实验九大肠杆菌

实验九大肠杆菌第1页/共26页实验九

大肠杆菌第2页/共26页第3页/共26页第4页/共26页第5页/共26页大肠杆菌：是引起家畜、家禽大肠杆菌病的病原。可导致家畜、家禽死亡；大肠杆菌是条件致病菌。第6页/共26页心包炎、肝周炎第7页/共26页第8页/共26页第9页/共26页实验目的：

1、学习大肠杆菌与沙门氏菌常规微生物学诊断方法。

2、了解大肠杆菌与沙门氏菌的形态与染色特性。

3、熟悉大肠杆菌与沙门氏菌的主要培养特性。第10页/共26页

大肠杆菌与沙门氏菌的常规

实验室诊断可按阶段划分第11页/共26页阶段划分（1—4阶段）第一阶段：增菌、直接分离培养第二阶段：纯培养、识别菌落、三糖铁接种。第三阶段：生化鉴定（IMViC、H2S、硝酸盐还原、运动力、五种糖）第四阶段：血清学鉴定。第12页/共26页病料增菌（亚硒酸盐汤等）37℃、18-24h直接划线分离（麦康凯、SS琼脂和EMB培养基）37℃、18-24h选可疑菌落，移植到以下培养基营养琼脂斜面三糖铁琼脂37℃、18-24h纯种检验、革兰氏染色镜检生化反应血清学鉴定沙门氏菌、大肠杆菌的一般诊断程序图第13页/共26页病料的采集包装、运送内脏、淋巴结小家畜、家禽或胎儿液态材料病毒材料50%甘油磷酸盐缓冲液第14页/共26页【动物尸体剖解的注意事项】怀疑死于炭疽的动物严禁尸体剖解。有针对性的采集病料。作好个人的防护和环境消毒工作。盛装病料的容器要求无菌。无菌操作。病料必须注明名称。必须低温保存,及早送检。动物尸体必须妥善处理(深埋、焚烧)。第15页/共26页SS平板－分离肠道病原菌的强选择培养基成分和作用：1、基础培养基：提供氮源和碳源2、胆盐、枸橼酸钠、煌绿：可抑制肠道非致病菌的生长，而对肠道致病菌抑制作用弱。3、乳糖，中性红（pH6.8-8.0，红→橙黄）：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质→菌落淡黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色

第16页/共26页麦康凯培养基—具中等强度选择性，抑菌力

略强，少数阴性菌不生长。

1、利用胆盐、龙胆紫来抑制革兰阳性细菌的生

长，而对伤寒等沙门菌有促进生长的作用．

2、利用乳糖发酵，中性红的颜色可把分解乳和

不分解乳糖的细菌区别开．

沙门菌及志贺菌呈无色菌落，

大肠埃希菌呈桃红色菌落．第17页/共26页EMB（EosinMethylBlue)平板－分离肠道病原菌的弱选择培养基

病原菌：透明，无色

非致病菌：紫黑色

第18页/共26页解剖病死鸭本次实验操作步骤：心脏、肝脏等脏器的分离接种（SS平板、三糖铁琼脂）组织触片（血片、肝片等）、吉姆萨染色、镜检37℃、18-24h观察、记录结果出具实验报告第19页/共26页姬姆萨染色方法：

1、触片、干燥。用甲醇固定3-5分钟。

2、将固定的触片浸于盛有稀释液的染色缸中（姬姆萨原液10滴加于10毫升中性或弱碱性蒸馏水中即可），染色30-60分钟，或过夜。

3、水洗、干燥。

4、镜检：细菌呈蓝黑色，组织、细胞等呈其他色。第20页/共26页第21页/共26页动物尸体剖解顺序观察体表皮肤消毒切开颈腹部皮肤剥皮观察皮下病变开腹腔观察内脏病变开胸腔观察病变开胃肠观察病变

第22页/共26页肠道菌实验室诊断包含的微生物

实验技术：无菌操作技术显微镜使用技术培养基制备技术细菌分离纯化技术细菌染色技术微生物的消毒灭菌技术动物实验技术第23页/共26页作业：

1、鸭大肠杆菌病的实验室诊断意义、步骤。

2、绘出油镜下组织触片的大肠杆菌形态图。第24页/