GB/T 31809-2015油棕猝倒病菌检疫鉴定方法

ICS6502001

B16..

中华人民共和国国家标准

GB/T31809—2015

油棕猝倒病菌检疫鉴定方法

DetectionandidentificationofPythiumsplendensBraun

2015-07-03发布2015-11-27实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

中华人民共和国

国家标准

油棕猝倒病菌检疫鉴定方法

GB/T31809—2015

*

中国标准出版社出版发行

北京市朝阳区和平里西街甲号

2(100029)

北京市西城区三里河北街号

16(100045)

网址

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:400-168-0010

年月第一版

20159

*

书号

:155066·1-49880

版权专有侵权必究

GB/T31809—2015

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由全国植物检疫标准化技术委员会提出并归口

(SAC/TC271)。

本标准起草单位中华人民共和国宁波出入境检验检疫局中华人民共和国浙江出入境检验检疫

:、

局中国检验检疫科学研究院

、。

本标准主要起草人张慧丽张建成顾建锋郑炜徐瑛陈先锋段维军陈吴健吴志毅杜洪忠

:、、、、、、、、、、

吴品珊

。

Ⅰ

GB/T31809—2015

油棕猝倒病菌检疫鉴定方法

1范围

本标准规定了油棕猝倒病菌的形态学和分子生物学检疫鉴定方法

。

本标准适用于油棕猝倒病菌寄主植物的植株插枝等植物材料及介质的检疫鉴定

、。

2仪器设备

生物显微镜具油镜镜头具透射光源的体视显微镜最大放大倍数不低于高压灭菌锅天

()、(50×)、、

平感量研钵制冰机纯水仪涡旋振荡器台式离心机分光光度计高速冷冻

(1/100g,1/10000g)、、、、、、、

离心机真空抽干仪低温冰箱冷藏冷冻冰箱超净工作台普通仪光学反应管计电

、、、、、PCR、PCR、pH、

泳仪水平电泳槽实时荧光仪微量移液器

、、PCR、(0.5μL、2μL、10μL、20μL、100μL、200μL、

反应管锥形瓶试管培养皿载玻片盖玻片

1000μL)、PCR(0.2mL、0.5mL)、、、、、。

3主要试剂和培养基

除另有规定外所有试剂均采用分析纯无菌双蒸水液氮蛋白酶氢氧化钠醋酸铵氯化钾

,。、、K、、、、

无水乙醇溴化乙锭三氯甲烷异丙醇异戊醇氨苄青霉素利福平制霉菌素苯菌灵氯化钠

、、、、、、、、、、

Taq聚合酶混合物缓冲液琼脂糖分子量标准

CTAB、DNA、dNTP、10×PCR、、DNA、Tris/EDTA/

提取缓冲液缓冲液硼酸盐缓冲液等培养基及缓

SDS(TES)、Tris/EDTA(TE)、TrisEDTA(TBE)。

冲液配制方法见附录

B。

4检疫鉴定

41症状检查

.

仔细检查根部根部症状是软化变褐腐烂茎部症状是出现灰色或棕黑色水渍状斑点参见

,,;(

附录对可疑植物和繁殖材料的介质土应取样做进一步检验

A)。。

42组织分离

.

选萎蔫及根部变褐但没有完全腐烂的植物材料用流动的自来水冲洗干净在根茎病健交界处切取

,,

的小块组织用次氯酸钠进行表面消毒无菌水冲洗次灭菌滤纸吸干表面

0.5cm×0.5cm,1%3min,3,

水分后置于选择性培养基上黑暗培养每天观察待长出菌丝后挑取菌丝尖端转移到

,,25℃~30℃,,,

基础培养基上纯化保存备用

,。

43土壤诱集

.

对禾本科植物叶片如马唐狗尾草稗草等进行高温高压灭菌处理剪成直径大小的小片

(:、、),1cm

作为诱饵取土壤样品研磨破碎放入灭菌洁净烧杯中厚度不超过缓慢加入无

。5g~20g50mL,2cm,

菌水没过土表用吸水纸轻轻去掉形成的表面膜和漂浮的有机物残渣每烧杯水面放置诱

1cm~2cm,,