EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用

EB病毒感染试验室诊疗方法及合理利用EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第1页儿童EBV感染诊治中存在问题• EBV试验室诊疗方法选择和结果解读存在误区• IM抗病毒治疗较为混乱重症EBV相关疾病（CAEBV、EBV-HLH）等诊疗和治疗缺乏经验EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第2页Epstein–Barr

virus(EBV)•1964年发觉，DNA病毒，疱疹病毒•人群感染率高，终生潜伏感染，含有感染-潜伏-活化特征•肿瘤相关病毒，每年EBV相关肿瘤死亡病例达15-20万•与很多疾病相关，几乎可引发全部脏器和组织相关疾病•细胞免疫非常主要KhanGetal.InfectiousAgentsandCancer,,

9:38.EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第3页EB病毒连续感染示意图• 原发感染后，EBV在人体B淋巴细胞建立潜伏感染，只表达潜伏抗原，受感染者成为终生病毒携带者• EBV健康携带者咽部不定时排毒•在机体免疫功效下降和一些原因触发下，潜伏EBV可以被再激活，引发病毒复制及临床症状Rev.Med.Virol.;18:305–319EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第4页EBV感染流行病学• 在我国，EBV原发感染高峰年纪在儿童，10岁时90%以上血清阳性转化0.200.60.4EBV血清抗体阳性转化率10.80-3m≥10y3m-1y 1y-3y 3y-6y6y-10y年纪百分率CA-IgGNA-IgG

CA-IgM中华试验和临床病毒杂志，,22（1）：30-32北京儿童医院资料EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第5页传染性单核细胞增多症（Infectiousmononucleosis，IM）慢性活动性EB病毒感染（ChronicactiveEBVinfection，CAEBV）EB病毒相关性嗜血细胞综合征（EBV-associatedhemophagocyticsyndrome,EBVAHS)• 伴性淋巴增殖综合征（X-linkedlymphoproliferativesyndrom）鼻咽癌（Nasopharyngealcarcinoma）Burkitt’s淋巴瘤（Burkitt’slymphoma）何奇金淋巴瘤（Hodgkin’slymphoma）• 其它：脑炎，肾炎，间质性肺炎，肝炎，多发性硬化…EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第6页临床实践诊疗EBV感染时需要回答问题•是否感染EBV?•EBV感染时相？•是否EBV活动性感染？•组织或器官中EBV感染细胞定位怎样？EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第7页EBV感染相关试验室指标• 血常规：淋巴细胞百分比＞50%（学龄以上儿童）• 嗜异凝集抗体• 异型淋巴细胞• EBV特异性抗体• 荧光定量PCR检测EBV核酸• EBERs原位杂交试验：EBV感染受累组织学证据特异性指标非特异性指标EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第8页试验室指标一：嗜异凝集抗体• 血清嗜异凝集抗体检测也称“Monospot”试验，1932年引入临床实践诊疗传染性单核细胞增多症该为IgM抗体，在病程第1～2周出现，连续约6个月在青少年原发性EBV感染中其阳性率可达80％-90％，约10％青少年缺乏对嗜异性抗体阳性反应小于12岁者，EBV感染IM患者该试验阳性率为25%-50%JApplClinPediatr,

,22(22)NEnglJMed.

;362:1993-EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第9页试验室指标二：异型淋巴细胞• 外周血异型淋巴细胞百分比≥10%1、在西方国家，其诊疗IM敏感性为75%，特异性为92%2、学龄前儿童异型淋巴细胞百分比较低。外周血异型淋巴细胞百分比≥10%病例在学龄前儿童EBV-IM中只有41.8%；对于较大年纪儿童异型淋巴细胞诊疗意义更大NEnglJMed.;362:1993-WorldJPediatr,,7(1):45-49EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第10页试验室指标三:

EBV特异性抗体EBV-CA-IgM检测1、近期EBV感染指标，广泛应用于临床2、EBV感染血清学反应复杂多样，有病例抗EBV-CA-IgM产生延迟，有连续缺失或长时间存在3、12%-17%大于16岁青少年原发EBV感染后不能检测到CA-IgM抗体，且4岁以下幼儿CA-IgM抗体水平低，连续时间短，易见假阴性结果GaoLiwei,etal.ChinJEvidBasedPediatr,,6(6):467-470.RobertsonP,JMedVirol,,70(4):617-623EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第11页单份血清VCA-IgM在诊疗

小年纪儿童原发性EBV感染IM不足PediatricsInternational()52,

536–540EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第12页原发EBV感染体液免疫• 原发性EBV感染过程中首先产生针对衣壳抗原（capsidantigen，CA）IgG和IgM（抗CA-IgG/IgM）•在急性感染晚期，抗早期抗原（earlyangtigen，EA）抗体出现• 在恢复期晚期，抗核抗原（nuclearantigen，NA）抗体产生抗CA-IgG和抗NA-IgG可连续终生JMD,,

10(4):279-292不一样时间段抗体谱不一样EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第13页5%EBV新近感染抗CA抗（IgM）阴性在罕见病例中抗CA抗体(IgM)会连续阳性20-30%EBV新近感染抗EA抗体（IgG）阴性抗EBNA抗体(IgG)阴性体液免疫特殊情况EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第14页试验室指标四：EBV病毒核酸检测• Real-timePCR是当前最主要监测EBV载量方法，能够指导治疗和判断疗效，如PTLD/EBV-HLH/CAEBV等• 样本：血样本（包含全血、单个核细胞、或血清/血浆），非鼻咽拭子或鼻咽吸收液，不一样疾病所需适宜样本不一样注意：Real-timePCR阳性，只能提醒机体存在活动性EBV感染或病毒活动性复制，不能判别是原发EBV感染还是既往EBV感染再激活，如淋巴瘤患者、免疫抑制患者、HIV感染者，所以，单纯Real-timePCR阳性在IM诊疗中价值有限EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第15页试验室指标五：EBERS原位杂交试验•EBV潜伏感染细胞含有大量EBER1/EBER2（EBERS）转录子•每个EBV潜伏感染细胞含有大约106拷贝EBERS，被认为EBV潜伏感染最好标志物•原位杂交试验检测肿瘤细胞中EBERS是诊疗肿瘤是否EBV相关金标准EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第16页阳性对照阴性对照EBV-EBERS阳性样本阴性样本EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第17页不一样EB病毒相关肿瘤中EBERS检出情况Rev.Med.Virol.;18:

305–319.EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第18页•是否感染EBV?•EBV感染时相？临床实践需要回答问题（一）EBV血清抗体谱检测EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第19页HHBalfour,etal.Clinical&TranslationalImmunology,,4(2),

e33.EBV抗体谱检测，能够初步判断是否感染EBV，以及感染大致时间

如EBNA-IgG阳性，提醒机体最少已感染EBV近2-3个月EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第20页免疫功效正常患者EBV血清学特点抗EBV抗体VCA-IgMVCA-IgGEBNA-IgG解释阴性阴性阴性无免疫反应阳性阴性阴性急性感染或非特异反应1阳性阳性阴性急性感染阴性阳性阳性既往感染阴性阳性阴性急性感染或既往感染1阳性阳性阳性原发感染晚期或再激活1阴性阴性阳性既往感染或非特异反应注：1

有待深入确定WorldJ

Virol,,1(1):31-43.EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第21页CAEBV患者EBV抗体检测ChinMedJ;

122(3):262-266.CAEBV患者EBV抗体谱展现各种类型，多数患者EA-IgG阳性，提醒活动性感染EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第22页EBV-HLH患者EBV抗体检测ChinMedJ.;123(11)

:1426-1430.EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第23页临床实践需要回答问题（二）•机体是否存在EBV活动性感染？——EBV核酸检测•何种标本送检？血清/血浆？全血？PBMC?——不一样疾病需要送检标本不一样EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第24页JMolDiagn.

,10(4):279-92.EBV既往感染健康人群，血清/低血浆中检测不到EBV-DNA；但全血/PBMC标本中常有拷贝EBV-DNAEB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第25页Rev.Med.Virol.;18:

305–319不一样EBV相关疾病中，EBV核酸在外周血中存在区间不一样EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第26页ExpertRev.Clin.Immunol.,9(2),

139–151.EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第27页•IM患者外周血中EBV载量在2周内到达峰值，至病程14天，多数IM患者血清中已检测不到病毒核酸，病程22天后，全部IM血清中均检测不到EBV核酸JMedVirol,,70(4):617-623• 但外周血单个核细胞中EBV核酸阳性可连续6个月以上，需要1年或更长时间到达EBV健康携带者全血EBV-DNA水平（1-50拷贝EBV-DNA/106个WBC）JInfectDis,,207:80-88JMolDiagn.,10(4):279-92• 标本：血清或血浆，不提议使用全血或PBMC标本• 重症病例监测EBV载量有利于判别EBV-HLHEB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第28页• 绝大多数CAEBV患者PBMC中EBV-DNA水平高于102.5拷贝/gDNA，CAEBV患者血浆/血清中EBV-DNA水平与病情严重程度和预后相关• CAEBV患者血浆和PBMC中EBV核酸载量存线性关系CAEBV患者EBV-DNA检测Blood,,98:280-286EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用第29页• EBV-HLH患者外周血单个核细胞（PBMC）和血浆/血清均含有很高EBV-DNA载量，监测EBV-HLH患者血清中EBV-DNA载量有利于评定疗效EBV-HLH患者EBV-DNA检测Leukemia&Lymp