DNA电泳过程常见问题分析_第1页
DNA电泳过程常见问题分析_第2页
DNA电泳过程常见问题分析_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

DNA电泳过程常见问题分析DNA电泳的MARKER怎么是扭曲的？1、 配制胶时的缓冲液需要和电泳缓冲液不是同时配制的.最好是同时配制.电泳时缓冲液高过液面1—2mm即可。2、 电泳时电压过高,可以在电泳前15分钟用较低电压(3V/cm),等条带出孔后比较漂亮了•然后再调电压。3、 上样时尽量慢慢加样，等样品自然沉降后再加电压。跑出的DNA带模糊？1、 DNA降解：避免核酸酶污染。2、 电泳缓冲液陈旧:电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上弱，从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液。3、 所用电泳条件不合适:电泳时电压不应超过20V/cm跑出的DNA带模糊？1、 DNA降解：避免核酸酶污染。2、 电泳缓冲液陈旧:电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上弱，从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液。3、 所用电泳条件不合适:电泳时电压不应超过20V/cm,温度泳，温度应V15C；核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。DNA上样量过多：减少凝胶中DNA上样量。DNA样含盐过高：电泳前通过乙醇沉淀去除过多有蛋白污染：电泳前酚抽提去除蛋白。DNA变性：电泳前勿加热，用20mMNaCl缓冲液稀释DNA。减A链电?D4、5、6、7、2、3、4、有不规则DNA带迁移？1、 对于久/HindIII片段cos位点冷却5分钟。2、 电泳条件不合适：电泳电压不超过23、 DNA变性：以20m跑出的DNA条1、DNA的上敏度稍高，上样量可适J2、5°C加热DNA5分钟，然后在冰上温度V30C；经常更换电泳缓冲液。ffer稀释DNA,电泳前勿加热。DN:增加DNA的上样量；聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵:避免DNA的核酸酶污染。凝胶：缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度。的DNA，所用光源不合适??应用短波长(254nm)的紫外光源。NA带缺失不完整是怎么回事？是小DNA带走出凝胶，可以缩短电泳时间或降低电压或增强凝胶浓度。分子大小相近的DNA带不易分辨??增加电泳时间，核准正确的凝胶浓度。3、DNA变性：电泳前请勿高温加热DNA链，以20mMNaClBuffer稀释DNA。DNA链巨大，常规凝胶电泳不合适??在脉冲凝胶电泳上分析。凝胶回收DNA实验的关键在哪里？最关键的是切胶之后，溶胶的那一步•切胶的时候要尽量把多余的琼脂糖凝胶切干净，按照实验步骤，第一步应该是将胶充分的溶化.这以后步一定要做充分，保证凝胶已经完全溶解了•加乙醇这步也很关键，当凝胶溶解后最好多过几次柱子。还有就是洗脱的那一步。洗脱的时候最好用加热到60度的洗脱液洗脱，如果实在效果不好可以分两次洗脱。

切胶的时候如何能切的准呢？条带的位置肉眼很难判断出来，如何判断条带的位置呢？可以将产物与Marker一起电泳，染色后，在紫外灯下观察结果，跟Marker进行相比，就知道要的是哪条带。注意，紫外灯下切胶速度要快，否则DNA会降解，另外，紫外线对身体伤害很大，特别是眼睛，请注意采取保护措施（比如在专门的箱子里切，带眼镜等）。

人人文库> 全部分类> 行业资料 > 各类标准

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论