动物细胞融合与单体克隆抗体　高中生物人教选修　现代生物科技专题

动物细胞融合与单体克隆抗体高中生物人教选修现代生物科技专题第1页/共16页考纲对该知识点的要求:Ⅱ教学目标:

举例说出动物细胞融合与单克隆抗体的原理和应用重点:单克隆抗体的制备和应用难点:单克隆抗体的制备过程

理解所列知识和其他相关知识之间的联系和区别,并能在较复杂的试题情境中综合运用其进行分析、判断、推理和评价。第2页/共16页动

物

细

胞

融

合第3页/共16页一、动物细胞融合1、概念：2、原理：3、方法：4、细胞融合完成的标志：6、应用：5、意义：特别是利用杂交瘤技术制备单克隆抗体是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。生物膜的流动性。聚乙二醇、灭活的病毒、电激等。细胞核融合成一个核.突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段；第4页/共16页二、单克隆抗体B淋巴细胞与抗体什么是抗体？※．B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体※．动物在免疫反应过程中,体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。※．每一个B淋巴细胞只能产生一种抗体.

抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原结合发挥特异性免疫功能的球蛋白。第5页/共16页1.单克隆抗体制备过程诱导其融合的方法有哪些？融合后培养液中有几种细胞杂交瘤细胞有何特点?注射抗原的目的是什么提取大量单克隆抗体的场所有哪些?第6页/共16页

整个制备过程为何要经过两个阶段的筛选？第一阶段：用特定的选择性培养基筛选出多种杂交瘤细胞第二阶段：获得足够数量的能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞第7页/共16页第一步：从一只小鼠体内提取T淋巴细胞，然后与骨髓瘤细胞诱导融合。第二步：再用普通培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死去。第三步：对上述经选择性培养的杂交瘤细胞直接在体外条件下做大规模培养，这样从细胞培养液中就可以提出破伤风杆菌单克隆抗体。实验评价1、已注入过灭活破伤风杆菌的小鼠2、B淋巴细胞3、选择培养基4、必须经过专一抗体阳性检验下面是某同学根据单克隆抗体技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。指出不足之处。第8页/共16页2、单克隆抗体的概念

由单个杂交瘤细胞通过无性繁殖(也就是通过克隆)形成细胞群，由这一细胞群所产生的化学性质单一（纯度高）、特异性强的抗体称为单克隆抗体。3、主要优点：特异性强、灵敏度高，并可能大量制备第9页/共16页4.单克隆抗体的应用：（１）.作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与抗原发生特异性结合（2）.用于运载药物：制成“生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗优点：准确、高效、简易、快速优点:疗效高、毒副作用小第10页/共16页

植物体细胞杂交单克隆抗体的制备(动物细胞融合)理论基础(原理)融合前处理促融方法植物体细胞杂交与单克隆抗体的制备的比较生物膜的流动性、细胞的全能性生物膜的流动性、细胞增殖酶解法去除细胞壁(纤维素酶、果胶酶)注射特定抗原,免疫处理正常小鼠(1)物理法：离心、振动、电激等(2)化学法：聚乙二醇(PEG)(1)物理、化学法：与植物细胞融合相同

(2)生物法：灭活的病毒第11页/共16页过程第一步第二步第三步第四步原生质体的制备(酶解法)正常小鼠免疫处理原生质体的融合(物、化法)动物细胞的融合(物、化、生法)杂种细胞的筛选和培养杂交瘤细胞的筛选与培养杂种植株的诱导与鉴定单克隆抗体的提纯第12页/共16页意义和用途克服远缘杂交不亲和的障碍,大大扩展杂交的亲本组合范围.(1)制备单克隆抗体(2)诊断试剂、治疗疾病与运载药物。例如:单抗诊断盒、“生物导弹”治疗癌症第13页/共16页

单纯疱疹病毒I型(HSV-I)可引起水泡性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出抗HSV-1的单克隆抗体可快速检测HSV-1。

回答下列问题：

(1)在制备抗HSV-I的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化的HSV-1蛋白，一段时间后，若小鼠血清中抗____

的抗体检测呈阳性，说明小鼠体内产生了____

反应，再从小鼠的____中获取B淋巴细胞。将该B淋巴细胞与小鼠的____

细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞，该细胞具有的特点是

。

(2)若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体，可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的____中使其增殖，再从____中提取、纯化获得。

(3)通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种HSV-I蛋白，其原因是该抗体具有____

和____

等特性。

HSV—1蛋白