Chap生物制品分析概论

Chap生物制品分析概论第1页/共40页生物药物(bio-pharmaceutics)生化药物(biochemicaldrugs)生物合成药物(biosyntheticdrugs)生物制品(biologicalproducts)基本概念第2页/共40页利用生物体、生物组织或组成生物体的各种成分，综合运用生物学、生物化学、微生物学、免疫学、物理化学和药学的原理与方法制得的一大类药物。包括从动物、植物和微生物等生物体中直接制取的各种天然生物活性物质以及人工合成或半合成的天然物质类似物。生物药物(bio-pharmaceutics)第3页/共40页指从动物、植物及微生物提取的，亦可用生物-化学半合成或用现代生物技术制得的生命基本物质，及其衍生物、降解物及大分子的结构修饰物等。如氨基酸、多肽、蛋白质、酶、多糖、脂质和核苷酸等。如：氨基酸、多肽、蛋白质、酶等。生化药物(BiochemicalDrugs)第4页/共40页由微生物代谢所产生的药物和必须利用微生物及其酶转化反应共同完成的半合成药物。如：维生素、抗生素、氨基酸、某些酶等。生物合成药物（biosyntheticdrugs）第5页/共40页是应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备，用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品。参见《中国生物制品规程》生物制品的一个显著特点：全程质量控制。生物制品(BiologicalProducts)第6页/共40页（1）疫苗类(Vaccines)（2）抗毒素及抗血清类(AntitoxinandAntiserum)（3）血液制品(BloodProducts)（4）细胞因子(Cytokines)及重组DNA产品

(RecombinantDNAProducts)（5）诊断制品(DiagnosticReagents)（6）其他制品(ElseProducts)第7页/共40页生物制品的特点1．分子量大，分子量不是定值2.结构确证难3.全过程的质量控制4.生物活性检查5.安全性检查6.效价(含量)测定第8页/共40页生物制品的全程质量控制2005版中国药典各论内容一般包括：①品名②定义、组成及用途③基本要求④制造⑤检定⑥保存运输及有效期⑦使用说明第9页/共40页第二节质量控制的基本程序与方法

一、鉴别试验二、杂质检查

三、安全性检查四、含量(效价)测定第10页/共40页一、鉴别试验理化鉴别化学、UV、HPLC生化鉴别酶法、电泳法生物鉴别法血清学法生物学法（小鼠惊厥试验）第11页/共40页二、杂质检查一般杂质特殊杂质安全性检查第12页/共40页安全性检查

热原检查法（家兔法）细菌内毒素检查法异常毒性试验过敏试验降压物质检查法无菌试验基因工程药物中可能杂质与污染物检查致突变试验生殖毒性试验第13页/共40页

家兔法

本法是将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，以其体温升高的程度，判定该供试品中所含热原是否符合规定。

热原检查法(Testforpyrogen)第14页/共40页细菌内毒素检查法(TestforBacterialEndotoxin)本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细菌苗内毒素的限量是否符合规定的一种方法。第15页/共40页鲎第16页/共40页用一定剂量的药物按指定的操作方法和给药途径给予规定体重的某种试验动物，观察其急性毒性反应。反应的判断以试验动物死亡与否为终点。异常毒性试验(TestforUndueToxicity)第17页/共40页过敏试验是检查异性蛋白的试验。药物中若夹杂有异性蛋白，在临床使用时易引起病人多种过敏反应，轻者皮肤出现红斑或丘疹，严重者可出现窒息、发结、血管神经性水肿、血压下降，甚至休克和死亡。过敏试验第18页/共40页降压物质是指某些药物中含有的能导致血压降低的杂质，包括组胺、类组胺或其他导致血压降低的物质。降压物质检查法(TestforDepressorSubstances)第19页/共40页无菌试验基因工程药物中可能杂质与污染物检查外源性DNA测定、宿主细胞蛋白质致突变试验生殖毒性试验第20页/共40页第三节常用定量分析法

第21页/共40页第22页/共40页第23页/共40页第24页/共40页1．反相高效液相色谱法(RP-HPLC)以(C4、C8、C18)烷基硅烷键合相为柱填料，以甲醇-水、乙腈-水或甲醇、乙腈与缓冲液构成的溶液为流动相，以紫外、荧光或电化学检测器为检测手段，这种色谱体系在生化药物(例如肽类、氨基酸、蛋白质、多糖等)定量分析中应用广泛。

色谱法第25页/共40页2.高效离子交换色谱法(HPIEC)HPIEC是蛋白质、多肽分离分析中常见的方法之一。具有较高质量的活性回收。3.高效凝胶过滤色谱法(HPGFC)HPGFC可用于多肽和蛋白质等生化药物的分离及其分子量的测定。第26页/共40页第27页/共40页第28页/共40页电泳法醋酸纤维素薄膜电泳法琼脂糖凝胶电泳法SDS毛细管电泳用于蛋白质类生物制品的分析第29页/共40页1.原理毛细管电泳是以弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的电泳分离分析方法。

高效毛细管电泳法（HPCE）（Highperformancecapillaryelectrophoresis）第30页/共40页电泳：电解质中带电粒子在电场力作用下，以不同的速度向电荷相反方向迁移的现象。电泳淌度：带电粒子在毛细管中定向移动的速度与所在电场强度之比。电渗流：毛细管内壁表面的电荷所引起的管内液体的整体流动，来源于外加电场对管壁溶液双电层的作用。几个概念第31页/共40页电渗流作用第32页/共40页毛细管电泳装置示意图第33页/共40页－－－－－－－－－－－－－－－－－－(－)(+)++++++++++++++++----------------毛细电泳中不同组分的迁移示意图第34页/共40页流出顺序正离子、中性粒子、负离子电渗流的速度是泳流速度的5-7倍第35页/共40页目前，毛细管电泳的分离模式主要有以下3种：(1)毛细管区带电泳：用以分析带电溶质。为了降低电渗流和吸附现象，可将毛细管内壁涂层。(2)毛细管凝胶电泳：在毛细管中装入单体，引发聚合形成凝胶，主要用于测定蛋白质、DNA等大分子化合物。第36页/共40页(3)胶束电动毛细管色谱在缓冲液中加入离子型表面活性剂如十二烷基硫酸钠，形成胶束，被分离物质在水相和胶束相(准固定相)之间发生分配并隨电渗流在毛细内迁移，达到分离。本模式能用于中性物质的分离。第37页/共40页柱效高理论板数数万至数千万速度快250秒分离10种蛋白质试剂消耗少数ml缓冲液进样量小nL级进样高效毛细管电泳法优点第38页/共40页HPCE的应用毛细