高中生物选修3易考知识点

生物选修3易考知识点专题1基因工程基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。（一）基因工程的基本工具1.“分子手术刀”——限制酶（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的（脱氧）核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。2.“分子缝合针”——DNA连接酶与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。注意：DNA连接酶是连接两个相同的黏性末端或平末端,一般用同一种限制酶切割目的基因与质粒，需出相同的黏性末端，但是同一种限制酶切割形成的末端相同,可能导致目的基因与质粒会反向连接,从而使目的基因无法表达。所以最好同时用两种能形成相同黏性末端的限制酶。3.“分子运输车”——载体（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一个至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。（2）最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的小型双链环状DNA分子。(作载体的质粒要在天然质粒的基础上进行人工改造)（3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取1.基因文库中获取基因文库即导入某种生物不同基因的受体菌，分为基因组文库和部分基因文库（CDNA文库）。2.人工合成目的基因:常用方法有反转录法（通过mRNA逆转录出基因）和化学合成法（基因较小，核苷酸序列已知）。3.PCR技术扩增目的基因（1）原理：DNA双链复制（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。基本条件：1.模板DNA（即目的基因）2.四种脱氧核苷酸3.热稳定DNA聚合酶4.引物（通过一段已知目的基因的核苷酸序列合成的DNA单链，将来DNA复制从引物开始）第二步：基因表达载体的构建(基因工程的核心)1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，同时能够表达和发挥作用。2.组成：启动子＋目的基因＋终止子＋标记基因（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。（2）终止子：位于基因的尾端，也是一段有特殊结构的DNA片段。（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素抗性基因。第三步：将目的基因导入受体细胞1.转化：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2.常用的转化方法：(1)将目的基因导入植物细胞：主要是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法。原理是农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上,所以操作时首先将目的基因插入T-DNA上，通过农杆菌的转化作用(即感染植物)，最终可以使目的基因进入植物细胞中的染色体的DNA上,使目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。(2)将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术。此方法的受体细胞多是受精卵。(3)将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是大肠杆菌，其转化方法是：先用Ca2+处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。3.重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。第四步：目的基因的检测和鉴定1.首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子杂交技术。即用放射性同位素标记的含目的基因的DNA单链作探针，与基因组DNA（染色体上DNA）杂交，观察是否显示杂交带。2.其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用分子杂交法，即用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。3.最后检测目的基因是否翻译成蛋白质(即基因是否表达)，方法是从转基因生物中提取蛋白质(当作抗原)，用相应的抗体进行抗原－抗体杂交。4.有时还需进行个体生物学水平的鉴定。如做抗虫或抗病的接种实验。（三）基因工程的应用1.乳腺生物反应器：药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子重组在一起。2.转基因克隆猪：将器官供体基因组中某种调节因子，以抑制抗原决定基因的表达，或设法除去抗原决定基因，再结合克隆技术，培育出没有免疫排斥反应的转基因克隆猪器官。3.基因治疗：把正常的外源基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用。是治疗遗传病的最有效手段。（四）蛋白质工程（即导入的目的基因是经过设计改造的，最终获得到经过设计改造成的蛋白质）蛋白质工程的目标是根据人们对蛋白质功能的特殊需求，对蛋白质的结构进行分子设计，（由于基因决定蛋白质，最终还必须通过设计改造基因）（基因工程原则上只能生产自然界已存在的蛋白质）专题2细胞工程（一）植物细胞工程1.理论基础（原理）：细胞全能性全能性表达的难易程度：受精卵＞生殖细胞＞干细胞＞体细胞；植物细胞＞动物细胞2.植物组织培养技术（1）过程：（2）地位：是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工序。3.植物体细胞杂交技术(即不同种的植物体细胞融合成杂种细胞)（1）过程：(用到纤维素酶和果胶酶)（2）诱导融合的方法：物理法包括离心、振动、电刺激等。化学法用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂。（3）意义：克服了远缘杂交不亲和的障碍。4.实际应用：1.快速繁殖优良品种2.用茎尖通过植物组织培养技术培育脱毒苗3.以植物组织培养得到的胚状体为材料得到人工种子4.通过脱分化得到的愈伤组织分裂产生大量的细胞产物（二）动物细胞工程1.动物细胞培养(其它动物细胞工程的基础)（1）流程：取健康动物体内的组织块→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。（2）细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。（3）动物细胞培养需要满足以下条件：①无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。②营养：通常需加入血清、血浆等天然成分。③温度：适宜温度：哺乳动物多是36.5℃＋0.5℃；pH：④气体环境：2.动物体细胞核移植技术和克隆动物(核移植得到的动物,原理是细胞核的全能性)（1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）。（2）选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较大，容易操作；卵(母)细胞细胞质多，营养丰富，含有细胞表达全能性所需的物质。该卵母细胞需培养到减数第二次分裂中期。3.动物细胞融合（1）动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。（2）动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同，诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似，常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电刺激等。（3）动物细胞融合的意义：克服了远缘杂交的不亲和性，4.单克隆抗体（1）一种效应B细胞(即浆细胞)只分泌一种特异性抗体。从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。（2）单克隆抗体的制备过程：至少两次筛选：1.在具有筛选作用的培养基上培养，筛选出杂交瘤细胞2.专一抗体检验阳性，筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞最后，可在体外条件培养或注射小鼠腹腔内增殖（3）杂交瘤细胞的特点：既能大量增殖，又能产生专一的抗体。（4）单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。（5）单克隆抗体的作用：①作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。②用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”，生物导弹：单克隆抗体起导向作用，将药物定向带到癌细胞位置，通过药物原位杀死癌细胞。三、胚胎工程（一）体外受精和早期胚胎发育(体外受精、早期胚胎培养、胚胎移植产生的动物叫试管动物)卵子受精的标志：在卵细胞膜和透明带的间隙观察到两个极体。受精阶段：首先顶体反应，接下去透明带反应与卵细胞膜反应（防止多精入卵的两道屏障）（二）胚胎干细胞(即早期胚胎细胞或原始性腺细胞)哺乳动物的胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或从原始性腺中分离出来。(三).胚胎移植（优势是可充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力）对供、受体母牛用激素进行同期发情处理，供体母牛用促性腺激素处理(超数排卵处理)，与获能的精子在体外受精。发育到桑椹胚或囊胚，然后向受体移植。(四).胚胎分割（能获得多个相同的胚胎）（1）材料：发育良好，形态正常的桑椹胚或囊胚。（4）操作过程：对囊胚阶段的胚胎分割时，要将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。四、生物技术的安全性和伦理问题生物武器：包括致病菌、病毒、生化毒剂，级经过基因重组的致病菌。克隆