标准解读

《GB/T 18089-2008 蓝舌病病毒分离、鉴定及血清中和抗体检测技术》与前一版标准《GB/T 18089-2000 蓝舌病微量血清中和试验及病毒分离和鉴定方法》相比，主要在以下几个方面进行了更新和完善：

  1. 范围扩展：2008版标准不仅涵盖了蓝舌病病毒的分离和鉴定方法，还详细规定了血清中和抗体的检测技术，相比之下，2000版标准主要聚焦于微量血清中和试验及病毒的基本分离鉴定，内容更为全面和深入。

  2. 技术方法更新：新标准可能引入了更先进的病毒分离技术和鉴定手段，包括但不限于分子生物学方法（如PCR技术），以提高检测的灵敏度和特异性。同时，对于血清中和抗体检测，也可能采用了更优化的实验设计和分析方法，确保结果的准确性和重复性。

  3. 操作规程细化：2008版标准可能对实验操作步骤进行了更加详细的规范，包括样本处理、培养条件、试剂配制、实验控制等，旨在减少操作变异，提升检测结果的一致性和可靠性。

  4. 质量控制加强：新标准可能增设或强化了质量控制措施，如内控标准、阳性和阴性对照的使用规定，以及实验室资质和人员培训的要求，以确保检测过程的质量管理。

  5. 术语和定义更新：随着科学进展，一些专业术语可能有了新的定义或解释，2008版标准对此进行了相应的调整，以便更准确地反映当前的科研认识和技术状态。

  6. 参考标准与国际接轨：新版标准可能参考了更多的国际标准和先进国家的实践，使得我国的蓝舌病检测技术与国际保持同步，增强检测结果的国际认可度。


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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2008-12-31 颁布
  • 2009-05-01 实施
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文档简介

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中华人民共和国国家标准

犌犅／犜１８０８９—２００８

代替ＧＢ／Ｔ１８０８９—２０００

蓝舌病病毒分离、鉴定及血清中和

抗体检测技术

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２００８１２３１发布２００９０５０１实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局

发布

中国国家标准化管理委员会

书

犌犅／犜１８０８９—２００８

前言

本标准代替ＧＢ／Ｔ１８０８９—２０００《蓝舌病微量血清中和试验及病毒分离和鉴定方法》。

本标准与ＧＢ／Ｔ１８０８９—２０００相比主要变化如下：

———对标准名称进行了修改；

———删除了蓝舌病病毒鉴定中的病毒中和试验部分；

———增加了病毒鉴定中ＲＴＰＣＲ方法的鉴定。

本标准的附录Ａ为规范性附录。

本标准由中华人民共和国农业部提出。

本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：中华人民共和国云南出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检

疫局。

本标准主要起草人：周晓黎、杨建明、艾军、花群义、杨晓花、张其艳、严树发、董俊、叶玲玲、徐维加。

本标准所代替标准的历次版本发布情况为：

———ＧＢ／Ｔ１８０８９—２０００。

Ⅰ

书

犌犅／犜１８０８９—２００８

蓝舌病病毒分离、鉴定及血清中和

抗体检测技术

１范围

本标准规定了蓝舌病病毒分离、鉴定及血清中和抗体检测的技术。

本标准适用于蓝舌病病毒的分离、鉴定及动物感染蓝舌病病毒后血清中和抗体的检测。

２符号和缩略语

下列符号和缩略语适用于本标准。

ＢＨＫ２１———幼仓鼠肾细胞株；

ＢＬＰ———乳糖蛋白胨缓冲肉汤；

ＢＴ———蓝舌病；

ｂｐ———碱基对；

ＣＰＥ———致细胞病变作用；

Ｃ６／３６———蚊子细胞株；

ＤＥＰＣ———焦碳酸二乙酯；

ＳＰＦ———无特定病原体；

ＴＣＩＤ５０———半数组织培养感染量；

Ｖｅｒｏ———非洲绿猴肾细胞株。

３蓝舌病病毒分离

３．１材料

１０日龄～１１日龄ＳＰＦ鸡胚。

３．２设备与器材

鸡胚开孔器、照蛋灯或照蛋箱、乳钵或组织捣碎器、倒置显微镜。

３．３试验程序

３．３．１样品

肝素抗凝血（每５ｍＬ血液用１０ＩＵ肝素）、脏器（脾、肝、肾、淋巴结）、精液、库蠓。用于病毒分离的

样品应置冷藏容器中保存，在２４ｈ内送到实验室，并立即进行处理。

３．３．２血液样品制备

取肝素抗凝血５ｍＬ，用磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ，配方见附录Ａ）洗涤血样３次～４次，每次２０００ｒ／ｍｉｎ

离心１０ｍｉｎ，弃上清液后加入倍量ＢＬＰ（配方见附录Ａ），置冰浴中用超声波处理（４０μＡ、１ｍｉｎ）。经处

理的样品当天使用，使用前置４℃保存，剩余样品置－７０℃保存备用。

３．３．３组织样品制备

无菌采集动物脾、淋巴结、肝、肾各５ｇ，剪碎后加入ＢＬＰ１０ｍＬ（含青霉素２０００ＩＵ／ｍＬ、链霉素

２０００μｇ／ｍＬ），置乳钵中研磨，４℃冰箱中浸提４ｈ，取上清液５ｍＬ用超声波裂解处理（１００μＡ、１ｍｉｎ～

２ｍｉｎ）或冻融三次，３０００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，取上清液使用，使用前置４℃保存，剩

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