平板划线试验

平板划线试验第一页，共十八页，2022年，8月28日相关基础理论－－细菌的培养一般细菌均可用人工方法进行培养，使其生长繁殖，以便进一步观察和研究他们的各种生物学特征。为了获得良好的细菌培养物，在分离培养细菌时，除采用适宜的培养基，并考虑到其他的培养条件之外，掌握各种分离培养和接种的基本技术，也是重要环节。

第二页，共十八页，2022年，8月28日培养基

在土壤、水、食品、空气以及人和动、植物中，不同种类的细菌混杂地生活在一起。若要研究其中某种细菌，就必须将各种细菌进行分离，以得到只含有这一种细菌的纯培养。当细菌分离成纯种后，常需要接种到有关的培养基中，以测试其各种生物学性状，不同的细菌需要不同的培养基进行培养。

第三页，共十八页，2022年，8月28日一、培养基培养基按其物理性状，分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。培养基按用途，分基础培养基、加富培养基、选择培养基、鉴别培养基。第四页，共十八页，2022年，8月28日二、细菌的接种方法将混合的细菌分离的方法有多种，平板划线法即是其中之一，该方法主要是借划线而将混杂的细菌在琼脂平板表面分散开，是单个细菌能固定在某一点，生长繁殖后形成单个的菌落以达到分离纯种的目的。当细菌分离成纯种后，一般还可用斜面、液体和半固体培养基来检验细菌的培养特征，因此接种方法可相应的分为四种。第五页，共十八页，2022年，8月28日常见的几种细菌的培养和基接种方法举例

平板划线接种法斜面培养基接种法液体培养基接种法穿刺接种法菌种葡萄球菌和大肠杆菌的混合菌液大肠杆菌培养物大肠杆菌培养物枯草杆菌培养物变形杆菌培养物痢疾杆菌培养物培养基普通琼脂平板琼脂斜面培养基普通肉汤培养基半固体琼脂培养基第六页，共十八页，2022年，8月28日平板划线接种法

常用于分离单个菌落，也可用于观察细菌的生长状况和观察某些生化反应。第七页，共十八页，2022年，8月28日平板划线接种法——接种方法（1）标记在培养皿底面，用记号笔注明接种的菌名、接种者姓名、日期等。

第八页，共十八页，2022年，8月28日4、平板划线接种法

（2）灭菌接种环点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环，并放置火焰中烧灼灭菌，先将接种环的接种丝部分置于火焰中，待金属丝烧红并蔓延至金属端，再直接烧灼金属环直至烧红，然后由金属环至金属杆方向快速通过火焰，随后再反方向通过火焰，如此2~3次。然后将接种环移开火焰，待其冷却。第九页，共十八页，2022年，8月28日4、平板划线接种法

图2-4灭菌接种环第十页，共十八页，2022年，8月28日平板划线接种法

（3）取菌种左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液的试管，用持有接种环的右手手掌及小指拔取试管塞，将试管管口迅速通过火焰2~3次进行灭菌。将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管管口再次通过火焰2~3次灭菌，塞好试管塞，放至原来的位置。第十一页，共十八页，2022年，8月28日平板划线接种法

（4）分离划线接种细菌（四区接种法）①左手持琼脂平板培养基（将皿盖反放在桌上酒精灯附近），尽量使之直立以免空气中的细菌落入其中，并靠近火焰。右手持接种环在琼脂平板上端来回划线，涂成一细菌薄膜（约占平板的1/10），视为一区。划线时使接种环与接种平板面呈30~40度角，以腕力在平板表面行轻而快地来回滑动动作。②旋转琼脂平板90度，烧灼接种环，以杀灭环上的残留细菌，将接种环触及培养基表面以使其冷却。灭菌接种环通过薄膜处作连续平行划线（约占平板1/5），此视为二区。第十二页，共十八页，2022年，8月28日平板划线接种法

③旋转琼脂平板90度，灼烧接种环灭菌并使之冷却。将灭菌接种环接二区连续平行划线（约占平板1/4），此为三区。④旋转琼脂平板90度，接种环不必再灭菌，接三区连续平行划线，划满平板其余部分，此视为四区。各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐渐稀释的目的。

第十三页，共十八页，2022年，8月28日平板划线接种法

四区划线第十四页，共十八页，2022年，8月28日平板划线接种法第十五页，共十八页，2022年，8月28日平板划线接种法

（5）划线完毕，将琼脂平板放进皿盖，将培养皿倒放，送进37℃温箱培养。（6）培养18~24h后将培养皿取出。观察琼脂平板表面生长的