柱色谱分离实验

柱色谱ColumnChromatography1精选课件了解：

1.柱色谱法分离有机物的原理。

2．固定相和流动相的选择原则。掌握：

1.色谱柱的填充方法。

2．柱色谱分离的基本操作。一、实验目的2精选课件色谱法简介

色谱法亦称色层法，层析法等，是分离，纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一，还可定量分析。

3精选课件色谱法分类固定相、流动相的物理状态操作形式分离原理液—固色谱法气—固色谱法气—液色谱法液—液色谱法柱色谱法（columnchromatography）薄层色谱法（TLC）纸色谱法（paperchromatography）气相色谱（GC）高效液相色谱（HPLC）吸附色谱法分配色谱法离子交换色谱法排阻色谱操作形式柱色谱法（columnchromatography）二、实验原理4精选课件5精选课件柱色谱分离示意图混合物吸附剂(固定相)洗脱剂(流动相)二、实验原理6精选课件7精选课件二、实验原理吸附剂的性质：均匀、表面积大、不反应、吸附能力不同化合物的结构：化合物的吸附性和它们的极性成正比洗脱剂的极性：溶解度适中、不反应、易获取回收影响分离效果主要因素8精选课件9精选课件10精选课件11精选课件12精选课件13精选课件14精选课件15精选课件16精选课件17精选课件18精选课件19精选课件20精选课件和和在氧化铝柱子上若分离下列各组混合物，哪一个组分先被洗脱下来？21精选课件三、实验内容装柱加样洗脱收集鉴定干法：10g硅胶

+乙醇先用乙醇后用水操作组分颜色组分颜色1mL样品加样操作0.5mL×2乙醇洗涤

柱色谱操作：实验步骤:22精选课件

吸附剂装填紧密，排除气泡。最终应使吸附剂的上端平整，无凹凸面，无断层。

干法装柱湿法装柱装柱三、实验内容23精选课件装柱时应该注意均匀，不能有气泡，裂缝，否则样品可能顺缝隙流动而不吸附，影响样品的分离，应用质软的物体如吸耳球等轻轻敲击柱身，促使吸附剂装填紧密，排除气泡。最终应使吸附剂的上端平整，无凹凸面．24精选课件

样品为液体，可直接加样；样品为固体，可选择合适溶剂溶解为液体再加样。加样时，要沿管壁慢慢加入至柱顶部，勿使样品搅动吸附剂表面。

加样三、实验内容25精选课件洗脱

在柱顶不断加入洗脱剂，使洗脱剂永远保持有适当的量，不要让洗脱剂表面流干，使流动相流速适当。三、实验内容26精选课件洗脱时应注意：（1）向柱内加入95%乙醇溶液洗脱（可以通过注射器沿管壁或安装滴液漏斗）在恒压或加压条件下进行洗脱。控制流出速度1滴/秒。逐渐出现色层带分离。（2）第一色层带到达色谱柱底部时，立即用锥形瓶收集第一色层的溶液，直到其完全被洗出。【注意】洗脱时切勿使溶剂流干！（3）然后，改用水溶液作为洗脱剂，当第二色层带到达色谱柱底部时，立即收集第二色层的的溶液，直到其完全被洗出。（4）用量筒分别量取所分离出来的两种溶液的体积后，倒入指定的回收瓶中。（5）分离结束后，应先让溶剂尽量流干，然后倒置，用吸耳球从活塞向管内挤压空气，将吸附剂从柱顶挤压出。使用过的吸附剂倒入垃圾桶里。27精选课件

试样有色，在层析柱上可直接观察。洗脱后分别收集各个组分。收集

试样无色，收集洗脱液时，多采用等份收集，每份洗脱剂的体积随所用吸附剂的量及试样的分离情况而定。收集的每份洗脱剂的体积越小，分离效果越好。三、实验内容28精选课件三、实验内容鉴定

试样有色依据颜色直接鉴定

试样无色可结合薄层色谱结果29精选课件

玻砂防堵塞装柱需紧密加压不可大溶剂勿流干四、注意事项30精选课件色谱法在有机化学中的应用:分离混合物精制提纯化合物利用比移值(Rf)鉴定化合物跟踪反应进程小结31精选课件色谱法的特点:分离效率高复杂混合物,同系物,异构体等。灵敏度高可以检测出μg•g-1(10-6)级甚至ng•g-1(10-9)

级的物质量。分析速度快

几分钟或几十分钟内可以完成一个试样分析。

小结32精选课件柱色谱法分离甲基橙和甲基蓝33精选课件实验原理甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂,它们的结构式如下所示:甲基橙亚甲基蓝由于甲基橙和亚甲基蓝的结构不同,极性不同,吸附剂对它们的吸附能力不同,洗脱剂对它们的解析速度也不同,极性小、吸附能力弱、解析速度快的亚甲基蓝先被洗脱下来，而极性大、吸附能力强、解析速度慢的甲基橙后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。本实验以硅胶为吸附剂，95%乙醇作为洗脱剂，先洗出亚甲基蓝，再用蒸馏水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。34精选课件三、实验内容装柱加样洗脱收集鉴定干法：10g硅胶

+乙醇先用乙醇后用水操作组分颜色组分颜色1mL样品加样操作0.5mL×2乙醇洗涤

柱色谱操作：实验步骤:35精选课件仪器和试剂1.仪器 锥形瓶、玻璃漏斗、色谱柱2.试剂柱层析硅胶、脱脂棉、乙醇（95%）甲基橙、亚甲基蓝。H2O∶

95

%乙醇

=

1∶

1

(A

液)

0.

2mol·

L

-1HCl∶

95

%乙醇

=

1∶

1

(B

液)36精选课件装置图装柱洗脱37精选课件实验步骤

装柱：1、装色谱柱：（1）取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花将色谱柱垂直固定在铁架台上。

(2)关闭活塞，向柱中倒入蒸馏水（也是洗脱剂，至柱体积的

1/2）（3）填吸附剂：称取10g

硅胶于小烧杯中

,加入

15mL

蒸馏水

,用玻璃棒调好通过漏斗慢慢装入玻璃柱,使其逐渐沉入底部。用洗耳球敲打柱身使硅胶装填紧密，打开活塞，用小锥型瓶承接,控制滴速为1滴／秒,装完后在上面加一层脱脂棉（，操作时要注意吸附剂始终不能露出液面）。38精选课件

实验步骤（续）

加样：当液面刚好流至脱脂棉平面相切时，立刻关闭活塞，

加入

5mL左右的A

液

,当硅胶面又将要露出时

,关紧活塞

,用量筒准确加入

0.

50mL

以

A

液做溶剂的混合液(含甲基橙和亚甲基蓝各为

0.

400

g·

L

-1)

。

洗脱：待此混合液将要渗入柱内时

,立即用

A

液洗脱

,此时可以观察到有鲜明的黄、蓝两条色带形成。黄色的甲基橙色带随洗脱剂的加入不断下移

,而其顶部蓝色带不移动

,当黄色带到达柱底部时

,更换接