福建省三明市第一中学高中生物选修一专题5-实验-DNA的粗提取与鉴定

【实验】DNA的粗提取与判断一、实验原理1.DNA在NaCI溶液中的溶解度随NaCI浓度的不同样而不同样。当NaCI的浓度为0.14mol/L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可使溶解在NaCI溶液中的DNA析出。DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的其余好多物质溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取含杂质较少的DNA3.DNA遇二苯胺（开水浴）会染成蓝色；DNA还有遇甲基绿溶液被染成蓝绿色的特点。上述两种方法均可用于判断DNA的存在。二、资料器具鸡血细胞液；铁架台，铁环，镊子，三脚架，酒精灯，石棉网，载玻片，玻璃棒，滤纸，滴管，量筒（100mL1个），烧杯（100mL1个，50mL500mL各2个），试管（20mL2个），漏斗，试管夹，纱布；体积分数为95%勺酒精溶液（实验前置于冰箱内24h）,蒸馏水，质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2moI/L和0.015moI/L的氯化钠溶液，二苯胺试剂三、方法步骤步骤操作方法原理取0.1g/mL的柠檬酸钠溶液防止血100mL,与新鲜液凝固，制备鸡的鸡血混杂并搅血细胞使血细拌，尔后静置一液胞与血天或离心机离心约2?浆分别3min，除去上清液取20mL蒸馏水与约5?10mL提取细的鸡血细胞液使细胞胞核物混杂并充分搅过分吸质拌，尔后用单水而破层纱布过滤，裂取滤液于烧杯中溶解DNAJ析出DNA并滤取JDNA的再溶解J含DKA的耕殉物提取较纯净的DNAJ

2OmL2mol/L瓠化钠溶液

取2mol/L的DNA在NaCl溶液40mL高浓度与上述滤液混氯化钠合后，用玻璃溶液中棒沿一个方向溶解度搅拌1min最大沿烧杯内壁慢慢加入蒸馏水DNA的并轻轻搅拌，溶解度至白色丝状粘随氯化稠物不再增添钠溶液时停止加水，浓度的尔后用多层纱降低而布过滤，取纱降低布上的粘稠物用镊子夹取纱布上的粘稠物放入20mL浓度DNA在为2mol/L氯化高浓度钠溶液中，搅氯化钠拌至完整溶解，溶液中尔后用两层纱布溶解度过滤，取其滤液最大放入小烧杯中取95%勺、冷却的酒精50mL与DNA不滤液混杂搅溶于酒拌，待岀现丝精，岀状物时用玻璃现沉淀棒将其卷起取两支20mL的试管，各加入物质的量浓度为0.015mol/L的NaCI溶液5mL,将丝状物溶解。尔后放入此中一支试管中，用玻ShLO.Ol5maL/L提取物如L二葦胰璃棒搅拌，使丝(DNA遇状物溶解。尔后，二苯胺DNA的r向两支试管中各（开水判断tali'②

加入4mL的二苯浴）会染胺试剂。混杂均成蓝匀后，将试管置于开水中加热5min，等试管冷却后，观察而且比较两支试管中溶液颜色的变化。四、常有问题解析1.从鸡血细胞核中提取的物质是DNA吗？在鸡血细胞中加入蒸馏水，而且搅拌，利用浸透作用原理使鸡血细胞破碎，搅拌进一步促进了鸡血细胞的破碎，于是开释出此中的DNA自然也有少许的RNA还的蛋白质。所以,开释出的物质是DNARNA和蛋白质的混杂物，不只是只有DNA怎样提升血细胞因低渗而破碎的效率？血细胞的细胞膜对低渗溶液有必然的抵抗能力，这称为浸透脆性。一般而言，血细胞与蒸馏水相混杂而使血细胞处于极度的低渗环境之中，细胞因大批失水而致最后破碎并开释出胞内物（包含细胞核）。为促进细胞在低渗条件下破碎，能够辅以快速而有力的搅拌，使之受机械震荡而更易破碎。3.怎样才能把血细胞开释的DNA滤入采集的滤液中？这一步较难办理，在过滤过程中经常发生因粘稠的果胨样物质拥塞过滤纱布的网眼而

使后续的过滤难以完成，好多

DNA

没能滤入滤液中，这是造成失败的主要原由之一。解决的方法有：过滤时待过滤溶液倒入漏斗的速度应迟缓，

省得聚积于溶液中层的胶状

物一下就把纱布堵住，使过滤不能够完成；一旦出现大批胶状物使过滤不能够进行下去，切忌使劲挤压而使胶状物也滤入滤液之中，能够把胶状物重新用适合的2molNaCI溶液进行搅拌，使此中的DNA获得溶解，尔后再进行过滤。4.实验中看到的丝状物的粗细是否是DNA分子的直径呢？不是。因为DNA分子直径只有2nmo丝状物是多个DNA分子聚在一起形成的。5.盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器。鸡血细胞破碎今后开释出的DNA简单被玻璃容器吸附，，，提取到的DNA就会更少。因为细胞内DNA的含量原来就比较少再被玻璃容器吸附去一部分所以，实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，这样能够减少提取过程中DNA的损失。同理，玻璃棒有吸附DNA的作用，可经过慢慢旋转玻璃棒的方法卷起浓缩后的DNA丝状物。6.利用DNA在浓度较低的氯化钠溶液中溶解度小的原理，向含有DNA的浓度较高的