石蜡切片技术操作

石蜡切片技术操作第一页，共十三页，2022年，8月28日实验目的掌握动植物材料石蜡切片的方法及要求。实验原理见石蜡切片理论部分实验材料小白鼠各种器官组织第二页，共十三页，2022年，8月28日实验方法石蜡切片技术（一）取材与固定石蜡切片技术（二）渗透与包埋石蜡切片技术（三）切片石蜡切片技术（四）染色石蜡切片技术（五）观察总结第三页，共十三页，2022年，8月28日1准备工作：工具、药品、计划等2动物的麻醉：氯仿麻醉3解剖取材4材料分割：保持样品的完整性与代表性，考虑切片方向，实心组织大小5*5*2mm,空心细长组织10mm长。5固定：布温氏固定液固定24h。6漂洗：70%乙醇换洗3次，每次20~60min。7保存：70%乙醇0~4℃。一、取材与固定第四页，共十三页，2022年，8月28日二、脱水、渗透与包埋1脱水：85%乙醇→95%乙醇→100%乙醇→100%乙醇，每步30min~60min2透明：1/2乙醇＋1/2二甲苯→二甲苯→二甲苯，每步30min~60min3渗透：1/2二甲苯＋½石蜡→石蜡→石蜡，每步20min~60min，温度62℃4包埋：将材料放入盛有石蜡的纸盒中，摆好位置（要考虑下一步的修快与切片方向），在水中冷却5～10min.第五页，共十三页，2022年，8月28日三、切片1修块用单面刀片在玻璃板上修快使达到以下要求：（1）一个蜡块含一个材料，蜡块呈正方形或长方形，材料位于蜡块正中央。（2）材料边缘与蜡块边缘平行，各面要平直，材料边缘与蜡块边缘的距离约3mm。2固着将修好块的蜡块用烧热的解剖刀固着在样品台上。第六页，共十三页，2022年，8月28日3切片按以下顺序进行（1）将样品台固定在切片机样品臂上，使切面竖直；（2）调切片厚度5～10um；（3）将切片刀用纱布蘸少许二甲苯擦净后装到切片机上，调刀角15～20，将刀固定好；（4）调刀距使样品与刀口尽可能靠近；

(5)切片顺时针摇动切片机速度40-60r/min；

(6)将切好的蜡带光面向下用毛笔放到台纸上。第七页，共十三页，2022年，8月28日第八页，共十三页，2022年，8月28日4贴片

(1)清洗载波片；

(2)加粘片剂，要求薄、匀；

(3)放切片，光面向下；

(4)加水于切片下面；

(5)展片将载波片放于50℃的温台上至切片完全展平；

(6)烤干吸掉多余水，继续放于温台上至水完全干燥；5贴标签临时标签，用铅笔写明组号、姓名。第九页，共十三页，2022年，8月28日四、染色1脱蜡二甲苯(2)→二甲苯(1)，每步5-10min；2复水1/2乙醇+1/2二甲苯→100%乙醇(2)→100%乙醇(1)→85%乙醇→70%乙醇→50%乙醇→30%乙醇→蒸馏水,每步2min；3初染代氏苏木精染色15min；4分化0.1%HCl脱色至变红→0.1%NaOH至变蓝；5脱水蒸馏水（3－5s）→30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇→85%乙醇,每步2min；6复染0.5%伊红（溶于95%乙醇）染色10~15min；7脱水透明95%乙醇(10-20s)→100%乙醇(1)→100%乙醇(2)→1/2乙醇+1/2二甲苯→二甲苯(1)→二甲苯(2)(≥3min),每步2~3min；第十页，共十三页，2022年，8月28日8封片将材料周围擦干净（注意在擦的过程中材料上的二甲苯必须保证不能干，可随时补加），加1～2滴中性树胶，加盖玻片（需提前洗净擦干备用）；9贴标签注明样品名称、染色方法、组号、姓名和日期；10镜检检查样品取材、切片及染色情况，熟悉样品为下次样品观察做好准备；11干燥平放于展片盘中，于37℃温箱中或自然干燥；12预习下次实验：样品的观察，需提前做好预习，并准备纸、铅笔。第十一页，共十三页，2022年，8月28日五、观察1样品观察小白鼠脑；小白鼠心肌；小白鼠肝脏；小白鼠肾脏；小白鼠肺；小白鼠小肠；小白鼠肌