纯化水r2a培养基适用性验证

编号：FAL-YZ-005.1R2A培育基合用性考证报告编制/日期审查/日期评审会签姓名部门职务评审建议日期同意/日期科技发展有限企业目录序号内容页号1目的32范围33依照34职责权限35考证方法35.2考证内容和结果3－85.3考证结论96附件10-12R2A培育基合用性考证报告1.目的因2015版药典纯化水查验用培育基更改,依1105非无菌产品微生物限度检查方法,经过此次实验对所改换的R2A琼脂培育基进行合用性检查，以证明该方法及所采纳的培育基合用于纯化水微生物限度检查平时检测。2.范围合用于本企业纯化水的微生物限度检查。3．依照中华人民共和国药典（2015年版）职责权限姓名部门分工职责组长：组织确认或考证工作，同意方案和报告负责编制方案、实行、总结报告及微生物检测负责设施样品供给,配合实行方案的工作负责微生物检测考证方法5.1R2A培育基的合用性检查培育基应进行培育基的合用性检查。菌种试验用菌株的传代次数不得超出5代,试验用菌种应采纳适合的菌种收藏技术进行保留，以保证试验菌株的生物学特征。菌液制备铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的微生物培育基质控品,使用前注入1.1ml稀释液充分溶解后,在旋涡混淆器上振荡混匀,制成1ml(相当于10～第3页共12页100cfu/0.1ml)菌悬液。合用性检查取铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各10～100cfu，分别注入无菌平皿中，立刻倾注R2A琼脂培育基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培育许多于5天，计数；结果判断被检定的固体培育基上的菌落均匀数与比较培育基上的菌落平均数的比值在0.5～2范围内，且菌落形态大小应与比较培育基上的菌落一致。判该培育基的合用性检查切合规定。实验前的准备仪器设施设施名称设施编号设施状态压力蒸汽灭菌器10-11-53□未检定□己检定在有效期内激光灰尘粒子计数器Y09-3016□未检定□己检定在有效期内温湿度计JWS-A3□未检定□己检定在有效期内微压差表B10093624□未检定□己检定在有效期内微压差表B10090070□未检定□己检定在有效期内细菌培育箱SPX-100B-Z□未检定□己检定在有效期内霉菌培育箱MLX-150-1□未检定□己检定在有效期内确认人:日期:操作环境微生物限度检查应在环境干净度10000级下的局部干净度100级的单向流空气地区内进行。查验全过程一定严格恪守无菌操作，防备再污染。单向流空气地区、工作台面及环境应按期按《医药工业干净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行干净度考证。用具无菌培育皿：（直径90mm）1ml注射器第4页共12页5.2计数方法的考证当成立纯化水微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的考证，以确认所采纳的方法合适于该产品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定。若产品的组分或原查验条件发生改变可能影响查验结果时，计数方法应从头验证。考证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及以下要求进行。对各试验菌的回收率应逐个进行考证。菌种及菌液制备同计数培育基的合用性检查考证方法考证试验起码应进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。（1）试验组薄膜过滤法计数时，取1ml纯化水，过滤，冲刷，在最后一次的冲刷液中加入10～100cfu试验菌，过滤，滤膜置于R2A琼脂培育基上。2）菌液组将相当于10～100cfu/ml菌悬液置于100mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液过滤。3）供试品比较组取1ml纯化水供试液置于100mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，过滤，按菌落计数方法测定供试品本底菌数。结果判断在3次独立的平行试验中，试验组菌落数减去供试品比较组菌落的值与菌液比较组菌落数的比值应在0.5～2范围内。5.2.4.试验样品纯化水稀释液和试剂：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液用具无菌培育皿：（直径90mm）一次性注射器第5页共12页考证用微生物名称及其编号菌株名称编号铜绿假单胞菌CMCC(B)10104枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501培育基名称生产商培育基批号有效期琼脂培育基S（R2A琼脂）青岛尼赛欣合生物技术有限企业2015100920181008考证试验操作试验菌的制备和稀释铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的微生物培育基质控品,使用前注入1.1ml稀释液充分溶解后,在旋涡混淆器上振荡混匀,制成1ml(相当于10～100cfu/0.1ml)菌悬液.再用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液将其稀释制成10～100cfu/ml的菌悬液。将试验分为3组A样品试验组取纯化水1ml，置于装有PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml的三角烧瓶中或均质袋中，充分振摇1分钟。每张滤膜抽滤100ml的供试液,用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml冲刷滤膜,最后加入10～100cfu试验菌,每株试验菌平行制备2个平皿,按膜过滤法测定其菌数。B菌液组将10-100cfu/ml菌悬液置于装有100mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液的三角烧瓶中或均质袋中，充分振摇1分钟。每张滤膜抽滤100ml的供试液经过一张滤膜,平行制备两个.以测定所加的菌数。C供试品比较组取纯化水1ml，置于装有PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲第6页共12页液100ml的三角烧瓶中或均质袋中，充分振摇1分钟。每张滤膜抽滤100ml的供试液,用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml冲刷滤膜，平行制备2个平皿,按膜过滤法计数测定供试品的本底菌数。培育枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌在30～35℃下培育许多于5天，将点计菌落数。并将结果记录于附件。第7页共12页试验结果试验组的菌的回收率菌落计数（cfu/皿）回收接入菌种试验组供试品比较组菌液组率铜绿假单胞菌均匀值枯草芽孢杆菌均匀值表中：回收率=（试验组的均匀菌落数－供试品比较组的均匀菌落数的值）÷菌液组的均匀菌落数×100%。检测人:复核人:复核日期:第8页共12页5.3考证结论计数性培育基合用性检查结论:试验组菌落数减去供试品比较组菌落的值与菌液比较组菌落数的比值应在0.5～2范围内，且菌落形态大小应与比较培养基上的菌落一致。判断R2A琼脂培育基的合用性检查切合规定。可用于本企业纯化水微生物限度检查实验。校订因子(修正系数)校订因子=1/回收率第9页共12页批号:产品试验组的微生物生长检查记录：菌种名称产品试验组计数结果（cfu/皿）均匀值铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌菌液组的微生物生长检查记录菌种名称菌液组计数结果（cfu/皿）均匀值铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌供试品比较组的微生物生长检查记录供试品供试品比较组计数结果（cfu/皿）均匀值12测试人/测试日期：复核人/复核日期：第10页共12页批号:产品试验组的微生物生长检查记录：菌种名称产品试验组计数结果（cfu/皿）均匀值铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌菌液组的微生物生长检查记录菌种名称菌液组计数结果（cfu/皿）均匀值铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌供试品比较组的微生物生长检查记录供试品供试品比较组计数结果（cfu/皿）均匀值12测试人/测试日期：复核人/复核日期：第11页共12页批号:产品试验组的微生