【课件】微生物的培养技术及应用第2课时课件高二下学期生物人教版选择性必修3

第2节

微生物的培养技术及应用

（生物的基本培养技术）第一章

发酵工程复习——培养基的类型标准培养基种类培养基特点作用物理性质固体培养基加凝固剂，如琼脂

微生物的分离与鉴定，活菌计数，保藏菌种液体培养基不加凝固剂常用于扩大培养，工业生产功能选择培养基允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长培养、分离出特定微生物鉴别培养基在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物成分来源天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确分类鉴定复习——培养基的成分基本成分碳源、氮源、水、无机盐①含碳有机物（如葡萄糖）能为微生物提供___________________PH、O2、特殊物质其他要求乳酸杆菌：霉菌：细菌：碳源和能源②尿素CO(NH2)2能为微生物提供___________________氮源③铵盐等能为硝化细菌提供___________________氮源和能源添加维生素一般调至酸性一般调至中性或弱碱性复习——培养基的成分基本成分碳源、氮源、水、无机盐①无碳培养基能培养的微生物的同化类型是___________________②无氮培养基能培养什么样的微生物？___________________自养型生物固氮菌复习——灭菌技术项目消毒灭菌作用强度较为____

的物理、化学因素消灭微生物的数量物体表面或内部

微生物物体内外的

微生物能否消灭芽孢、孢子消灭

芽孢能消灭

芽孢和孢子适用对象操作空间、操作者的衣着和手等接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等常用方法温和强烈一部分所有部分全部煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法湿热灭菌、干热灭菌灼烧灭菌判断以下需要哪种消毒或灭菌方法1.日常生活常用

。

2.对不耐高温的液体，用

。3.接种室、接种箱、超净工作台喷洒石炭酸或煤酚皂以增强

效果。4.操作者双手用

。5.饮用水源用氯气等化学药物

。6.表面灭菌和空气灭菌用

。7.接种环、接种针、试管口用

。8.玻璃器皿、金属用具用

。9.培养基、无菌水用

。煮沸消毒法巴氏消毒法消毒酒精消毒化学药剂消毒法紫外线消毒灼烧灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌复习——灭菌技术微生物的纯培养培养物纯培养物纯培养

将接种于培养基内，合适条件下形成的含特定种类微生物的群体。(可能含有多种微生物)

由单一个体繁殖所获得的微生物群体。（只有一种微生物）

获得纯培养物的过程。1）配制培养基2）灭菌3）接种4）分离5）培养步骤：酵母菌的纯培养原理：微生物群分散或稀释单个细胞单个菌落繁殖平板划线法和稀释涂布平板法方法：酵母菌的纯培养原理：微生物群分散或稀释单个细胞单个菌落繁殖平板划线法和稀释涂布平板法稀释涂布平板法平板划线法方法：酵母菌的纯培养第一步：制备培养基①配制培养基

→

②灭菌

→

③倒平板称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖（也可用蔗糖代替）、15-20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml。（马铃薯琼脂培养基）酵母菌的纯培养第一步：制备培养基①配制培养基

→

②灭菌

→

③倒平板称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖（也可用蔗糖代替）、15-20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml。（马铃薯琼脂培养基）酵母菌的纯培养第一步：制备培养基①配制培养基

→

②灭菌

→

③倒平板（马铃薯琼脂培养基）将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15-30min。将5-8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160-170℃灭菌2h。酵母菌的纯培养如果要调节培养基PH，应该在定容后、灭菌前进行调节酵母菌的纯培养第一步：制备培养基①配制培养基

→

②灭菌

→

③倒平板待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。酵母菌的纯培养第一步：制备培养基①配制培养基

→

②灭菌

→

③倒平板待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。培养皿冷却凝固后，为什么要倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固的培养基表面湿度也比较高。将平板倒置，既可以防止水分过快蒸发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。如何检测培养基制备是否成功？

37℃倒置培养24～48h，观察是否有微生物生长酵母菌的纯培养第二步：接种和分离酵母菌——平板画线法通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经数次划线后培养，可以分离得到单菌落。酵母菌的纯培养第二步：接种和分离酵母菌——平板画线法通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经数次划线后培养，可以分离得到单菌落。酵母菌的纯培养第二步：接种和分离酵母菌——平板画线法通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经数次划线后培养，可以分离得到单菌落。12345注意：①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次②划线首尾不能相接③每次划线前后接种环进行灭菌酵母菌的纯培养第三步：培养酵母菌完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养24~48h。1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？灼烧时期目的取菌种前每次划线前接种结束后杀死接种环上原有微生物。杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。2.在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因？以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线的原因？

使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，以便获得单个菌落。思考思考1.在未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有，说明了什么？2.在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了单菌落？这些菌落的颜色、大小是否一致？如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的吗？1.在未接种的培养基表面应该没有菌落生长，如果有，说明培养基被杂菌污染。2.提示如果观察到了不同形态的菌落，可能是接种的菌种不纯或者无菌操作不规范等原因引起的。3.是否进行了及时细致的观察与记录？培养12h与24h后的酵母菌菌落的大小会有明显不同。（培养时间越长，菌落越大、颜色越深）酵母菌的纯培养2.接种和分离酵母菌1.制备培养基3.培养酵母菌①配制培养基（马铃薯、葡萄糖、琼脂、水）②灭菌③倒平板（在酒精灯火焰附近操作）培养基：湿热灭菌（高压蒸汽灭菌锅）培养皿：干热灭菌（干热灭菌锅）用接种环在固体培养基上用平板划线法接种平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱培养小结小结练习1.下列有关平板划线操作的叙述，不正确的是()A.第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物B.每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种C.在第二次划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液D.划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种，避免微生物污染环境和感染操作者C酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下列问题：（1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的________，及时对培养基进行______________，并进行灭菌。（2）取步骤②中不同浓度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中。在步骤③中将温度约______（在“25℃”“50℃”或“80℃”中选择）的培养基倒入培养皿，冷凝后倒置。练习PH分装50℃酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减