选版课件ppt坏死组织着色：AE1/AE333精选版课件ppt坏死组织着色34精选版课件ppt坏死组织着色34精选版课件ppt交叉反应：乳腺ki-67组织细胞胞浆着色35精选版课件ppt交叉反应：乳腺ki-67组织细胞胞浆着色35精选版课件ppt黑色素瘤，细胞内含黑色素，呈紫黑色，HE染色36精选版课件ppt黑色素瘤，细胞内含黑色素，呈紫黑色，HE染色36精选版课件灶状着色：机械原因着色37精选版课件ppt灶状着色：机械原因着色37精选版课件pptCyclinD1套细胞淋巴瘤全片着色38精选版课件pptCyclinD1套细胞淋巴瘤全片着色38精选版课件ppt全片着色39精选版课件ppt全片着色39精选版课件ppt边缘着色40精选版课件ppt边缘着色40精选版课件ppt“阴阳脸”着色41精选版课件ppt“阴阳脸”着色41精选版课件ppt气泡42精选版课件ppt气泡42精选版课件ppt非特异性着色原因对策操作过程冲洗不充分每步冲洗3×5min内源性过氧化物酶3％H2O2封闭内源性生物素使用生物素阻断试剂盒阻断电荷吸附非免疫动物血清封闭抗体不纯采用单克隆抗体切片制片不当改善取材和制片加试剂后切片干燥防止切片干燥非特异性着色及其对策43精选版课件ppt非特异性着色原因对策操作过程冲洗不充分每步冲洗3×5min内无信号片CD3044精选版课件ppt无信号片CD3044精选版课件ppt2.染色的假阴性及其对策染色假阴性原因对策组织处理不当（固定、浸蜡）改善条件，重取材一抗与二抗种属连接错误确定抗体种属无误抗体失效不得使用过期的试剂盒显色系统不相适配更换适配的显色系统操作不当，遗漏重要步骤严格遵守操作规程45精选版课件ppt2.染色的假阴性及其对策染色假阴性原因对策组织处理不当（固无色或浅色片MCL理想的CD5着色。所有的瘤细胞都着色很强。散在的T细胞着色比瘤细胞深。MCL的CD5染色不足(一抗浓度太低)。MCL瘤细胞几乎都没有着色。46精选版课件ppt无色或浅色片MCL理想的CD5着色。所有的瘤细胞都着色很强3.染色过弱原因及其对策染色过弱原因对策抗体浓度过低，孵育时间过短提高浓度，延长时间滴加试剂时缓冲液未沥干滴加试剂前沥干多余水分过度蛋白封闭缩短封闭时间抗原被破坏新鲜组织及时固定，固定时间不要超过24小时室温太低，<15℃适当延长孵育时间47精选版课件ppt3.染色过弱原因及其对策染色过弱原因对策抗体浓度过低，孵育免疫组化结果判断

及常见问题分析武汉大学病理学教研室杨飞48精选版课件ppt免疫组化结果判断

及常见问题分析武汉大学病理学教研室49精选版课件ppt2精选版课件ppt肝脏：CK8理想着色，胆管上皮细胞强阳性，肝细胞呈不同层次阳性。50精选版课件ppt肝脏：CK8理想着色，胆管上皮细胞强阳性，3精选版课件ppt

panCK（AE1/AE3）在肝脏理想的染色，采用了热修复。肝细胞膜、胆管强而清晰的着色。背景干净。51精选版课件pptpanCK（AE1/AE3）在肝脏理想的染色，一、特异性染色的判断1.特定的定位

细胞阳性——根据靶抗原不同而呈现胞膜型、胞浆型或胞核型间质阳性——表现为细胞外着色，局限性或弥散性2.染色的不均一性阳性细胞的染色分布不均，片状或点状散在分布染色强弱不等，颜色深浅反映抗原量的多少3.排除人为造成的非特异性染色

切片的折叠、刀痕，色素沉着，组织细胞坏死。4.颗粒性显色

DAB显色在高倍镜下呈颗粒状而非均匀着色。52精选版课件ppt一、特异性染色的判断1.特定的定位5精选版课件ppt免疫组化标准化照片CK10CD44v6ER53精选版课件ppt免疫组化标准化照片CK10CD44v6ER6精选版课件ppt54精选版课件ppt7精选版课件ppt55精选版课件ppt8精选版课件ppt56精选版课件ppt9精选版课件ppt57精选版课件ppt10精选版课件ppt58精选版课件ppt11精选版课件ppt合格的免疫组化染色切片

是正确判断染色结果的基础和前提

不合格的免疫组化染色切片

容易导致误判59精选版课件ppt合格的免疫组化染色切片

是正确判断染色结果的基础和前提

不C-erbB-2优良中差60精选版课件pptC-erbB-2优良中差13精选版课件ppt4321ER61精选版课件ppt4321ER14精选版课件ppt子宫内膜PR染色，修复不足子宫内膜PR染色，修复良好

PR62精选版课件ppt子宫内膜PR染色，修复不足子宫内膜PR编号阳性片待检片阴性对照结论12345－＋－＋＋－＋＋－＋－＋－－－操作失误，抗体失效非特异性着色阳性片不含靶抗原待检片不含定位抗原待检片含定位抗原二、染色结果的判断63精选版课件ppt编号阳性片待检片阴性对照结论1－－－操作失误，抗体失效二、PCNAS-P×400S-P×4001-dayCM4-dayCM阳性强度20×10视野下，随机选取5个视野，测100个阳性细胞的平均光密度即为此片的阳性强度。三、结果分析64精选版课件pptPCNAS-P×400S-P×4001-dayCM4-P53阳性细胞百分比计数100个瘤细胞，其中阳性细胞的比例：＜5%（－）5%~30%（＋）30%~50%（＋＋）＞50%（＋＋＋）65精选版课件pptP53阳性细胞百分比18精选版课件pptPCNABarnes法A：瘤细胞显色有无及深浅0（不着色）1（浅黄色）2（棕黄色）3（棕褐色）B：显色细胞的比例1（1%~10%）2（11%~50%）3（51%~80%）4（＞80%）评分=A×B0分：阴性1~4分：弱阳性＞4分：强阳性66精选版课件pptPCNABarnes法19精选版课件ppt胶原染色阳性面积百分比40×10视野，选取5个视野，计算阳性区域面积占整个参考面积的百分率。67精选版课件ppt胶原染色阳性面积百分比20精选版课件pptCD34Weidner法（MVD计数）孤立的棕黄色细胞族代表一条微血管。低倍镜下找到组织内密度最高区域。40×10视野下计数微血管数目。68精选版课件pptCD34Weidner法（MVD计数）21精选版课件pptK-rasVEGF69精选版课件pptK-rasVEGF22精选版课件ppt附：定量分析——图象处理系统

1、图象处理：利用仪器按照不同的目的进行图象的修正、变换、特征提取和测量。1）“狭义”指消除图象的模糊不清部分，校正畸变。2）“广义”包括对图象的结构分析，提取特征进行测量。

70精选版课件ppt附：定量分析——图象处理系统23精选版课件ppt2、图象处理系统组成图象输入（显微镜、扫描仪）图象处理运算（病理图文分析软件）图象、数据输出

71精选版课件ppt2、图象处理系统组成24精选版课件ppt

3、图象处理系统功能

几何形态学定量分析细胞核、浆的大小、面积、核浆比；细胞分布密度、个数；血管、腺体的面积、密度；间质的面积

免疫组织化学分析按着色灰度分类，计算阳性、阴性细胞的面积含量DNA倍体分析计算正常细胞及肿瘤细胞DNA含量，给出倍体参数、DNA参数分布直方图

AgNOR分析颗粒分析：数目、大小、面积、比例

72精选版课件ppt25精选版课件ppt73精选版课件ppt26精选版课件ppt四、免疫组化异常着色及对策1.非特异性着色及其对策非特异性着色原因对策操作过程冲洗不充分每步冲洗3×5min内源性过氧化物酶3％H2O2封闭内源性生物素使用生物素阻断试剂盒阻断电荷吸附非免疫动物血清封闭抗体不纯采用单克隆抗体切片制片不当改善取材和制片加试剂后切片干燥防止切片干燥74精选版课件ppt四、免疫组化异常着色及对策1.非特异性着色及其对策非特异性着内源性生物素—肾小管75精选版课件ppt内源性生物素—肾小管28精选版课件ppt内源性生物素—淋巴结转移性甲状腺腺癌76精选版课件ppt内源性生物素—淋巴结转移性甲状腺腺癌29精选版课件ppt蜕膜组织部分胞核PR阳性，血管内红细胞过氧化物酶显色77精选版课件ppt蜕膜组织部分胞核PR阳性，血管内红细胞过氧化物酶显色30精嗜酸性粒细胞中细胞色素显色78精选版课件ppt嗜酸性粒细胞中细胞色素显色31精选版课件ppt吞噬细胞内

含铁血黄素

79精选版课件ppt吞噬细胞内含铁血黄素32精选版课件ppt坏死组织着色：AE1/AE380精选版课件ppt坏死组织着色：AE1/AE333精选版课件ppt坏死组织着色81精选版课件ppt坏死组织着色34精选版课件ppt交叉反应：乳腺ki-67组织细胞胞浆着色82精选版课件ppt交叉反应：乳腺ki-67组织细胞胞浆着色35精选版课件ppt黑色素瘤，细胞内含黑色素，呈紫黑色，HE染色83精选版课件ppt黑色素瘤，细胞内含黑色素，呈紫黑色，HE染色36精选版课件灶状着色：机械原因着色84精选版课件ppt灶状着色：机械原因着色37精选版课件pptCyclinD1套细胞淋巴瘤全片着色85精选版课件pptCyclinD1套细胞淋巴瘤全片着色38精选版课件ppt