临床微生物检验技术进展演示文稿

临床微生物检验技术进展演示文稿当前1页，总共27页。优选临床微生物检验技术进展ppt当前2页，总共27页。一、临床微生物病原体的快速诊断虽然对“快速”的时间长短没有正式的定义，但是大多数人期望快速的系统能在4h内提供可用的结果。通常微生物的繁殖时间（通常是30min或更长时间）不允许那些依赖微生物生长与否的检测方法，在短时间内产生可检测的生化反应。为了克服这一问题，必然使用全新的底物，检测待测菌产生的酶或蛋白质，从而在1～4h内检测出应答反应。当前3页，总共27页。（一）细菌与真菌的快速诊断1、质谱技术传统的形态学检测技术经典的利用酶学的生化反应技术

生化反应

编码技术

碳指纹技术质谱技术（MALDI-TOFMS）当前4页，总共27页。BrukerDaltonik,microflexBiotyper(Billerica,MA,USA)bioMerieuxVitekMS(Durham,NC,USA)theAndromasSAS(Paris,France).TheformertwoinstrumentsareavailableintheUSAandreceivedclearancefromtheFoodandDrugAdministration(FDA)forcertaingroupsofmicroorganisms.当前5页，总共27页。当前6页，总共27页。当前7页，总共27页。（1）在需氧/兼性厌氧的革兰阳性杆菌应用棒杆菌属菌可准确鉴定。MALDITOFMS可以鉴定分枝杆菌，这种检测需要特殊处理以杀灭待测菌（出于安全等考虑）、打散细胞聚集团块以及裂解细胞外壁（envelopes）等。MALDITOFMS应该能够鉴定大多数临床相关的分枝杆菌菌种。当前8页，总共27页。（2）在需氧/兼性厌氧的革兰阳性球菌应用MALDI-TOFMS对葡萄球菌（Staphylococci）、β-溶血性链球菌(b-hemolyticstreptococci、气球菌(Aerococci和肠球菌(Enterococci)的整体鉴定性能都是极佳的。而对一些α-溶血性链球菌(a-hemolyticstreptococci)有困难。当前9页，总共27页。布鲁克系统可能难以区分缓症链球菌(S.mitis)、口腔链球菌(S.oralis)与肺炎链球菌(S.pneumoniae)

；而VITEKMS系统则可以克服这一局限。尽管MALDI-TOFMS在种群水平上能够可靠地鉴别草绿色链球菌(viridansgroupstreptococci)，但它可能无法区分一些密切相关的种。其它链球菌，如乳链球菌(S.canis)、停乳链球菌停乳亚种(S.dysgalactiae)、化脓性链球菌(S.pyogenes)和S.infantarius、马肠链球菌(S.equinus)和S.lutetiensis等，彼此可能无法很好地区分开来。当前10页，总共27页。（3）在需氧/兼性厌氧的革兰阴性杆菌应用阴沟肠杆菌复合体植生拉乌尔菌、解鸟氨酸拉乌尔菌巴策尔弓形杆菌弯曲杆菌种小肠结肠炎耶尔森菌二氧化碳嗜纤维菌洋葱伯克霍尔德菌气单胞菌HACEK菌群当前11页，总共27页。沙门菌属内鉴定通常是不可行的，但是它可区分Salmonellaentericasubsp.entericaserovarTyphi和其它S.entericaserovars。ShigellaandE.coliaresocloselyrelatedthatShigellaisnotidentifiedbyMALDI-TOFMS.Todifferentiate,coloniesshouldbeexaminedforlactosefermentation,motilityandaspotindole.IfpositiveanidentificationofE.coliisappropriate.Ifnegativeforthesetests,ShigellashouldbesuspectedandanagglutinationwithShigellaantiseraperformed.当前12页，总共27页。（4）在厌氧菌应用MALDI-TOFMS技术可用于鉴定许多临床相关的厌氧菌。Jamal等报道使用布鲁克v3.3和生物梅里埃v1系统/v1.1数据库对274株常规分离厌氧菌（多属于Bacteroidesfragilis）的鉴定准确率分别为89%和100%。当前13页，总共27页。（5）在酵母菌应用MALDI-TOFMS可以鉴定酵母菌，且性能优于一些传统的表型鉴定系统。它可以鉴别都柏林假丝酵母菌(C.dubliniensis)和白假丝酵母菌(C.albicans)；皱折假丝酵母菌(C.rugosa)和近邹褶假丝酵母菌(C.pararugosa)；挪威假丝酵母菌(C.norvegensis)、克柔假丝酵母菌(C.krusei)和平常假丝酵母菌（C.inconspicua、）；近平滑假丝酵母菌(C.parapsilosis)、C.orthopsilosis

和C.metapsilosis；带补充数据库时可以鉴别新生隐球菌（C.neoformans）和格特隐球菌（C.gattii）。当前14页，总共27页。（6）在丝状真菌应用丝状真菌的表型易变，其蛋白质谱可随生长条件及分析菌丝区域的不同而变化，目前的商业数据库少有涉及这些菌。DeCarolis等人使用布鲁克Biotyper系统开发了曲霉菌（Aspergillusspecies）、镰刀菌（Fusariumspecies）和毛霉菌（Mucorales）的数据库，并用于94株菌的鉴定，其种水平的正确率高达97%。Iriart等人利用VITEKMSv1系统/v1.1数据库和直接上板测试操作，成功鉴定了44株曲霉菌中的82%的菌（包括数据库中存在的所有菌株）。当前15页，总共27页。（7）临床标本的直接检测血液感染尿液感染当前16页，总共27页。2、细菌、病毒及其它病原体基因型快速诊断（1）DNA靶向测序对于纯培养的微生物可以进行DNA序列的靶向测序。靶基因的保守区往往是PCR引物和DNA测序引物退火结合的区域。可变区具有独特的核苷酸序列，从而实现基于测序的特定菌株属和种的鉴定。鉴定细菌最常用的靶序列是16SrRNA基因（16SrDNA）。当前17页，总共27页。（2）电喷雾离子化质谱（ESI-MS）技术应用于PCR产物的分析它检测的是经PCR扩增后的广谱基因（例如rRNA）和特定基因的质量，而非细菌蛋白质的质量。电喷雾离子化质谱的检测精度能够确保通过检测扩增DNA的质量，精确地计算出扩增DNA的核苷酸组分。当前18页，总共27页。3、复合感染病原体的快速诊断PCR-液相芯片/固相芯片杂交技术。市场已见产品有LuminexxMAP和bioMérieuxFilmArray。一次可以检测多个病原体（细菌、真菌、病毒与寄生虫）；也可以检测不同类别的感染标本（血液、呼吸道分泌物、粪便与脑脊液）。当前19页，总共27页。标记荧光素待测PCR扩增片段交联有基因探针的编码微球当前20页，总共27页。二、临床微生物感染的快速诊断1、G试验、GM试验、隐球菌荚膜多糖抗原由于广谱抗生素的使用、侵袭性操作、肿瘤放化疗及老年患者免疫功能的下降，导致侵袭性真菌感染不断增加，真菌形态学及鉴定（生化反应）困难，有关侵袭性真菌感染需要开展G试验、GM试验、隐球菌荚膜多糖抗原检测。可以达到快速诊断侵袭性真菌感染并区分其感染的病原体。当前21页，总共27页。2、内毒素与外毒素内毒素和外毒素是细菌产生的两大类毒素物质。内毒素是革兰阴性细菌细胞壁的组成成分，它是磷酸一多糖一蛋白质的复合物。主要成分为脂多糖。其性质较稳定、耐热、毒性比外毒素低、其作用没有组织器官选择性，不同病原菌所产生的内毒素引起的症状大致相同，都能引起机体体温升高、腹泻和出现出血性休克和其他组织损伤现象。外毒素是病原菌在代谢过程中分泌到菌体外的物质。产生外毒素的细菌主要是一些革兰阳性细菌，少数革兰阴性菌如霍乱弧菌和产毒性大肠杆菌等也能产生外毒素。目前临床微生物检验能够开展的是内毒素，难辨梭状芽胞杆菌A、B毒素，幽门螺杆菌尿素酶、细胞毒素相关基因CagA和空泡毒素VacA的检测。当前22页，总共27页。3、病原体IgM病原体感染刺激机体产生早期IgM和恢复期IgG，IgM对于快速的早期感染诊断具有一定价值，目前检测包括嗜肺军团菌(LP)、肺炎支原体(MP)、Q热立克次体(COX)、肺炎衣原体(CP)、腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(IFA)、乙型流感病毒(IFB)、副流感病毒1、2和3型(PIVS)。当前23页，总共27页。4、超敏C