演示文稿微生物的分离和纯培养

演示文稿微生物的分离和纯培养当前1页，总共53页。（优选）微生物的分离和纯培养当前2页，总共53页。微生物的分离和纯培养显微镜和显微技术当前3页，总共53页。§1微生物的分离和纯培养当前4页，总共53页。无菌技术用液体培养基分离、培养用固体培养基分离、培养二元培养物分离、培养选择培养分离单孢子分离微生物分离方法微生物的保藏技术当前5页，总共53页。微生物纯种分离将多种混杂微生物，经某种技术或方法分离成纯种的过程纯培养（pureculture）在适宜条件下培养纯种获得的培养物（群体）当前6页，总共53页。单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，称为菌落(colony)。菌落当前7页，总共53页。一个菌落是一个纯种，也是一个纯培养；单个微生物只在固体培养基上形成菌落；在液体培养基中不会形成菌落当前8页，总共53页。同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落当前9页，总共53页。一、用固体培养基（营养琼脂平板）分离纯种当前10页，总共53页。微生物样品多种混杂某种方法分散成单个微生物平板培养单菌落每个菌落为纯种（纯培养）单菌落转接培养纯种（纯培养）（一）、微生物纯种分离的原理和方法当前11页，总共53页。（二）、纯种平板分离的不同方法从土壤中分离纯微生物104/ml103/ml102/ml101/ml当前12页，总共53页。涂布平板法稀释倒平板法1、涂布平板法（spreadplatemethod)当前13页，总共53页。2、稀释倒平板法（倾注平板法）（pourplatemethod)当前14页，总共53页。分区划线法（蛇形线法）操作图第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭菌接种环3、平板划线法（streakplatemethod）当前15页，总共53页。分区划线法适用范围：

适用于浓度较大的样品当前16页，总共53页。连续划线法操作图连续划线法适用范围：适用于浓度较小的样品当前17页，总共53页。培养严格厌氧微生物4、稀释摇管法（dilutionshakeculturemethod)当前18页，总共53页。二、用液体培养基分离纯化培养

个别细胞较大的细菌

原生动物、藻类接种物液体培养基顺序稀释法分离营养琼脂平板不能长菌落如何分离纯培养？当前19页，总共53页。培养物在液体培养基中进行高度顺序稀释，如果经稀释后的同一稀释度的大多数（95%以上）试管中没有微生物生长，有微生物生长的试管得到的培养物可能就是纯培养物。当前20页，总共53页。上节课知识回顾微生物分离纯化方法用固体培养基分离、纯培养稀释倒平板法涂布平板法平板划线法稀释摇管法用液体培养基分离、纯培养当前21页，总共53页。三、单细胞（单孢子）分离采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以得到纯培养，称为单细胞（单孢子）分离法。当前22页，总共53页。个体较小的微生物需采用显微操作仪分离难度与细胞或个体的大小成反比营养琼脂平板上不能形成菌落较大的微生物可使用毛细管提取当前23页，总共53页。Eachcolonywasexaminedmicroscopically当前24页，总共53页。四、选择培养分离创造适于目的微生物生长条件原理促使目的微生物快速生长呈优势菌抑制非目的微生物生长从混杂微生物中分离目的微生物当前25页，总共53页。1、利用选择培养基进行直接分离选择培养基

只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的培养基当前26页，总共53页。土壤目的菌优势非目的菌选择培养基直接分离单细胞选择培养基平板（含牛奶或酪蛋白唯一C、N源）37℃培养目的菌落菌落周围有透明蛋白水解圈1、利用选择培养基进行直接分离例一：分离筛选蛋白酶产生细菌当前27页，总共53页。含牛奶选择培养基目的菌生长平板营养选择因子：牛奶或酪蛋白只允许分解利用蛋白质的目的菌生长，淘汰非目的菌长出的目的菌并不一定是同种细菌，但皆产蛋白酶例一：分离筛选蛋白酶产生细菌当前28页，总共53页。例二：分离筛选产高温淀粉酶（65℃）细菌单细胞选择培养基平板（淀粉为唯一C源）65℃培养淀粉水解透明圈目的菌菌落选择因子：营养选择因子淀粉环境选择因子65℃高温当前29页，总共53页。人为创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。2、富集培养法富集培养是分离微生物菌种最强有力的技术之一营养选择因子和生理条件选择因子可无穷尽组合，可从自然界选择分离各类特异微生物当前30页，总共53页。例：从土壤中分离能产生ß－半乳糖苷酶的微生物富集培养选择培养基分离目的菌验证当前31页，总共53页。如果培养物中只含有两种微生物，而且是有意识的保持两者之间的特定关系的培养物称为二元培养物。五、二元培养物病毒和宿主细胞纤毛虫、变形虫和粘细菌当前32页，总共53页。微生物纯培养分离方法的比较方法应用范围稀释倒平板法

涂布平板法平板划线法稀释摇管法液体稀释法单细胞分离法选择培养分离即可定义,又可定量,用途广泛用得最多方法简便,多用于分离细菌主要分离严格厌氧菌适用于培养细胞较大的微生物局限于高等专业化的科学研究适用于分离某些生理类型较特殊的微生物当前33页，总共53页。六、无菌技术在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术称为无菌技术。它是微生物研究进行的关键。用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物在转接、培养微生物时防止其他微生物的污染当前34页，总共53页。1、所用物品的灭菌技术A、玻璃或金属器皿灭菌高温干热灭菌：干燥箱160－170℃干热空气2h灭菌湿热灭菌：高压蒸汽灭菌锅121℃湿热灭菌30min当前35页，总共53页。B、培养基或溶液的灭菌湿热灭菌：高压蒸汽灭菌锅121℃湿热灭菌30min当前36页，总共53页。C、血清或生长因子溶液灭菌过滤除菌：细菌滤器滤膜孔径小于细菌细胞的大小当前37页，总共53页。上节课知识回顾二、无菌技术单孢子分离选择培养分离二元培养物一、微生物分离纯化方法1、所用物品的灭菌技术玻璃或金属器皿灭菌培养基或溶液灭菌血清或生长因子灭菌当前38页，总共53页。2、接种接种:将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种.无菌接种:培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具在无菌条件下将含菌材料接种于培养基上，这个过程叫做无菌接种。当前39页，总共53页。1.接种针2.接种环3.接种钩4.接种锄5.接种铲6.接种匙7.接种刀8.接种刀9.剪刀10.钢钩11.镊子12.弹簧接种枪13.接种、枪（日本式）涂布棒弹簧接种枪当前40页，总共53页。接种环的灭菌接种环烧红接种环稍冷却接种工具当前41页，总共53页。挑选单个菌落划线当前42页，总共53页。1、实验台2、空气环境条件当前43页，总共53页。七、微生物的保藏技术菌种保藏的原理：根据菌种特性及保藏目的的不同，给微生物菌株以特定的条件，使其存活而得以延续。例如干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养等条件，使菌株的代谢水平降低，乃至完全停止，达到半休眠或完全休眠的状态。当前44页，总共53页。传代培养保藏冷冻保藏干燥保藏纸片保藏薄膜保藏寄主保藏微生物菌株保藏的方法：当前45页，总共53页。传代保藏斜面、半固体琼脂柱、液体传代培养保藏斜面：可保存数周至数年，可用石蜡或橡皮塞封口，低温延长保存时间液体：菌苔制成菌悬液，低温（悬液保藏法）缺点：繁琐、易污染、变异丧生原有特性当前46页，总共53页。冷冻保藏液氮保藏、低温冰箱等液氮可达－196℃，效果较好注意：速冻，减少冰晶损伤细胞冷冻保藏法细胞体积大的要比体积小的对低温更敏感；无细胞壁的比有细胞壁的更敏感。当前47页，总共53页。干燥保藏沙土管保藏、冷冻真空干燥保藏沙土管：产孢子菌。制成孢子悬液，加无菌沙土管，减压抽干水分，石蜡封口，冰箱保存。冷冻真空干燥：加保护剂样品预先冷冻，真空冰升华去水，低温保存，保存数十年，目前最普遍、最重要的方法，菌种保藏中心多采用此法。菌种保藏时采用不同手段保藏，防止某种方法失败导致菌种丧失。干燥保藏法当前48页，总共53页。标准菌株的保存使用

1.长期保存的储存菌株以冷冻干燥保藏为主，特殊要求的菌种可用其它方法进行保存，保存期可长达几年至几十年。

2.半储存菌株以含20%甘油的肉汤或液体石腊封存的半固体琼脂为主，在0℃以下保存，保存期为3－6个月。

3.应用菌株以琼脂斜面为主，在4℃保存，保存期为1－3个月。

4.菌种的传代不可超过6次。视菌种的特性及使用情况，一般储存菌株每5年传记代一次，每1-2年从储存菌株转接至半储存菌株，半储存菌株每3-6个月传代一次，每1-3个月从半储存菌株转接接至应用菌株。

5.每次检验用的菌株必须是从应用菌株转接的新鲜菌株。每支应用菌株用两次后必须销毁（121℃，0.1MPa高压灭菌处理15分钟以上）。

当前49页，总共53页。国内外菌种保藏部分情况我国于1979年7月成立了中国微生物菌种保藏管理委员会(CCCCM).该委员会下设6个菌种保藏管理中心,其负责单位、代号及保藏菌种的性质如下:

当前50页，总共53页。普通微生物菌种保藏管理中心(CCGMC)--中科院微生物所,北京(AS),真菌、细菌;中科院武汉病毒研究所,武汉(AS-IV),病毒。农业微生物菌种保藏管理中心(ACCC)---中国农业科学院土壤肥料研究所,北京(ISF)。工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)---轻工业部食品发酵工业科学研究所,南京(ID),真菌;卫生部药品生物制品检定所,北京(NICPBP),细菌；中国医学科学院病毒研究所,北京(IV),病毒。当前51页，总共53页。抗菌素菌种保藏管理中心(CACC)---中国医学科学院抗菌素研究所北京(IA)；四川抗菌素工业研究所,成都(SIA),新抗菌素菌种;华北制药厂抗菌素研究所,石家庄(IANP),生产用抗菌素菌种。兽医微生物菌种保藏管理中心(CVCC)---农业部兽医药品监察所,北京(CIVBP)。除了上述保藏中心外,我国从事微生物研究并保藏有一定数量各类专业用微生物菌种的科研单位、大专院校还有近百所。

当前52页，总共53页。世界55个国家的菌种