诺如病毒G1型RT-PCR试剂盒使用说明书_第1页
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文档简介

/诺如病毒G1型RT—PCR试剂盒使用说明书产品及特点：诺如病毒（NorwalkVirus）是单股正链RNA病毒，属于人类杯状病毒属，是一种引起非细菌性急性肠胃炎的病毒，如诺病毒感染性强，以肠道传播为主，通过口粪传播，以污染的水源、食物、贝类、物品、空气作为重要传播载体。诺如病毒可分为GIG五个基因群，其中引起人类感染的重要是G1和G2群。因此快速灵敏诊断具有紧要意义。为此本公司开发了本产品，采纳RTPCR技术检测疑似感染动物血清或组织中的诺如病毒G1型。它具有下列特点：1.即开即用，用户只需要供给样品RNA模板。2.供给阳性对比，便于区分假阴性样品。3.产品细心优化且特异性高，引物是依据诺如病毒G1型RNA高度保守区设计，不会跟除此之外的其它病毒RNA发生交叉反应。4.RTPCRmix中含上样染料，扩增反应后可以直接上样电泳。5.本产品充足50次20μL体系的PCR反应。6.本产品只能用于定性试验，不能用于定量。7.本产品只能用于科研。规格及成分：成份ABCDE使用手册注：为避开扩散传染性病原，本产品不供给活体样品做阳性对比，只供给专一的核酸片段作为阳性对比。运输及保存：低温运输，20℃保存，保存期限为12个月。自备试剂：样品RNA使用方法：一、样品DNA的制备1.假如有N个样品，必需设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是PC（样品制备阳性对比），一个是NC（样品制备阴性对比）。可以用10μL诺如病毒G1型PCR阳性对比（1×10E6拷贝/μL，本试剂盒供给）再加上肯定量的水作为制备的阳性对比（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对比。2.用自选方法纯化上述N+2个样品的DNA。本试剂盒跟市场上大多数细菌DNA提取试剂盒兼容。二、设置PCR反应（20μL体系）3.标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的DNA样品，额外加添的两个管一个用于PCR阳性对比，另一个用于PCR阴性对比。依照下表在各PCR管中加入下列成分：成分/每管样品管N+2个PCR阴性对比PCR阳性对比A10μL10μL10μLD2μL2μL2μL制备的N+2个DNA样品7μLC7μLE7μLB1μL1μL1μL4.上机进行PCR，PCR反应参数为:过程温度时间逆转录50℃20min预变性95℃10minPCR反应（45个循环）95℃30sec55℃60sec72℃60sec延长72℃7min三、电泳分析5.取510uL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用1.5%2.0%的琼脂糖凝胶。6.阳性样品预期得到的扩增产物长度为220bp左右。假如两个阴性对比（样品制备阴性对比或PCR阴性对比）有此扩增产物，说明环境污染，则整个试验无效，不需要分析试验结果。7.假如全部样品和PCR阳性对比均无此扩增产物，则说明有系统性的问题（试剂、设备、程序、操作等），需要重复

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