国内外沙门氏菌检测方法

国内外沙门氏菌检测方法第1页/共33页DANIELELMERSALMON,(1850-1914)

美国兽医微生物和病理学家。是美国授予的第一位兽医学博士。1884年任美国农业部畜牧局首任局长。他首次从病猪中分离出猪霍乱沙门氏菌。在医学微生物中通用的沙门菌一词，就是为纪念他而以他的名字命名的。沙门菌（Salmonella）第2页/共33页沙门菌（Salmonella）

沙门菌属（Salmonella）是一大群寄生于人类和动物肠道内生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌统称为沙门杆菌。第3页/共33页沙门菌（Salmonella）

目前至少有67种O抗原和2000个以上血清型，所致疾病称沙门菌病。肠热症：是伤寒病和副伤寒病的总称，主要由伤寒杆菌和甲、乙、丙型副伤寒杆菌引起。

急性肠炎(食物中毒):是最常见的沙门杆菌感染。多由鼠伤寒杆菌、猪霍乱杆菌、肠炎杆菌等引起。

败血症：常由猪霍乱杆菌、丙型副伤寒杆菌、鼠伤寒杆菌、肠炎杆菌等引起。

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大小0.6～1.0×2～3um，无芽胞，一般有鞭毛(鸡沙门菌除外)，无荚膜，多数有菌毛，革兰氏阴性杆菌，需氧或兼性厌氧，最适生长温度为35～37℃，最适pH值为6.8～7.8。沙门菌生物学性状

第5页/共33页不分解乳糖（亚利桑那菌除外）。分解葡萄糖产酸产气（伤寒沙门菌产酸不产气）。多数产生H2S，不产生靛基质，不液化明胶，不分解尿素，不产生乙酰甲基甲醇，多数能利用枸橼酸盐，能还原硝酸盐为亚硝酸盐，在氰化钾培养基上不生长。沙门菌生物学性状

第6页/共33页沙门菌常用生化试验三糖铁（TSI）尿素酶试验阴性（黄）阳性（红）第7页/共33页沙门菌常用生化试验吲哚试验阴性（液面黄）阳性（液面红）

VP试验阳性（红色）阴性（不变）第8页/共33页沙门菌常用生化试验赖氨酸脱羧酶试验对照阳性（紫）阴性（黄）丙二酸盐试验阳性（兰）阴性（不变）第9页/共33页ONPG试验阳性（黄）空白沙门菌常用生化试验第10页/共33页国内外沙门菌检测方法（传统方法）

国家标准行业标准FDA（Food&DrugAdministration）

AOAC(AssociationofOfficialAnalyticalChemists)

FSIS（FOODSAFETYANDINSPECTIONSERVICE）

ISO加拿大官方食品微生物分析方法

第11页/共33页冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品前增菌法25g＋BPW225mL36℃

±

1℃一般4h，干蛋品18h～24h10mL＋MM（或TTB）100mL10mL＋SC100mL直接增菌法25g＋灭菌生理盐水25mL检样匀液25mL＋MM（或TTB）100mL检样匀液25mL

＋SC100mLBSDHL（或HE、WS、SS）TSI（排除A/AH2S－结果），靛基质，尿素，KCN，赖氨酸沙门氏菌血清学试验甘露醇山梨醇H2S＋靛＋尿－KCN－赖＋H2S－靛－尿－KCN－赖＋/－非如左述的各种反应结果沙门氏菌血清学试验ONPG－沙门氏菌非沙门氏菌42℃18h～24h36℃

±

1℃18h～24h42℃18h～24h36℃

±

1℃18h～24h36℃

±

1℃40h～48h36℃

±

1℃18h～24h

微生物学检验沙门氏菌检验中华人民共和国国家标准GB/T4789.4-2003第12页/共33页

出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法

肉类、蛋品缓冲胨水（BPW）四硫磺酸盐煌绿（TTB）亚硒酸盐胱氨酸（SC）37

℃4hor20～24h直接选择性增菌亚硒酸盐胱氨酸（SC）四硫磺酸盐煌绿（TTB）37℃24±2h

BS&DHL(亚利桑那菌琼脂)

前增菌37℃24～48hTSI&赖氨酸脱羧酶TSI&尿素酶37℃24～48h生化试验血清学试验（“O”抗原，“Vi”抗原）42℃20±2h37℃24～48h结果判定检验检疫行业标准SN0170－92第13页/共33页

样品（20类）25g225mL乳糖肉汤（LB）or胰酪胨大豆肉汤（TSB）or煌绿溶液（BG）or通用前增菌肉汤（UPB）or营养肉汤（NB）or再造脱脂奶粉or四硫酸盐煌绿（TT）pH6.8±0.224±2h35℃RVTT

43±0.2℃or35±2.0℃24±2h

24±2h42±0.2℃BS&XLD&HE24±2h35℃TSI&LIA非沙门菌沙门菌非沙门菌LIA+LIA－TSIK/ALIA－TSIA/A&尿素酶，H抗原（多价H抗血清或Spicer-Edwardsflagellar(H)test），赖氨酸脱羧酶，酚红卫矛醇肉汤，色氨酸肉汤（KCN，丙二酸盐，吲哚），O抗原酚红乳糖肉汤，酚红蔗糖肉汤，MR－VP,西蒙氏柠檬酸盐5种商业生化鉴定系统（API20E,EnterotubeII,

EnterobacteriaceaeII,MICRO-ID,orVitekGNI）&O抗原&H抗原细菌学分析手册（FDA/BAM）第五章沙门菌属第14页/共33页肉、禽和蛋品中沙门菌的分离和鉴定USDA/FSISMLG4.02样品BPWorBPW（含结晶紫）35±1℃20-24hBGS&DMLIAorXLT442±0.5℃22~24h0.5±0.05mL＋10mLTT0.1±0.02mL＋10mLmRV42±0.5℃22~24h35±1℃18~24h&48hTSI&LIA血清学试验商业生化试剂盒或自动鉴定系统or传统生化鉴定（AOACOfficialMethod967.27or"EdwardsandEwing'sIdentificationofEnterobacteriaceae"）报告结果第15页/共33页肉制品中沙门菌的分离和鉴定FDA&USDA/FSIS乳糖肉汤缓冲蛋白胨水TTB肉汤RV肉汤TTB肉汤RV肉汤BSXLDHEXLT42倍改良LIABGS生化筛选（LIA,TSI）鉴定及确证试验葡萄糖脲酶试验卫矛醇动力试验吲哚MR-VP测试氰化钾粉红酒石酸盐琼脂乳糖水杨苷赖氨酸脱羧酶西蒙氏枸橼酸盐丙二酸蔗糖血清学试验第16页/共33页AOAC沙门菌检测方法AOACOfficialMethod967.25SalmonellainFoodsPreparationofCultureMediaandReagentsAOACOfficialMethod967.26SalmonellainProcessedFoodsDetectionAOACOfficialMethod967.27SalmonellainFoodsIdentificationAOACOfficialMethod967.28SalmonellainFoodsSerologicalTests第17页/共33页食品中的沙门菌检测方法AOAC967.25－967.28处理样品1mL+10mLSC1mL+10mLTT35℃24±2hXLD&HE&BS35℃24±2h（BS24h&48h）35℃24±2hTSI&LIA35℃24±2h纯培养物不纯培养物纯培养物MACorXLDorHE尿素酶－尿素酶＋非沙门菌H抗原，LIA，酚红卫矛醇肉汤，色氨酸肉汤（KCN，丙二酸盐，吲哚），O抗原吲哚＋&H血清－KCN＋&LIA－非沙门菌非沙门菌补充生化试验酚红乳糖肉汤，酚红蔗糖肉汤，MR－VP,西蒙氏柠檬酸盐非沙门菌沙门菌第18页/共33页25g样品225mLBPW35℃or37℃16~20h0.1mL+10mLRV10mL+100mLSC42℃24h35℃or37℃24h&48h酚红煌绿琼脂（亮绿琼脂）&第二种选择性平板35℃or37℃

20~24h无典型菌落再培养18～24h典型菌落（pinkred）营养琼脂纯化可疑菌落每个平板选5个菌落35℃or37℃

18~24hTSI，尿素酶，赖氨酸脱羧酶，ONPG，VP，吲哚血清学试验（O抗原，Vi抗原，H抗原）报告结果送参考实验室分型ISO6579:1993(E)

微生物－沙门菌检测的通用方法第19页/共33页25g样品营养肉汤or缓冲胨水or煌绿水溶液or胰蛋白酶大豆肉汤35℃18~24h1mL+9mLSC1mL+9mLTBG35℃24±2h42.5℃24±2hBS&BGS35℃24±2h&48±2h纯培养物不纯培养物纯培养物MACTSI&LIA&尿素琼脂O多价血清，H多价血清食品中沙门菌的分离和鉴定加拿大HPB方法商业生化试剂盒或自动鉴定系统报告MFHPB-20第20页/共33页沙门菌仪器检测法VIDAS（生物梅里埃公司）BAX（杜邦公司）第21页/共33页沙门菌仪器检测法VIDAS应用酶联免疫技术制造的全自动免疫分析仪，用荧光分析技术通过固相吸附器，用已知抗体来捕捉目标生物体，然后以带荧光的酶联抗体再次结合，经充分冲洗，通过激发光源检测，即能自动读出发光的阳性标本，其优点是检测灵敏度高，速度快，可以在48小时的时间内快速鉴定沙门氏菌、大肠杆菌O157：H7、单核李斯特菌，空肠弯曲杆菌和葡萄球菌肠毒素等。第22页/共33页

VIDAS

第23页/共33页沙门菌仪器检测法DUPONTQualiconBAXSystem应用DNA分子核酸探针或基因探针技术制造的全自动PCR分析仪。将已知核苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法标记，加入已变性的被检DNA样品中，在一定条件下即可与该样品中有同源序列的DNA区段形成杂交双链，从而达到鉴定样品中DNA的目的。第24页/共33页

DUPONTQualiconBAXSystem

第25页/共33页商品化生化鉴定系统VITEKGNI+应用一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片进行测试，卡片含有干燥的抗菌药物和生化基质。先制备一定浓度的欲鉴定菌株的菌悬液，然后将菌悬液接种到各种细菌的小卡上，将其放入具有读数功能的孵箱内，每隔一定时间，仪器会自动检测培养基的发酵情况，并换算成能被计算机所接受的生物编码。最后由计算机判定，打印出鉴定结果。第26页/共33页

VITEK

第27页/共33页商品化生化鉴定系统API20E

API20E生化鉴定是根据快速酶促反应及代谢产物的检测技术发展的一种细菌编码鉴定法，广泛应用于临床、食品中革兰氏阴性杆菌的快速鉴定。第28