类风湿因子多重微珠免疫法检测试剂盒说明书

简介：

类风湿因子多重微珠免疫法检测试剂盒说明书（RFIgM抗体产品编号：A91001M宙斯（Zeus）AtheNAMulti-LyteIgM抗体。本试剂盒用于类风湿性关节炎的诊断。本试剂盒用于体外诊断。背景：类风湿性关节炎（RA）是一种慢性病，往往会发展为关节炎。RA是一种高度变异疾病，从轻微持久的病症到破坏性的多发性关节炎伴随系统性脉管炎11-2的发生率（2男性的两倍1。早期病症的临床特征包括淋巴结病、厌食、虚弱、疲劳和晨僵或疼痛3RAR、抗核AN（3RFIgMRA较为重要而且可以帮助疾病预后诊断（6。RF（或其他属种的Fc部分发生反应的抗体14RF是一种多克隆抗体，与IgG的多数部位发生反应。分为三个主IgIgGIg，而IgERF也有提及5IgMIgG是最常见RA75IgMR（4RF与一些细菌性或亚急性细菌性心内膜炎和癌症（16515的RF水平有上升（4。AtheNAMulti-LyteTM抗核抗体类风湿因子检测系统检测原理：AtheNAMulti-LyteIgM抗体。整个检测步骤包括两步温育过程。1、待测血清（经过稀释）同荧光编码的聚苯乙烯微粒（polystyrenemicrospheres);不同颜色的微粒上结合有不同的抗原。如果病人血清中含有类风湿因子，就会和微粒特异性地结合。2(藻红蛋白)（Phycoerythrin，PE）标记的羊抗人链RFIgMAtheNAMulti-Lyte(PE)。利用孔内校正技术（Intra-WellCalibration，内对照颗粒上的荧光信号可以将读到的荧光强度转换成浓度（单位）结果。试剂盒组分：（所有活性成分都含有浓度为0.1%w/v）15.6IgG在病人标本中检测出非特异性抗体的系统和四套校正系统。2、荧光素(藻红蛋白)（Phycoerythrin，PE）标记的羊抗人IgM（ 链。可以接使用，15ml琥珀色瓶子。3、人阳性血清对照：0.2ml1管。4、人阴性血清对照：0.2ml1管。5、样本稀释液：50ml一瓶含磷酸缓冲盐，可以直接使用。注：样本稀释液加入血清后会变色。非活性成分：1、96孔聚苯乙烯分析板一块2、96孔稀释盘两块3、数据标签：一张标签贴于试剂盒盖内，另一张在试剂盒内。4、使用说明书5、校正CD。包括所有批间特异性的试剂盒校正值，用于标本分析和质量控制。预先警告：安全警告：1、本试剂盒用于体外诊断。应遵循实验室操作的常规规定。如果接触到眼睛，/备。不要呼吸到蒸汽。处理废弃物时遵守相关法规。2、本试剂盒内微珠上没有活性的有机物。但应将之视为有潜在生物毒性的物质并小心处理。3潜在生物毒性的物质。产品的原材料经检测对HIV-1抗原和HBsAgHCVHIV2疾病控制中心和国家健康控制研究院手册“微生物和生物医学实验室的生物OSH’有潜在传染性的人血清或血液制品（9。4、样品稀释液、对照、微珠悬浮液和结合剂含有0.1%w/v的叠氮钠，而叠氮钠据报告在实验室管道内可能会形成叠氮铅或叠氮铜造成爆炸。为了避免发生此类情况，当处理含叠氮钠的溶液时用大量的水冲洗。操作时注意事项：1、本试剂盒用于体外诊断。2、稀释或掺杂其他试剂会导致错误的结果。3、请勿使用其他厂家的试剂。4、微珠悬浮液和结合剂是光敏感的试剂，都装于避光容器内。在试验过程中常规光条件下并不会影响试验结果，但应避免将之暴露于不必要的强光下。5、微珠悬浮液在使用前应彻底混匀以获得最佳读取结果时间。最有效的方法是将微珠悬浮液振荡30秒然后超声仪处理30秒。6、切勿用嘴吸移液管。避免试剂和病人样品与皮肤或粘膜接触。7、避免试剂被微生物污染，这将产生错误的结果。8、试剂和样本的交叉污染会导致错误的结果。9、严格按照说明书中指定的温育时间和温度操作是获得正确结果的重要保证。实验前一定要使所有试剂的温度回复至室温（20~25℃。立即放回到冰箱。10、 避免溶液飞溅或产生气溶胶。11、 废弃溶液用10%的家用漂白剂次氯酸钠）处理。避免试剂与漂剂的烟雾接触。12、 不要让任何反应试剂接触到含有漂白剂的溶液。微量的漂白剂（次氯钠）会影响试剂盒内很多试剂的生物活性。储存条件：1、未开封的试剂盒：保存在2-8 C。2、多重微珠悬浮液：保存在2-8 C。使用时吸取需要量后将之放回2-8℃。3、PE标记的羊抗人抗体：保存在2-8 C。4、人对照品：保存在2-8 C。5、样品稀释液：保存在2-8 C。标本采集：建议根据NCCLS 的M29号文件来采集标（接触有传染性疾病的实验室工作者的防护没有已知的试验方法可以完全证明人的血液标本不会导致感染因此，所有的血液都应视为有潜在的传染性。本试验选用的标本为无菌静脉穿刺取得的血液，经新鲜沉降和冷藏获得的血清7，8清。882-8C48小时。如时间更久，应把标本放在-20C反复冻融标本以免造成抗体活力降低并影响最终结果。操作步骤：自备材料：110200ul的移液器2、多通道移液器，能精确吸取50-200ul3、适用于多通道移液器的贮液槽4、专用于吸血清的移液器5、一次性吸头6、实验室用的计时器以便控制温育时间试验过程建立：把各成分从储存条件中取出使之回复至室温20-2℃A1B13030秒。800RPM301/2体积的反应液体反复吸打至少5次。血清温育：1、按1：200倍数稀释阴性对照、阳性对照和每个病人的血清样品（例如：将10 l血清+90 l样本稀释液在一个稀释盘中混匀[此为1：10稀释]。然后取10 l经1：10稀释的样品加190 l样本稀释液在另一个稀释盘中此为1：200稀释）加入样本稀释液和血清标本结合后发生颜色变化。正确的操作要求样本稀释液混合均匀，可按上述注2操作。如果您按2步法稀释则必须每步都混合均匀。2、在确定检测所需的总数量后，使用多通道移液器或重复使用移液器在每个中加入50 l微珠悬浮液。3、加入10 l经过1：200稀释的标本和对照。按上述注2混合均匀。4、室温（20-25℃）温育30 10分钟。结合剂温育：1、每孔中加入150 l结合剂，按照样品加入的顺序以相同的速率和顺序依加入微孔板中。按上述注2混合均匀。2、室温（20-25℃）温育30 10分钟。标本分析：注：按照使用说明书操作本设备，读取结果前请先阅读设备的使用说明书。1AtheNAMulti-LyteRF模块分析试验结果，并按说明书操作。26015简明操作步骤1234567操作1：20010室温温育30l5010分钟。l150l室温温育30摇匀（可选。1060荧光值与单位值的转换：A：计算1AtheNAMulti-Lyte类风湿因子检测系统设备应用的是孔内校正技术（Intra-WellCalibrationCD中。2、cutoff值cutoff值，cutoffCD中。3、计算通过孔内校正技术，AtheNAMulti-Lyte系统自动计算结果。孔内校正技术对内标做回归分析，并通过附加标准和血清标本的特征值调整计算出来的单位值。B、结果解释：1、RF结果判断：本试剂盒的试验结果分析可按下述标准判断：单位值阴性标本阳性标本

<6IU/ml6IU/ml>25IU/ml质量控制：1、每次试验都必须包括阴性对照（A1孔）和阳性对照（B1孔。2、本系统通过阳性和阴性对照来控制试验的有效性。孔内校正技术对以下标准做自动分析。阴性对照和阳性对照对非特异性和对照抗原的微珠结果应为阴性。阴性对照对多重微珠悬浮液中每个指标都应为阴性。 RFCD中。任何一个标准不符合，整个试验就应判为无效而需重复。3、标本检测的有效性取决于校正微珠及其与病人血清的反应情况，通过孔内校正技术可以对各参数自动调整。任一标准不符合即可视为试验无效需重复。如果发生此类情况，数据报告会发出提示。4、根据地方或联邦法规等要求还可以加入其他对照。外部控制应能够代表普通AtheNA非人血清标本则可能导致错误结果。5、本质量控制参照NCCLS的C24号文件：定性测试的统计学质量控制。限制：1、本试剂盒不能作为唯一的诊断依据，试验结果应结合临床评价和其他诊断方法结果进行病情判断。2、避免使用溶血、脂血等血清标本以免影响结果判断，另外标本中IgG浓度异常的也会有影响，因此要避免使用此类标本。3、阴性结果并不能排除类风湿性关节炎的可能，大约25%的类风湿关节炎病人的RF检测结果为阴性。预期值：148例普通献血标本组中，128/148（86.5%）为阴性，18/148（12.2%）为阳性，2/148（1.4%）为强阳性。在已诊断为类风湿性关节炎的临床病人标本组中，1/150（0.7%）为阴性，149/150（99.3%）为阳性。其中，12/149（8%）为阳性而137/149（92%）为强阳性。WHOWHO64/225IU/ml24.25IU/ml。技术特征值：比较试验RFIgMELISA450150RF是已诊断为类风湿性关节炎的病人标本。试验结果如下。ELSIA结果AtheNA结 果ELSIA结果AtheNA结 果阳性阴性总计阳性30811319阴性0129129总计308140448*95%置信区间相对灵敏度：100%98.21-99.99%相对特异性：92.1%86.38-96.01%相对符合率：97.5%95.65-98.77%*450在外。本试剂盒临床特异性的评价：150RF抗体。其中，128/148RFIgM128/14886.5%95%0.799-0.916。本试剂盒临床灵敏度的评价：临床灵敏度用150149/150为RFIgM抗体阳性。灵敏度为149/150或99.3%。95%置信区间为0.963-0.999。重复性：intra-assayinter-assay6248IU/ml值、标准差和CV62。表2：精密度试验总结标本编号特性第1天结果第2天结果第3天结果稀释1稀释2稀释1稀释2稀释1稀释21阴性1121111阴性1112111阴性1122111阴性1111112阴性1141112阴性1112112阴性1122112阴性1112113强阳性2261971931852092193强阳性2002042302142262113强阳性2242261962022172133强阳性2072171922182202034强阳性1631661721741621584强阳性1631451981601441584强阳性1521621911741651514强阳性1461601671751541575阳性98991195阳性98891085阳性10119910105阳性9810101096阳性881091096阳性10987996阳性8810711106阳性1099898第1天第2天第3天Intra-assay值Intra-assay值Intra-assay值 Inter-assay值平均值1平均值2平均值1平均值1标本1SD0SD0.534522SD0SD0.38069CV%0.0CV%35.6CV%0.0CV%32.6平均值1平均值2平均值1平均值1标本2SD0SD0.991031SD0SD0.69025CV%0.0CV%52.9CV%0.0CV%53.4平均值213平均值204平均值215平均值210标本3SD12.04678SD15.42493SD7.225945SD12.49630CV%5.7CV%7.6CV%3.4CV%5.9平均值157平均值176平均值156平均值163标本4SD8.253787SD12.36282SD6.53425SD13.07164CV%5.3CV%7.0CV%4.2CV%8.0平均值9平均值9平均值10平均值9标本5SD1.069045SD0.64087SD0.916125SD0.89685CV%11.9CV%7.0CV%9.5CV%9.7平均值9平均值9平均值9平均值9标本6SD0.886405SD1.195229SD0.916125SD1.034472CV%10.1CV%14.1CV%9.8CV%11.7交叉试验和影响物质：38182AtheNAMulti-LyteRFIgM是有活性的，2ELISARFIgM也是有活性的。20个标本中含潜在影响物质。有溶血素含量异常（n=，胆红素含量异常n=IgG浓度偏高n=）或脂质含量偏高n=2044ELISA方法检测也是阳性。参考文献：1、Turgeon, M.L.: Rheumatoid Arthritis. In: Immunology and Serology LaboratoryMedicine,2ndED.Shanahan,J.,ed.MosbyYearBookInc.,St.Louis,MO,Ch.28,pp387-398.19962、Wilske, K., Yocum,D.: Rheumatoid Arthritis. The status and Future CombinationTherapy.J.ofRheumatol.23(suppl44):1.19963、Jackson,G.:ImmunodeficiencesandAutoimmuneDisorders,In:ClinicalLaboratoryMedicine,Tilton,R.et.al.Eds.MosbyYearBookInc.,St.Louis,MO,Ch.36,pp485-504.19924、Richardson,C.,Emergy,P.LaboratoryMarkersofDiseaseActivity.J.ofRheumatol.Vol23(suppl44),23-30.19965Zuraw,B.,et.al.ImmunoglobulinE-RheumatoidFactorintheSerumofPatien