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文档简介

实验六胎盘球蛋白含量测定氮含量蛋白质含量＝16％蛋白质含量＝氮含量×6.25蛋白质主要包括Ｃ、Ｈ、Ｏ、Ｎ、Ｓ氮元素是蛋白质区别于糖和脂的特征性元素各种蛋白质的含氮量很接近，平均为16%非蛋白氮

nonproteinnitrogen(NPN)

非蛋白态的含氮化合物（氨基酸、尿素、尿酸、肌酐、胍类、胺类及吲哚）＝总氮含量－非蛋白氮含量（）×蛋白质含量6.25原理

含氮化合物经H2SO4消化后，化合物中碳氧化成CO2而除去，氮则全部与H2SO4作用，生成(NH4)2SO4，加钠氏试剂后，产生黄色化合物，可作定量测定。

由胎盘球蛋白的总氮量与非蛋白氮（NPN）含量的差，可算得蛋白质氮量，通过蛋白质含氮量，可换算蛋白质含量。

样品1、胎盘球蛋白稀释液：

1毫升胎盘球蛋白注射液用生理盐水稀释至200毫升。

胎盘血来源的丙种球蛋白含蛋白质５％2、非蛋白氮（NPN）滤液制备

钨酸法：取胎盘球蛋白0.1毫升于事先加好3.5毫升蒸馏水之加入0.2毫升2/3NH2SO4，0.2毫升10%钨酸钠，稍加放置，用干滤纸过滤即得。钨酸钠与硫酸作用生成钨酸，后者使蛋白质沉淀，过滤可得无蛋白滤液Na2WO4＋H2SO4H2WO4＋Na2SO4

操作总氮管NPN管标准管空NPN滤液（ml）1.0胎盘球蛋白稀释液（ml）

0.25亚硒酸消化液（ml）

0.1

0.1

消化至溶液有黑变澄清标准(NH4)2SO4

1.0蒸馏水

3.5

3.5

2.5

2.510%酒石酸钾钠（ml）

1.0

1.0

1.0

1.0钠氏应用液（ml）

2.0

2.0

2.0

2.0各管混匀后，于460nm处比色消化

氮量测定含氮化合物＋H2SO4(NH4)2SO4

消化的目的：使有机氮（氨基酸上的－NH2)转化为NH4+。

亚硒酸消化液：H2SeO3

和H2SO4

作用：提高沸点；将有机氮转化为NH4+显色剂钠氏试剂：碘化汞、碘化钾、NaOH

碘化汞＋碘化钾碘化钾汞复盐

(NH4)2SO4＋2NaOH2NH4OH＋Na2SO4

NH4OH＋2(KI)2HgI2＋3NaOHHg4KI＋3NaI＋3H2O＋ONH2IHg

碘化双汞铵黄棕色沉淀

总氮管NPN管标准管空白管样品稀释液NPN滤液标准硫酸氨蒸馏水计算NPN含量mg%＝总N含量mg%＝样品OD标准OD×0.01×40×100样品OD标准OD×0.01×800×100蛋白N%＝总N%－NPN%蛋白质含量＝蛋白N×6.25注：蛋白质含量应不低于5%思考题实验中使用浓硫酸、钨酸钠、亚硒酸、酒石酸钾钠的目的分别是什么？答案浓硫酸：消化蛋白，吸收释放出来的NH3，使之成为NH4+。钨酸钠：沉淀蛋白质，除去蛋

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