实验六体外抑菌实验定

实验六体外抑菌实验定第1页/共18页动物机能学实验2第2页/共18页实验内容实验一影响药物作用的因素实验二药物代谢动力学实验实验三处方与药物的配伍禁忌实验四中毒与解救试验实验五药物对离体肠的影响实验六抗微生物药物的体外抑菌实验实验七生物碱的提取及其药敏实验实验八药物对离体心脏的影响第3页/共18页实验五、抗菌药物的体外抑菌实验

【实验目的】

掌握药敏试验的方法，了解药物对常见菌的作用。意义：体外抗菌试验对临床用药具有参考价值。鉴定新药是否具有抗菌活性。下一张

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第4页/共18页耐药性抗菌作用防治作用与不良反应药动学过程抗病力致病力【实验原理】下一张

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第5页/共18页【基本原理】

抗菌活性：是指抗菌药抑制或杀灭病原微生物的能力。两种测定方法：体外与体内（化学治疗实验）；评价指标：

（1）最低抑菌浓度（MIC）：

能够抑制培养基中细菌生长的最低浓度。

（2）最低杀菌浓度（MBC）：能够杀灭培养基中细菌的最低浓度。下一张

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第6页/共18页【试剂与器材】

细菌菌液（如金黄色葡萄球菌、巴氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏杆菌）、药液（青霉素、链霉素、磺胺嘧啶钠、四环素）、碘酒、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、氢氧化钠、高压灭菌器、小试管、试管架、吸管、平皿等。

药敏试纸的准备：青霉素1.6万u/ml、链霉素1万u/ml、1%磺氨嘧啶钠、四环素5万μ/ml256μ/ml青霉素溶液：下一张

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第7页/共18页【实验步骤】一、纸片法

以灭菌小棉签取金黄色葡萄球菌液（每ml约含3亿个细菌），注意不宜蘸取过多，以刚浸湿整个棉签为度，轻轻地从四个不同方向平行交叉划线，使菌液均匀涂布于整个琼脂平板上。同样方法，也可制作大肠杆菌平板备用。

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第8页/共18页二、纸片法

取已经制备好的4种药敏片：青霉素1.6万u/ml、链霉素1万u/ml、1%磺氨嘧啶钠、四环素5万μ/ml，放置在已接种细菌的琼脂平板表面的不同区域。为了位置间隔准确，最好事先在平皿底用蜡笔作上记号。

将培养皿置37℃培养24h，观察纸片周围有无抑菌环，并测量抑菌圈的直径，比较各药的抗菌效力。样例如下图：下一张

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第9页/共18页下一张

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第10页/共18页细菌青霉素（1.6万u/ml）链霉素（1.0万u/ml）磺氨嘧啶钠(1%)四环素(５.0万u/ml%)金葡菌巴氏杆菌

实验结果记录：抑菌直径（mm）下一张

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药物沙门氏杆菌大肠杆菌第11页/共18页二、试管二倍稀释法

取灭菌小试管10支，按照1至10编号，排列于试管架上。按照无菌操作，从第一管到第10管，分别加入牛肉膏汤1ml。用吸管吸取256μ/ml的青霉素溶液1ml放入第一管，并反复吹匀；接着从第一管吸出1ml放入第二管同样吹匀后吸出1ml放入第三管，依次逐管进行稀释到第８管，第10管不加青霉素液，作细菌对照组，第９管只加药物，不加菌液，作为药物对照组。

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第12页/共18页0.500.50.50.50.50.50.50.50.5葡萄球菌液（ml）0弃111111111青霉素（ml）1111111111牛肉膏汤（ml）10987654321

试管号下一张

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第13页/共18页1-8，10各加入培养18h并用牛肉膏汤稀释至5×107～108cfu/ml的金黄色葡萄球菌菌液0.5ml。放入37℃培养箱内培养24h后，取出观察细菌生长情况。以能抑制细菌生长的最小浓度为青霉素对该细菌的最低抑制浓度（MIC）。最低杀菌浓度（MBC）结果记录于下表：下一张

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第14页/共18页

管号12345678910稀释倍数11/21/41/81/161/321/641/1281/2560稀释浓度(u/ml)12864321684210.5－金色葡萄球菌

记录实验结果下一张

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第15页/共18页【注意事项】1.接种细菌时要在无菌条件下均匀涂抹；用过的棉签火焰烧灼后丢弃。2.用试管二倍稀释法测MIC值，稀释时注意稀释的顺序；每次移液前注意清洗吸管。3.药敏片之间要间隔适当距离，以免抑菌圈出现交叉。4.四人一组，纸片法每人一个平皿，作四种药物对一种菌的作用，同组每人所接菌种不同，平皿上做好记号。结果记录时将本组结果综合。

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