林31选修3222动物细胞工程课件

克隆羊“多利”动物细胞工程2.2动物细胞培养动物细胞融合单克隆抗体技术细胞核移植动物细胞工程常用技术其它动物细胞工程的基础怎样进行动物细胞的培养？（P44-50阅读）（1）动物细胞培养概念？（2）动物细胞培养的原理？（3）为什么选用幼龄动物胚胎或其组织、器官做动物细胞培养材料？（4）怎样将组织细胞分散成单个细胞？（5）培养的细胞为何贴壁生长？（6）何为接触性抑制？（7）如何界定原代培养和传代培养？（8）动物细胞培养能否像植物组织细胞培养那样，最终培养成生物个体？3.培养过程：胶原蛋白酶（特点：细胞贴壁生长成单层细胞。有接触抑制现象）原代培养人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。会损伤细胞吗？胃蛋白酶可以吗？如：幼龄动物胚胎或组织胶原蛋白酶（特点：细胞贴壁生长成单层细胞。有接触抑制现象）原代培养传代培养贴满壁的细胞用胰蛋白酶处理,分瓶继续培养，让细胞继续增值的过程。3.培养过程：如：幼龄动物胚胎或组织细胞悬浮液10代细胞50代细胞无限传代--------------传代培养-------------------细胞株细胞系正常的二倍体核型遗传物质改变，不死，不接触抑制遗传物质一般未变分瓶----原代培养----保持可能保持改变2.条件(1)无菌、无毒：对_____________________无菌处理，添加_______，定期更换培养液以清除代谢产物。(2)营养：除正常的有机和无机营养外，加入____________。(3)适宜的温度和pH：温度为_____________(哺乳动物)，pH为__________。(4)气体环境：含____的空气加_______的混合气体。培养液和所有培养用具抗生素血清、血浆36.5±0.5℃7.2～7.495%5%CO2（１）大规模生产有重要价值的蛋白质生物制品（疫苗、干扰素、单克隆抗体等）。（5）解决为大面积烧伤病人移植皮肤问题。（利用贴壁生长和接触抑制原理）（３）检测有关物质毒性(实验设计，镜检看细胞或染色体变异多少)。（４）细胞的生理、药理、病理研究

（如用于筛选抗癌药物等，为治疗和预防癌症及其他疾病提供依据）（2）为基因工程技术提供受体细胞.3.应用：生物制品的生产、检测_________、医学研究。有毒物质二、动物体细胞核移植技术和克隆动物1.动物核移植概念是将动物的一个细胞的_______移入一个_______________中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新胚胎最终发育为__________。如克隆动物细胞核去核的卵母细胞动物个体2.原理细胞核的全能性克隆个体：多利克隆细胞：细胞培养克隆分子：PCR体细胞核移植过程流程图：高产奶牛的克隆过程受体细胞的遗传物质尽量去掉或者破坏体积大，易操作，含有促使细胞核全能性表达的物质和营养条件10代以内2.动物细胞核移植过程供体体细胞细胞培养供体细胞核重组细胞卵巢卵母细胞去核无核卵母细胞胚胎代孕母体生出与供体遗传物质基本相同的个体注人减Ⅱ中期发育胚胎移植细胞融合囊胚或桑椹胚技术手段？两大阶段：核移植、胚胎移植动物细胞培养、核移植、早期胚胎培养、胚胎移植等3.应用(1)加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育。(2)保护_________。(3)生产医用蛋白:转基因，生物反应器(4)作为异种移植的_____。(5)用于组织器官的_____。【点拨】核移植过程中供体理论上是提供细胞核，但操作过程中可以把整个体细胞注入去核的卵母细胞中去，原因是体细胞体积相对较小，取核难度较大，另外细胞膜对核融合的障碍性较小。

濒危物种供体移植植物组织培养动物细胞培养核移植结果关键环节与外植体完全相同的个体相同分化程度的细胞群与供体基本相同的个体细胞的脱分化、再分化、分化细胞分化、细胞癌变核融合、细胞分化【高考警示钟】圈红字1.植物组织培养和动物细胞培养过程都存在细胞的培养过程，但植物细胞可以先分裂再分化，而动物细胞可以不分化只分裂。2.区分原代培养和传代培养的关键是是否分瓶培养。贴壁生长到一定程度需要用胰蛋白酶处理，然后再分瓶培养，原代培养结束，开始了传代培养。3.植物组织培养成的植株与提供外植体的植株完全相同，而动物细胞核移植形成的个体与供体大部分性状相同，也有部分性状与受体相同。三、动物细胞融合与单克隆抗体1.动物细胞融合(1)概念：指两个或多个动物细胞结合形成_________的过程。(2)融合方法：_____________、___________、电激等。(3)意义：突破了______________的局限,使_________成为可能，也为制造____________开辟了新途径。一个细胞聚乙二醇(PEG)灭活的病毒有性杂交方法远缘杂交单克隆抗体原理：细胞膜的流动性单克隆抗体的制备（补充）（灭活的仙台病毒，PEG）(可产生某种抗体)（第一次筛选：具双亲细胞遗传物质的杂交瘤细胞）细胞融合细胞培养提取(第二次筛选：能无限增值和产生抗体)(某种)2.单克隆抗体(1)制备(2)优点：特异性强、_________，可大量制备。(3)用途：作为_________；用于治疗疾病和_________。灵敏度高诊断试剂运载药物B淋巴细胞骨髓瘤细胞培养、筛选解释名字P208.圈红字：单克隆抗体的制备(1)取相应B淋巴细胞前必须先注射相应抗原，否则不能获得单克隆抗体。(2)细胞融合后需经二次筛选：①第一次：在特定的选择性培养基上，未融合的亲本细胞(B淋巴细胞和骨髓瘤细胞)和融合的具有同种核的细胞(BB融合细胞、瘤瘤融合细胞)都会死亡，只有融合的杂种细胞(杂交瘤细胞)才能生长。这种杂种细胞的特点是既能迅速大量繁殖，又能产生单一的特异性抗体。②第二次：经选择性培养的杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞(很多种杂交瘤细胞)，需经克隆化培养和抗体检测，经筛选后才可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。

动物细胞融合与单克隆抗体1.植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较植物体细胞杂交动物细胞融合原理过程细胞A、B原生质体A、B融合的原生质体杂种细胞杂种植株去壁融合植物组织培养细胞A、B杂交细胞多个相同杂交细胞融合有丝分裂细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞膜的流动性植物体