版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
影响核酸电泳的因素:1.核酸的性质2.凝胶孔径的大小3.电场强度和电场方向4.电泳环境缓冲液的组成和离子强度直接影响迁移率。核酸电泳的指示剂:核酸电泳常用的指示剂有两种:⑴溴酚蓝⑵二甲苯青,
DNA的琼脂糖凝胶电泳
引言:琼脂糖主要从海洋植物琼脂中提取来的,为一种聚合线性分子,一般含有多糖、蛋白质和盐等杂质,杂质的含量每个厂商和批号的产品不尽相同。对DNA电泳迁移率的影响也不一样,经化学修饰后熔点降低的琼脂糖叫低熔点琼脂糖,其机械强度无明显变化,主要用于DNA的限制酶原位消化、DNA片段回收以及小DNA片段(10~500bP)的分离。琼脂糖凝胶的孔径取决于琼脂糖的浓度。
【实验目的】
掌握DNA琼脂糖凝胶电泳的原理和操作方法。
【实验原理】
DNA分子带负电荷,在电场中受到电荷效应、分子筛效应向正极移动过程中,因DNA分子的大小及构象差别而呈现迁移位置上的差异,对于线形DNA分子,其电场中的迁移率与其相对分子质量的对数值成反比,电泳时加溴化乙锭,其与DNA结合形成一种荧光络合物,在254~365nm紫外光照射下可产生桔红色的荧光,可用于检测DNA(此法可观察到凝胶中2ng的DNA)。如有必要可从凝胶回收DNA片段,用于分子克隆或探针标记等操作。琼脂糖可制成不同孔径的凝胶,分离DNA的范围广,约200bp~50kb。【实验材料】1.电泳仪。2.电泳槽。3.紫外透射仪。4.试剂【实验方法】1.琼脂糖凝胶板的制备将1~2%琼脂糖凝胶加热溶化均匀,冷却到60~70℃加EB至浓度0.5μg/ml,倒入封好的凝胶槽,厚度约3~5mm,在距底板0.5~1mm的位置放置样品梳,检查梳子齿间有无气泡,可用吸管小心吸出气泡,待冷却成形后取出梳子及隔板,放入水平电泳槽中,缓冲液淹没过胶1~2mm为止。2.加样样品中加1/5体积的上样缓冲液,混匀,取10~15μl加入凝胶点样孔中,同时要设立合适的DNA相对分子质量标准物。3.电泳电压<10V/cm,电泳至溴酚蓝移出样品槽到凝胶板的2/3距离时,关闭电源。4.取出凝胶块,置紫外透射反射分析仪上观察,即可见桔红色DNA区带。【实验思考】1.影响DNA片段琼脂糖
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 七年级 散步 教案 -导学案
- 《精彩极了和糟糕透了》的教案
- 甘肃省武威市武威第八中学2023-2024学年中考适应性考试英语试题含答案
- 福建省厦门市瑞景外国语分校2023-2024学年中考英语模拟试题含答案
- 如何下载国际会议论文
- 22《牧场之国》(教案)部编版语文五年级下册
- 托班语言教案:《小熊开商店》
- 福建省福州市鼓楼区重点名校2023-2024学年毕业升学考试模拟卷英语卷含答案
- 中职教育二年级上学期电子与信息《路由基础-动态路由协议OSPF原理与配置》微教案
- 设备维修保养管理方案
- 公安防火防爆知识讲座
- 药品管理中的质量管理工具和方法
- 功能性消化不良课件
- 化学工程原理课件
- 全科医学知识讲座课件
- 单位实习生意外应急预案
- 伤医辱医应急预案脚本
- 肾病科高尿酸血症肾病诊疗规范2023版
- 莫言读书分享名著导读《蛙》
- 光刻胶环保技术研究
- 英语语言学导论智慧树知到课后章节答案2023年下云南师范大学
评论
0/150
提交评论