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文档简介

微生物杂交育种

微生物杂交育种的一般程序：选择原始亲本诱变筛选直接亲本直接亲本之间亲和力的鉴定杂交分离到基本培养基或选择性培养基筛选重组体重组体分析鉴定放线菌的杂交育种

玻璃纸法

平板杂交法

放线菌的杂交育种

杂交技术【一】——玻璃纸法原理介绍：用于杂交实验的两个直接亲本都携带营养缺陷型标记。另外，其中一个亲本带某药物的抗性标记，而另一亲本则是对同种药物具有敏感性。eg：

A亲本带met-和strB亲本带his-和ura-，但对str敏感。所用培养基：完全培养基选择培养基（即在基本培养基中加入同一种药物的补充培养基）

首先是将两亲本孢子接种到覆盖于固体完全培养基上的玻璃纸表面将玻璃纸转移到含有某药物的补充培养基上继续培养。一定时间培养①因为B亲本对该药物有敏感性，则在异核体中带有对该药物敏感的等位基因。②B对该药物敏感，且所在的培养基中又缺乏所需his，ura营养成分。③培养基上缺乏所需要的met成分

所谓异核体：即放线菌杂交过程的两直接亲本不发生染色体交换，两亲本的染色体独立存在在同一细胞内。菌落表型是原养型。基因型分别与亲本之一相同，无重组体出现，没有发生遗传信息交换。玻璃纸平板杂交的具体方法：①制孢子悬浮液②混合液接种到完全培养基上的半透性玻璃纸表面③移取长有基质菌丝的玻璃纸到添加有某药物的补充培养基上④分离子的检出和鉴别

杂交技术【二】——平板杂交法

该方法适合于大量菌落与一个共同实验菌株配对测定致育能力优点：适于在短时间内进行大量配对菌株的杂交。

具体方法：①将多株亲本A菌株的菌落以点种法分别接种到各个完全培养基平板上，培养备用。②将一株共同配对的亲本菌株B产生的孢子作成孢子悬液，取一定量加入到另一个有限培养基琼脂平板上，培养备用。③待A孢子成熟后，采用影印法复印到B菌株平板上培养。形成部分结合子。④两亲本染色体进行一次单交换而形成杂合系。进一步培养、繁殖、杂合系形成孢子，采用影印法将杂合系孢子复印到各种选择性培养基平板上，从而从中检出重组体分离子。重组体。

有限培养基：是专供异核体菌株生长使用的培养基。通常在基本培养基

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