常用免疫学检查3-23

基本概念

免疫

免疫是指机体接触“抗原性异物”或“异己成分”的一种特异性生理反应，其作用是识别和排除抗原性异物，以此维持机体的生理平衡。这些维持机体稳定性的反应，通常对机体是有利的：但在某些条件下也可以是有害的。第一页，共37页。现代免疫学认为：以下几种生理功能：(1)免疫防御；指机体排斥外源性抗原异物的能力。这是动物藉以自净、不受外来物质干扰和保持物种纯洁的生理机制。(2)免疫自稳；指机体识别和清除自身衰老残损的组织、细胞的能力，这是机体藉以维持正常内环境稳定的重要生理机制。这种自身稳定功能失调时易导致某些生理平衡的紊乱或者自身免疫病。(3)免疫监视：指机体杀伤和清除异常突变细胞的能力，机体藉以监视和抑制恶性肿瘤在体内生长。一旦功能低下，宿主易患恶性肿瘤。第二页，共37页。

免疫学检验免疫学检验又称检验免疫学，是研究免疫学技术及其在医学领域中的一门应用学科．免疫学检验的检测对象是具有免疫活性的物质，内容包括检测方法和临床意义．免疫学检验可分为细胞免疫检验和体液免疫检验两大类。利用抗原抗体反应来测定标本中微量物质的方法称为免疫测定。免疫测定具有高度的特异性和敏感性．第三页，共37页。淋巴细胞标志和功能检测人体内的淋巴细胞可分为T细胞、B细胞和包括NK细胞为代表的三群细胞分若干亚群，各有其特异的表面标志和功能，据此建立相应许多相应的检测方法第四页，共37页。T细胞表面标志物的检测1．特异性抗原检测用单克隆抗体检测T细胞表面抗原的方法有两大类，一类是用标记抗体着染，另一类用抗体致敏的红细胞作花环试验。2．特异性受体的检测原理T细胞表面有特异性绵羊红细胞(E)受体，当人的T细胞与绵羊红细胞悬液按一定比例混合后，置4'C至少2小时或过夜，T细胞表面的E受钵可与绵羊红细胞结合形成玫瑰花样的花环，称为活性E(Ea)花环。检测Ea花环形成细胞可反映受检者的细胞免疫水平。第五页，共37页。B细胞表面标志物的检测B细胞表面抗原检测原理B细胞表面的CD19、CD20、CD21CD22和CD29等分化抗原，有些系全部B细胞所共有，而有些仅活化B细胞所特有，因而可用相应的CD系列单克隆抗体，通过间接荧光免疫法，酶免疫组化或ABC法加以检测。第六页，共37页。肿瘤标志物

肿瘤标志物可被定义为作为肿瘤细胞合成和释放的生物性物质或由宿主响应肿瘤组织而产生的物质。肿瘤标志物分类大致有两种:其一按肿瘤标志物的来源，第二个肿瘤标志物本身的化学特性。按后者的分类主要包括:①肿瘤胚胎性抗原标志物;②糖类标志物;③酶类标志物;④激素类标志物;⑤蛋白质类标志物;⑥基因标志物。第七页，共37页。一种理想的肿瘤标志物应具有满足分析的和临床的需要两方面的特性.

临床的需要

对疾病的高灵敏度(没有假阴性结果，能检测微转移)

对疾病的高特异性(没有假阳性结果，在无病个体中阴性)

水平应反映出肿瘤的大小

在病情稳定的患者中水平应保持相对地恒定并且没有波动

在完全缓解的患者中应该检测不到或是低的

在病情稳定的患者中应能预测结果

第八页，共37页。常见的肿瘤标志物及其应用评价肿瘤胚胎性抗原标志物(1)癌胚抗原(CEA):CEA是由胎儿胃肠道上皮组织、胰和肝的细胞所合成，通常在妊娠前6个月内CEA含量最高，出生后血清中含量已很低下，健康成年人血清中CEA浓度小于2·5ug/L。在临床上，当CEA大于6Oug/L时，可见于结肠癌、胃癌和肺癌。(2)甲胎蛋白(AFP):妊娠的妇女的血和尿中AFP含量会持续增高，从妊娠6周开始合成，至12~15周达高峰。胎儿血浆中的AFP值可达到3mg/ml，出生后，AFP合成很快受抑制，其含量降至5Oug/L，周岁末婴儿的浓度接近成人水平，一般健康成人血浆AFP浓度低于25ug/L。

AFP是原发性肝癌的最灵敏、最特异的肿瘤标志，血清AFP测定结果大于5OOug/L以上，或含量有不断增高者，更应高度警惕。肝癌患者血清AFP含量变化的速率和程度与肿瘤组织分化程度高低有一定相关性。分化程度较高的肿瘤AFP含量常大于200ug/L。第九页，共37页。糖类抗原标志物

糖类抗原标志物，肿瘤标志物相关物质是指由肿瘤细胞表面的抗原物质或者是肿瘤细胞所分泌的物质，这类物质又是单克隆抗体，故又称为糖类抗原(CA)。(l)CAl25:CAl25是上皮性卵巢癌和子宫内膜癌的标志物，浆液性子宫内膜样癌、未分化卵巢癌患者的CAl25含量可明显升高。(2)CAl5-3:正常健康者血清CAl5-3含量(RIA法)小于28kM/L。30%~50%乳腺癌患者的CAl5-3明显升高，肺癌、胃肠癌、卵巢癌及宫颈癌患者的血清CAl5-3也可升高，应予以鉴别。(3)CAl9-9:正常人群的CAl9-9血清含量为(RIA法)2~16KM/L。Cal9-9是胰腺癌和结、直肠癌的标志物。如胰腺炎和黄疽，Cal9-9浓度也可增高，但往往呈"一过性"，必须加以鉴别。第十页，共37页。

酶类标志物前列腺特异性抗原(PSA)

PSA是前列腺癌的特异性标志物，目前少数器官特异性肿瘤标志物之一。前列腺癌是男性泌尿系统的主要囊性肿瘤，前列腺癌的诊断特异性达90%~97%。

血清PSA除了作为检测和早期发现前列腺癌，还可用于治疗后的监控，90%术后患者的血清PSA值可降至不能检出的痕量水平。若术后血清PSA值升高，放疗后疗效显著者，50%以上患者在2个月内血清PSA降至正常。第十一页，共37页。第十二页，共37页。第十三页，共37页。第十四页，共37页。第十五页，共37页。第十六页，共37页。第十七页，共37页。第十八页，共37页。自身免疫疾病的检测

(一)自身免疫当某种原因使自身免疫耐受削弱或破坏时，免疫系统会对自身成分产生免疫应答这种现象称为自身免疫．(二)自身免疫性病的概念及特征健康个体的正常免疫调节功能会将自身耐受和自身免疫协调在一个相辅相成的合理水平上．当某种原因使自身免疫应答过分强烈时，也会导致相应的自身组织，器官损伤或功能障碍，这种病理状态称为自身免疫病(AID)，包括三个基本特征：1．患者血液中可以检出高滴度的自身抗体和(或)与自身组织成分起反应的致敏淋巴细胞．2．患者组织器官的病理特征为免疫炎症，并且损伤范围与自身抗体或致敏淋巴细胞所针对的抗原分布相对应。3．动物中可复制出相似的疾病模型，并能通过血清或淋巴细胞使疾病在同系动物同系动物中转移。第十九页，共37页。类风湿因子(RF)

RF是抗变性IgG的自身抗体，主要为IgM，也可见IgG及IgA，可与人或动物的变性IgG结合，而不与正常IgG发生凝集，最多见于类风湿性关节炎患者．RF在类风湿性关节炎患者中的检出率很高，RF阳性支持早期RA的倾向性诊断，如对年轻女性应进行RA和风湿热间的鉴别；而对非活动期RA的诊断，需参考病史。但RF也象ANA一样，并不是RA独有的特异性抗体。在SLE患者约有50％RF阳性，在混合性结缔组织病如ss、硬皮病、慢性活动性肝炎以及老年人中均可有不同程度的阳性率第二十页，共37页。

病毒性肝炎血清标志物检测

病毒性肝炎主要有5型，即甲型(HA)、乙型(HB)、丙型(HC)、丁型(HD)和戊型(HE)，它们分别由肝炎病毒甲型(HAv)、乙型(HBV)、丙型(HCV)、丁型(HDV)和戊型(HEV)所引起。HDV是一种缺损性病毒．依附HBv而存在和复制。现知还有己型和庚型肝炎。第二十一页，共37页。甲型肝炎病毒标志物RNA病毒，粪-口传播检测指标：抗HAV抗体（保护性抗体）HAVAg（粪）HAV-RNA第二十二页，共37页。[临床意义]①HAVAg阳性：见于70.6％～87.5％的甲肝患者。HAVAg于发病前二周可从粪中排出，其发病第一周粪便的阳性率为42.9％，1-2周为18.3％，2周后消失；②HAV-RNA阳性：对诊断具有特异性，特别对早期诊断意义更大。甲型肝炎病毒抗体测定机体感染HAV后，可产生lgM、lgA和lgG抗体。HAV-lgM是病毒衣蛋白抗体，HAV—IgA是肠道粘膜分泌的局部抗体，HAV—IgG病愈后可长期存在。①抗HAVIgM阳性：据观察，甲肝患者抗HAVIgM的阳性率，在发病后2周为100％，1个月为76.5％，3个月为23.5％，6个月为5.9％，12个月时可为阴性。所以，抗AVigM阳性说明机体正在感染HAV，它是早期诊断甲肝的特异性指标；②抗HAVIgA阳性：甲肝早期和急性期，由粪便中测得抗HAVIgA呈阳性反应，是早期诊断甲肝的指标之一；③抗HAVIgG阳性：提示既往感染，可作为流行病学调查的指标。第二十三页，共37页。乙型肝炎病毒（HBV)的实验室诊断

HBV为乙型肝炎的病原体，归类于Hepadna病毒科(1981年Robinson提倡的新病毒科)，为一直径42nm的球形颗粒，病毒核酸由两条不完全的环状DNA组成，有3200个碱基对。HBV外层为一厚约7nm的包膜，称为乙型肝炎表面抗原(HBsAg)，内层的抗原称为乙型肝炎核心抗原(HbcAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)，两者组成HBV的核心部分，HBeAg是HBcAg的一部分被切断后由149个氨基酸组成的多肤。核心内部还包含有双股DNA和DNA聚合酶见下图。第二十四页，共37页。LaboratoryDiagnosis

乙肝“两对半”及临床意义

HBsAg、抗HBsHBeAg、抗HBe抗HBcHBcAg、乙型肝炎病毒核心抗原(hepatitisBViruscoreantigen，HBcAg)存在于Dane颗粒的核心部位，是一种核心蛋白，其外面被乙型肝炎表面抗原所包裹，所以一般情况下血清中不易检测到游离的HBcAg。[临床意义]HBcAg阳性，提示病人血清中有感染性的HBV存在,表示复制活跃，传染性强，预后较差。约有78％的阳性病例病情恶化。第二十五页，共37页。1.乙肝五项标志物的临床意义：1）HBsAg阳性可见于急性乙肝的潜伏期、急性期、慢性期、无症状HBsAg携带者、部分肝硬化和肝癌的血清中及受HBV感染的肝细胞胞浆中，是乙肝的感染指标之一。2）Anti-HBs是特异性抗体，能中和体液中的HBV，可见于乙肝恢复期，HBV既往感染者和乙肝疫苗免疫后,反映机体对HBV具有保护性免疫力，Anti-HBs的效价与保护作用呈平行关系。第二十六页，共37页。3）HbeAg在乙肝潜伏期的后期出现，略晚于HBsAg,HBeAg存在于HBsAg阳性的血清中，其中大多数伴有血中Dane颗粒、HBVDNA、DNA多聚酶阳性，具有很强的传染性，有助于确定乙肝.无症状乙肝病毒携带者及妊妇的传染性强弱,HBeAg阳性表示HBV在体内复制。

第二十七页，共37页。其传染性较弱，HBeAg消失前后出现Anti-HBe，即由复制期转为非复制期，预示HBV繁殖中止或减弱，疾病可向好的方面转化，但有部分乙肝病人HBeAg转阴是HBV基因突变所致，故血中仍有HBV颗粒，所以,在乙肝中Anti-HBe不能作为HBV复制停止的绝对指标，Anti-HBe可存在于无症状携带者及无活动性肝病患者中，若Anti-HBe存在于慢活肝患者中，则肝病有可能继续发展，并逐步变成肝硬化。

4）Anti-HBe阳性者第二十八页，共37页。5）Anti-HBc是乙肝病毒核心总抗体感染乙肝病毒后最早出现的抗体是IgM型核心抗体（Anti-HBcIgM）,它是乙肝急性或近期感染的重要指标.在慢活肝（活动期)也可能呈阳性,核心抗体不是中和抗体,Anti-HBcIgG可持续多年不消退,是既往受过HBV感染的血清学指标。第二十九页，共37页。HBV抗原抗体系统检测临床意义HBsAgHBeAg抗-HBe抗-HBc抗-HBs临床意义IgMIgG+-----感染或无症状携带者++-+--（大三阳）（有传染）++--+-（大三阳）（有传染）+-++-（小三阳）--+-++恢复期（传染性低）-----+既往感染或接种疫苗------未感染，无免疫力第三十页，共37页。乙型肝炎病毒DNA测定乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)呈双股环形,是HBV的基因物质，也是乙型肝炎的直接诊断证据。[参考值]HBV—DNA斑点杂交试验和聚合酶链反应(PCR)为阴性。[临床意义]HBV-DNA阳性是诊断乙型肝炎的佐证，表明HBV复制及有传染性。菌素也用于监测应用HBsAg疫苗后垂直传播的阻断效果，若HBV—DNA阳性表明疫苗阻断效果不佳。第三十一页，共37页。第三十二页，共37页。丙型肝炎病毒标志物R