不同厂家麦芽糖生产静注人免疫球蛋白质量可比性研究

不同厂家麦芽糖生产静注人免疫球蛋白质量可比性研究

【Summary】目的：考察不同厂家麦芽糖对静注人免疫球蛋白（pH4）产品质量的影响。方法：使用两个厂家麦芽糖生产静注人免疫球蛋白（pH4）分别在25±2℃和5±3℃保存0个月、1个月、2个月、3个月、6个月取样检测，进行质量可比性研究，研究的质量指标主要包括外观、可见异物检查、渗透压摩尔浓度、pH值、蛋白质含量、纯度、麦芽糖含量、激肽释放酶原激活剂（PKA）、无菌检查、热原检查等。结果：两个厂家麦芽糖生产的静注人免疫球蛋白（pH4）各项指标均合格，A、B厂家麦芽糖生产静注人免疫球蛋白（pH4）产品在25±2℃和5±3℃放置6个月后各项指标均符合要求，质量指标无显著性差异。结论：A、B厂家生产的麦芽糖均可用于静注人免疫球蛋白（pH4）生产。【Keys】麦芽糖；静注人免疫球蛋白（pH4）；质量可比性研究静注人免疫球蛋白（pH4）是由健康人血浆，经低温乙醇蛋白分离法分离纯化，去除抗补体活性并经pH4.00±0.20、24±1℃、21天病毒灭活处理制成，以麦芽糖作稳定剂，不含任何抑菌剂和抗生素，产品中96%以上为免疫球蛋白，临床主要用于治疗原发性和继发性免疫球蛋白缺陷病及自身免疫性疾病。麦芽糖为静注人免疫球蛋白（pH4）的辅料，为考察不同供应商生产的麦芽糖质量及对静注人免疫球蛋白产品质量影响，按照《已上市生物制品生物制品药学变更研究技术指导原则（试行）》相关要求，本文采用A和B两个厂家生产的麦芽糖为辅料各生产三批静注人免疫球蛋白（pH4），进行稳定性考察和质量可比性研究。1.材料和方法1.1材料静注人免疫球蛋白（pH4）由兰州兰生血液制品有限公司生产；A厂家麦芽糖生产的静注人免疫球蛋白（pH4）批号为A-1、A-2、A-3；B厂家麦芽糖生产的静注人免疫球蛋白（pH4）批号为B-1、B-2、B-3；麦芽糖为药用级，购自A和B厂家，均为已批准的药用辅料供应商，经备案且状态为A的供应商。1.2设备生化培养箱（型号：SP-02）购自黄石市恒丰医疗器械有限公司；澄明度检测仪（型号：YB-3）购自天津博宇通达仪器有限公司；微粒分析仪（型号：GWF-8JA）购自天津天河分析仪器有限公司；冰点型渗透压仪（型号：OM819.C）购自美国ADVANCED公司；电热恒温水浴箱（型号：ZSXH-625）购自上海智诚分析仪器制造有限公司；pH计（型号：SevenExcellence）购自梅特勒-托利多公司；自动定氮仪（型号：FOSS8400）购自北京钟会达科学仪器有限公司；稳压稳流电泳仪（型号：DYY-Ⅲ）购自InterlabS.R.L公司；液相色谱仪（型号：Agilent1260）购自AgilentTechnologies公司；色谱柱（型号：AminexHPX-87H/300*7.8mm）购自美国伯乐公司；离心机（型号：TDZ25-WS）购自湖南湘仪实验室仪器开发有限公司；酶联免疫测定仪（型号：MK3）购自热电上海仪器有限公司；紫外-可见分光光度计（型号：UV-1800）购自岛津制作所；电子天平（型号：XP504）赛多利斯公司；压力灭菌器（型号：LMQC-100ECB）购自山东新华医疗器械股份有限公司；无菌隔离器系统（型号：HTY-1600AG3）购自浙江泰林生物技术有限公司。1.3方法1.3.1两个厂家生产的麦芽糖质量可比性研究。按照《中国药典》（2020年版四部）麦芽糖质量标准，分别对A和B两个厂家生产的麦芽糖进行检验，进行质量可比性研究分析。1.3.2两个厂家麦芽糖生产的静注人免疫球蛋白质量可比性研究。采用两个厂家麦芽糖生产的静注人免疫球蛋白（pH4）进行质量可比性研究，按照《中国药典》（2020年版三部）要求及风险评估原则主要考察指标为外观、可见异物、不溶性微粒、热稳定性试验、渗透压摩尔浓度、pH值、蛋白质含量、纯度、麦芽糖含量、分子大小分布、PKA、抗补体活性、无菌检查、热原检查。1.3.3稳定性考察。采用两个厂家麦芽糖生产的静注人免疫球蛋白各3批分别置于25±2℃、5±3℃条件下，于0个月、1个月、2个月、3个月、6个月进行取样检测，观察纯度、麦芽糖、pH值、渗透压摩尔浓度等质量指标变化趋势。1.4质量标准及检验方法静注人免疫球蛋白（pH4）质量标准和各质量指标检验方法参照《中国药典》（2020年版三部）执行。1.5统计学分析所有数据采用SPSSAU软件分析进行。判定规则：P＜0.05表明显著性差异，P＞0.05时表明无显著性差异。2.结果2.1两个厂家麦芽糖质量可比性研究结果对A、B厂家生产的麦芽糖性状、比旋度、鉴别、酸度、氯化物、硫酸盐、糊精、可溶性淀粉与亚硫酸盐、有关物质、水分、炽灼残渣、重金属、砷盐、微生物限度、含量、内毒素含量均符合规定（表1）。A、B厂家麦芽糖的比旋度、酸度、水分、含量指标均无显著性差异（P>0.05)；微生物限度需氧菌及霉菌、酵母菌检测结果均为0。表1A、B厂家生产的麦芽糖质量指标检测结果厂家批号比旋度酸度水分含量微生物限度（cfu/g）质量标准+126°~+131°4.5-6.54.5%-6.5%≥98%需氧菌≤1000霉菌及酵母菌≤100A厂家A-11285.74.898.200A-21275.85.099.200A-31265.44.8100.600B厂家B-11295.35.999.700B-21285.56.0100.100B-31275.34.898.500均值127.55.55.299.400SD1.050.210.570.9300P0.2880.1240.2070.912//2.2A、B厂家麦芽糖生产的静注人免疫球蛋白（pH4）质量可比性研究A、B厂家的麦芽糖生产的静注人免疫球蛋白（pH4）各三批外观、可见异物、热稳定性试验、无菌检查和热原检查的质量指标均合格，渗透压摩尔浓度、蛋白质含量、纯度、麦芽糖含量、分子大小分布、PKA等指标均无显著性差异（P>0.05)。2.3两个厂家的麦芽糖生产的静注人免疫球蛋白（pH4）各3批分别置于25±2℃、5±3℃条件下，于0个月、1个月、2个月、3个月、6个月进行取样检测，各项质量指标均符合质量标准，趋势稳定。2.3.1渗透压摩尔浓度。静注人免疫球蛋白（pH4）产品在5±3℃和25±2℃条件下放置0个月、1个月、2个月、3个月、6个月后，渗透压摩尔浓度符合中国药典（2020年版三部）要求，随着放置时间的延长在5±3℃和25±2℃条件下渗透压摩尔浓度趋势平稳。在两种条件下的渗透压摩尔浓度检测结果无统计学差异，均符合中国药典（2020年版三部）要求（图1）。

图1不同温度条件下A、B厂家麦芽糖生产的静注人免疫球蛋白（pH4）渗透压摩尔浓度的趋势情况2.3.2pH值。静注人免疫球蛋白（pH4）产品在25±2℃和5±3℃条件下放置0个月、1个月、2个月、3个月、6个月后，pH值均在3.8-4.4之间符合中国药典（2020年版三部）要求，随着放置时间延长在5±3℃条件下pH值部分批次轻微下降趋势。在25±2℃条件下pH值趋势平稳，在25±2℃和5±3℃条件下pH值检测结果无统计学差异，均符合中国药典（2020年版三部）要求（图2）。图2不同温度条件下A、B厂家麦芽糖生产的静注人免疫球蛋白（pH4）pH值的趋势情况2.3.3蛋白质含量。静注人免疫球蛋白（pH4）产品在25±2℃和5±3℃条件下放置0个月、1个月、2个月、3个月、6个月后，蛋白质含量均≥50g/L符合中国药典（2020年版三部）要求，随着放置时间的延长在5±3℃条件下蛋白质含量部分批次轻微下降趋势。在25±2℃条件下蛋白质含量趋势轻微上升，在25±2℃和5±3℃条件下的蛋白质含量检测结果无统计学差异，均符合中国药典（2020年版三部）要求（图3）。图3不同温度条件下A、B厂家麦芽糖生产的静注人免疫球蛋白（pH4）蛋白质含量的趋势情况2.3.4纯度。静注人免疫球蛋白（pH4）产品在25±2℃和5±3℃条件下放置0个月、1个月、2个月、3个月、6个月后，纯度均≥96%，符合质量标准要求，随着放置时间的延长在25±2℃和5±3℃条件下各批次纯度均有轻微下降趋势（图4）。图4不同温度条件下A、B厂家麦芽糖生产的静注人免疫球蛋白（pH4）纯度的趋势情况2.3.5麦芽糖含量。静注人免疫球蛋白（pH4）产品在25±2℃和5±3℃条件下放置0个月、1个月、2个月、3个月、6个月后，麦芽糖含量均在90~110g/L之间符合中国药典（2020年版三部）要求，随着放置时间的延长在5±3℃条件下麦芽糖含量部分批次轻微下降趋势。在25±2℃条件下麦芽糖含量趋势轻微上升。在25±2℃和5±3℃条件下的麦芽糖含量检测结果无统计学差异，均符合中国药典（2020年版三部）要求（图5）。图5不同温度条件下A、B厂家麦芽糖生产的静注人免疫球蛋白（pH4）麦芽糖含量的趋势情况2.3.6分子大小分布。静注人免疫球蛋白（pH4）产品在25±2℃和5±3℃条件下放置0个月、1个月、2个月、3个月、6个月后，分子大小分布均≥95%，符合中国药典（2020年版三部）要求，随着放置时间的延长在5±3℃条件下分子大小分布部分批次轻微下降趋势。在25±2℃和5±3℃条件下的分子大小分布检测结果无统计学差异，均符合中国药典（2020年版三部）要求（图6）。图6不同温度条件下A、B厂家麦芽糖生产的静注人免疫球蛋白（pH4）分子大小分布的趋势情况2.3.7抗补体活性。静注人免疫球蛋白（pH4）产品在25±2℃和5±3℃条件下放置0个月、1个月、2个月、3个月、6个月后，抗补体活性均≤50%，符合中国药典（2020年版三部）要求，随着放置时间的延长在5±3℃、25±2℃条件下抗补体活性部分批次轻微下降趋势。在25±2℃和5±3℃条件下的抗补体活性检测结果无统计学差异，均符合中国药典（2020年版三部）要求（图7）。图7不同温度条件下A、B厂家麦芽糖生产的静注人免疫球蛋白（pH4）抗补体活性的趋势情况3.讨论与结论静注人免疫球蛋白（pH4）的主要原料为健康人血浆，主要活性成分为人免疫球蛋白，本品含有广谱抗病毒、细菌或其他病原体的IgG抗体，另外免疫球蛋白的独特型和独特型抗体能形成复杂的免疫网络，所以具有免疫替代和免疫调节的双重治疗作用。经静脉输注后，能迅速提高受者血液中的IgG水平，增强机体的抗感染能力和免疫调节功能。麦芽糖在制品中的含量直接影响制品的质量，因此，在生产过程中必须严格控制麦芽糖质量。本研究以A、B厂家麦芽糖生产的静注人免疫球蛋白（pH4）进行质量可比性研究。结果显示，A、B厂家麦芽糖生产的静注人免疫球蛋白（pH4）各项质量指标均合格，各项质量指标无显著性差异。同时将A、B厂家麦芽糖生产的各3批静注人免疫球蛋白（pH4）置于25±2℃、5±3℃，分别于0个月、1个月、2个月、3个月、6个月取样进行检测，结果显示不同温度下纯度、蛋白质含量等项目均无显著性差异（P＞0.05）。本研究采用稳定性研究方式考察了A、B厂家麦芽糖生产的静注人免疫球蛋白（pH4）各项质量指标情况，结果显示均符合质量标准，两个厂家的麦芽糖均可用于静注人免疫球蛋白（pH4）的生产。Reference：[1]袁典,孙珍珠等.静注人免疫球蛋白(pH4)中水痘