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实验三丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用第1页/共14页实验三

丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用第2页/共14页一实验目的（ExperimentalObjectives）：

1．掌握竞争性抑制作用的概念和特点。

2．了解影响酶活性的其它因素。

3．分析实验现象。

第3页/共14页

二、实验原理(ExperimentalPrinciples)：

影响酶活性的因素：

温度

pH值激活剂抑制剂

第4页/共14页对酶活性的抑制作用分类

不可逆性抑制作用竞争性抑制作用

反竞争性抑制作用可逆性抑制作用非竞争行抑制作用第5页/共14页竞争性抑制作用

抑制剂(I)与底物(S)的结构相似，能与底物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶底物复合物的形成，使酶的活性降低。这种抑制作用称为竞争性抑制作用。反应模式+IEIE+SE+PES[S]>>[I]：高浓度的底物可解除抑制第6页/共14页竞争性抑制作用特点1、I结构常与S结构类似2、I/S与酶的结合部位相同:酶的活性中心3、[S]↑可以降低甚至消除抑制作用4、(表观）Km值增大，Vm值不变抑制剂↑

1/V

1/[S]

第7页/共14页无

氧丙二酸与琥珀酸竞争琥珀酸脱氢酶琥珀酸琥珀酸脱氢酶FADFADH2延胡索酸甲烯蓝（MB）甲烯白（MBH2）+FAD第8页/共14页三、实验材料、主要仪器和试剂（Equipments,MaterialsandAgents）

（一）主要仪器：离心机、恒温水箱。（二）主要试剂：1．0.2mol/L琥珀酸2．0.02mol/L琥珀酸3．0.2mol/L丙二酸4．0.02mol/L丙二酸上述四中溶液调节pH值为7.4。5．0.02%甲烯蓝6．1/15mol/L的Na2HPO4第9页/共14页四、操作步骤（OperatingProcedure）

1酶的提取液的制备：将兔子处死，取出肝脏，切成碎片后，放入乳钵中，每组取8g左右，加入1/15mol/L的Na2HPO4溶液5ml研成糊状后，再加入5ml1/15mol/L的Na2HPO4溶液，混匀后，倒入离心管中，2000转/分钟离心4分钟，取上清液转入其它试管备用。第10页/共14页2、取试管5支，按照下列表格操作：

第11页/共14页

3、各管混匀后，沿试管的内壁加入石蜡油（隔绝空气），放置到37℃水浴中保温，观察各管甲烯蓝的褪色情况，并记录褪色的所需要的时间，解释其现象。

第12页/共14页五、结果与分析：（ResultsandAnalysis）根据实验的现象，观察得到的结果，并解释其相关的实验现象。为什么滴石蜡油？六、思考题：(

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