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文档简介

杂交瘤细胞的纯化原理与方法杂交瘤细胞的筛选未融合的免疫细胞在培养6~10天后会自行死亡；异型多核细胞分裂不正常，培养过程中也会死亡；未融合的骨髓瘤细胞因其生长快不利于杂交瘤细胞生长，所以要将杂交瘤细胞筛选出。脾细胞(B淋巴细胞)骨髓瘤细胞杂交瘤细胞脾细胞脾细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞脾细胞筛选出不能长期存活不能长期存活杂交瘤细胞的筛选HAT培养基进行筛选原理细胞DNA合成有两条途径：从头合成途径补救合成途径

从头合成途径即利用糖和氨基酸这些可从培养液中摄取的简单的含碳、含氮复合物来合成核苷酸，进而合成DNA。这一过程需四氢叶酸参与供甲基及甲酰基，因此该途径可被叶酸拮抗物氨基喋呤（A）阻断。补救合成途径细胞可通过次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK），将核苷酸前体合成核苷酸以供DNA合成的原料。DNA的生物合成途径与HAT选择培养基ATHIMPDNA核苷酸

糖和氨基酸TMPHGPRTTK核苷酸前体H—hypoxanthine（次黄嘌呤）

A—aminopterin（氨基喋呤）

T—thymidine（胸腺嘧啶核苷）实验所用骨髓瘤细胞是HGPRT缺陷（HGPRT-）和TK缺陷（TK-）细胞，不能利用培养基中的H和T，且未融合骨髓瘤细胞合成DNA的主要途径被培养基中的A阻断，所以未融合骨髓瘤细胞不能在HAT培养基中生长。未融合的脾细胞因不能在体外长期存活而死亡。脾细胞和脾细胞自身融合的细胞能在HAT培养基上正常生活,但不能增殖,所以经过数代后,HAT培养基上没有脾细胞和脾细胞自身融合的细胞。只有杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了HGPRT和TK，因此能在HAT培养基中存活和增殖。骨髓瘤细胞：HGPRTˉ或TKˉ

死亡脾细胞：HGPRT+，TK+

存活但短命杂交瘤细胞：HGPRT+，TK+

存活筛选方法

骨髓瘤细胞死亡

融合后的混合物HAT培养基未融合的

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