奥卡西平片的人体生物等效性研究

奥卡西平片的人体生物等效性研究摘要目的：评价国产与进口奥卡西平2种片剂的生物等效性。方法：18名健康男性受试者自身交叉单剂量口服国产或进口奥卡西平片300mg，以HPLC-UV法测定血浆中奥卡西平浓度，用3p97软件计算主要药动学参数，以方差分析与单双侧t检验进行统计分析。结果:2种片剂血浆中奥卡西平的t1/2分别为（15.21±4.04）和（14.51±3.06）h；tmax分别为（5.67±2.45）h，和（5.17±2.33）h；cmax分别为（0.50±0.13）µg·mL—1和（0.56±0.20）µg·mL—1；AUC（0～T）分别为（11.59±4.16）µg·h·mL—1和（12.47±4.66）µg·h·mL—1。国产奥卡西平片的相对生物利用度为(94.81±14.21)%。结论：2种片剂在健康人体内具有生物等效性。关键词奥卡西平；药动学；生物等效性；HPLC

BioequivalenceofoxcarbazepinetabletsinhealthyvolunteersABSTRACTOBJECTIVE:Tostudythebioequivalenceoftwooxcarbazepintablets.METHODS:Asingleoraldoseof300mgoxcarbazepinwasgivento18healthymalevolunteersaccordingtoarandomizedcrossoverdesign.PlasmaconcentrationsofoxcarbazepinweredetectedbyHPLC-UV.Thepharmacokineticparametersofoxcarbazepinwerecalculatedwith3p97software.Thebioequivalencewascalculatedbyanalysisofvarianceandtwoonesidet-teat.RESULTS:Thepharmacokineticparameters[KEYWORDS]oxcarbazepin；pharmacokinetics；bioequivalence；HPLC-UV

奥卡西平（oxcarbazepin）是卡马西平的衍生物。自2000年1月获得美国食品药品管理局批准上市以来，因患者耐受性好，对肝药酶诱导及自身诱导作用小，与其它药物之间的相互作用较少，已在50多个国家应用于癫痫的治疗，取得了良好的治疗效果[1～3]。为评价山东诚创医药技术开发有限公司研制的奥卡西平片在健康男性受试者的药动学特征及与市售诺华（瑞士NovatrisPharmaStainAG）生产的奥卡西平片（曲莱片）是否等效，本文建立了可靠的血药浓度测定方法，并对国产片和进口片的药动学及生物等效性进行了研究。1.材料1.1仪器高效液相色谱仪，包括LC-10泵系统、SPD-10A型可调波长紫外检测器、C-R7Aeplus积分仪（日本岛津公司）。Sartorius天枰(德国)；无油真空泵(奥特赛恩斯仪器有限公司)；VXH-3微型旋涡混合器(上海跃进医疗器械厂)；电热恒温水浴锅(上海仪表(集团)供销公司)；B160型医用低速离心机(安新县白洋离心机厂)；超声波清洗器(奥特赛恩斯仪器有限公司)。1.2试药1.2.1受试药物：山东诚创医药技术开发有限公司研制的奥卡西平片（简称：国产片），300mg/片，批号030420，含量99.6%。1.2.2标准参比制剂：瑞士NovatrisPharmaStainAG（诺华）生产的奥卡西平片(曲莱片，简称进口片)，300mg/片，批号SB1100。有效期至2006年08月；进口药品注册证号：H20030293。1.2.3奥卡西平（OCBZ）对照品：山东诚创医药技术开发有限公司提供，批号：030301，纯度99.6％。1.2.4内标物：地西泮（简称DZP），由湖北制药厂生产。1.2.5其它：甲醇、醋酸胺、磷酸、三乙胺均为分析纯；二氯甲烷为色谱纯；三蒸水。2.方法2.1色普条件采用色谱柱HYPERSILC185um粒径，200×5.0mmID，柱温：25℃；流动相为甲醇—醋酸胺溶液（0.1mol/L，用H3PO4调pH至4.8左右）—三乙胺（V/V）为60:40:0.1；流速采用流量时间程序（0～4.2min，0.8mL·min－1；4.2～10min，1.5mL·min－1）；固定进样环50L；紫外检测波长：2578nm；内标为DZP。2.2标准液的配制精密称取OCBZ44.9mg，用适量甲醇溶解，置50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，即为898g·mL-1的OCBZ标准储备液。使用时用甲醇稀释为44.9g·mL-1的工作浓度。精密称取DZP标准对照品40.5mg，用适量甲醇溶解，置50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，即为810g·mL-1的DZP标准储备液。使用时用甲醇稀释为8.1g·mL-1的工作浓度。2.3受试者18名男性健康志愿者，汉族，平均年龄（22.6±1.46）岁；平均体重（59.6±5.24）kg；平均身高（172.6±4.54）cm。试验前所有受试者经肝功、肾功、血压、心电图检查均正常。根据国家药品监督管理局新药临床研究批件（批件号为2003L00990）,经院伦理委员会批准，18名健康男性受试者在知情情况下填写知情同意书。2.4给药方法及血样采集采用随机交叉试验设计，单剂量口服给药。将18名受试者随机分为A，B2组，每组9名，在I、II阶段分别交叉服药，交叉服药前经2wk清洗期。试验前禁食12h后，于次日晨8时空腹吞服国产片或进口片300mg(200ml温开水服药)。服药当日统一进标准餐(服药4h后进早餐)。受试期间禁止剧烈活动、吸烟、饮酒及含酒精、咖啡因类饮料，试验期间禁止使用一切非试验药物，并由医护人员进行健康监护。采集服药后0.5、0.75、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0、12.0、24.0、36.0、48.0h静脉血3.0mL，分离血浆，低温保存（-20℃），及时测定。间隔22.5样品处理取受试者血浆1.0mL，加内标50L（8.1µg·mL-1），加0.2mol/L碳酸钠0.2mL，加二氯甲烷4mL，旋摇1min，3000rpm3min，取有机层置50℃水浴中用氮气吹干，100L流动相复溶，进样30～50L。2.6统计方法学采用3p97软件，计算各个体的药动学参数，cmax，tmax以实测值计算，AUC按梯形面积法计算。对2种片剂的AUC、cmax、tmax进行方差分析，双单侧t检验，（1-2）置信区间法进行统计分析，判断生物等效性。3.结果3.1方法的专属性配制含OCBZ和DZP的对照品溶液直接进样，得色谱图A。分别取空白血浆，1份除不加OCBZ和DZP外，其余按“样品处理”项处理，得空白血浆色谱图B。分别取OCBZ溶液工作浓度加入空白血浆中，按“样品处理”项处理，得色谱图C。取受试者单剂口服300mg受试制剂2h后血浆按“样品处理”项处理得色谱图D。在本实验所选定的色谱条件下，血浆中OCBZ与内标DZP及血浆中内源性杂峰分离良好，见图1。t/mint/mint/mint/minA.对照品溶液B.空白血浆C.空白血浆+OCBZ+DZPC.2h样品图1OCBZ的高效液相色谱图A.对照品溶液图B.空白血浆图C.空白血浆+OCBZ+DZP图D.志愿者服药300mg后2h血浆样品图Fig1ChromatogramsofoxcarbazepinA.referencesubstandsolutionB.blankplasmaC.blankplasma+oxcarbazepin+DZPD.andvolunteerplasma2hafteroraladministrationof300mgoxcarbazepin1.OCBZ2.DZP(internalstandard)3.2标准曲线与最低定量浓度在空白血浆中分别添加OCBZ2.245、1.1225、0.5612、0.2806、0.1403、0.0702、0.0351µg·mL-1，按“样品处理”项下进行处理和测定,以OCBZ面积/DZP面积比Y与OCBZ浓度X用最小二乘法进行线性回归,得回归方程Y=2.4628X-0.1003（r=0.9994；n=5）。表明OCBZ在0.0351~2.245µg·mL-1范围内Y与X线性关系良好。最低定量浓度为0.0351µg·mL-1（RSD=10.19%；n=5）[4]。3.3回收率与精密度配制浓度分别为0.0702、0.2806、1.1225µg·mL—1的OCBZ的血浆样品，按“样品处理”方法操作，每一浓度平行操作5份，有测得量与实际加入量比值计算方法回收率，并计算日内精密度。同法，配制配制浓度分别为0.0702、0.2806、1.1225µg·mL—1的OCBZ的血浆样品，连续5d测定3种浓度，计算日间精密度。3个水平血浆中OCBZ方法回收率为(90.72~115.10)%；日内RSD分别为5.57%、3.50%、3.85%，日间RSD分别为10.32%、5.88%、7.65%。3.4稳定性考察将含药血浆反复冷冻(-20℃)、融化，按“样品处理”项处理测定,5日内测定5次，结果表明血浆样品5日内反复冻融测定稳定性良好(（0.14±0.0084）µg·mL—1，RSD=6.003.5平均血药浓度-时曲线根据测定结果得2种片剂在18名受试者血浆中平均血药浓度-时间曲线，见图2。C/µg·mL—1t/ht/h图218健康受试者单剂口服300mg奥卡西平国产片或进口片后的平均药-时曲线Fig2Meanplasmaconcentration-timecurvesofthetwooxcarbazepintabletsafterasingleoraladministration300mgin18healthyhumanvolunteers.3.6药动学参数及生物利用度采用3p97计算机软件（中国数学药理学会），计算各个体的药动学参数，cmax、tmax以实测值计算，AUC按梯形面积法计算。取值范围0～th。采用各受试者的国产片与进口片的AUC(0～t)分别计算相对生物利用度（F），有关药代动力学参数见表1。表12种奥卡西平片在人体内的药动学参数比较（n=18）----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------参数国产片进口片----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------t1/2/h15.21±4.0414.51±3.06tmax/h*5.67±2.455.17±2.33cmax/µg·mL—1*0.50±0.130.56±0.20AUC(0-∞)/µg·h·mL—113.46±4.3014.33±4.92AUC(0-T)/µg·h·mL—111.59±4.1612.47±4.66F/%94.81±14.21*实测值3.7生物等效性评价用双单侧t检验分析2种制剂的cmax和AUC(0-t)，t1、t2均有显著差异（P〈0.05〉，1-2（=0.05）置信区间分别为73.18%～119.15%和85.76～102.66%，表明两种制剂的cmax和AUC(0-T)均生物等效（=0.05）。tmax用非参数统计分析结果（Wilcoxon法）表明两制剂间差异无显著性（P>0.05）。以上结果表明两制剂生物等效。4.讨论本研究采用HPLC-UV法测定人血浆中OCBZ浓度，以DZP为内标，其方法回收率在90%以上。HPLC-UV法测定时流动相以甲醇—醋酸胺溶液（60:40）为基础，添加适量的三乙胺有利于消除主峰拖尾，使峰形良好；方法学研究亦表明其灵敏度、重现性均较好，能满足临床药动学及生物等效性研究的要求。18名健康男性受试者单剂空腹口服本品300mg后，血浆中2种片剂平均浓度与变化趋势相似，属一室药动学模型；分别于（5.67±2.45）h和（5.17±2.33）h达到峰值（0.50±0.13）µg·mL—1和（0.56±0.20）µg·mL—1；平均消除半衰期分别为（15.21±4.04）h和（14.51±3.06）h，在体内滞留时间较长，与文献报道相近[5～6]。由图2和表1亦可见，两种奥卡西平片在人体内吸收、分布、消除较为接近，国产片的相对生物利用度为（94.81±14.21）%，本试验为国产奥卡西平片的临床应用提供了依据。参考文献[1]喻东山.奥卡西平临床应用的安全性[J].药物不良反应杂志，2007，9（2）:105～107.[2]陈巧彬，陈琅，姜迪等.奥卡西平治疗癫84例[J].实用儿科临床杂志，2012,27（4）:291～292.[3]陆志城,余清声.奥卡西平的药代动力学及其立体选择性[J].中国临床药学杂志,2003,19（2）:134～137.[4]曾经泽.生物药物分析.北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1998.P214.[5]杜蓉，陈娟.国产奥卡西平分散片的人体生物等效性研究[J].中国药房，2010，21（18）:1672～1674.[6]张玲，桂玲，刘宇.国产奥卡西平片的人体生物等效性考察[J].中国药师，2010，13（1）:1586～1588.

宝贝计划专卖店创业计划书企业名称：__宝贝计划婴儿用品专卖店创业者姓名：_________________________________________日期：__________________________________________通信地址：_________________________________________邮政编码：__________________________________________电话：____________________________________________传真：__________________________________________电子邮件：__________________________________________目录一、项目介绍------------------------------------3二、市场分析------------------------------------3三、成本预算------------------------------------3四、盈利状况------------------------------------4五、市场风险预测----------------------------------4六、人员机构配置----------------------------------5七、市场营销策略----------------------------------5宝贝计划婴儿用品专卖店计划书项目介绍：项目名称：宝贝计划婴儿用品专卖店经营范围：以出租和出售婴幼儿童车、童床、儿童玩具、婴儿日常用品和孕前孕后的孕妇培训为主，兼做婴儿游泳馆和家政服务信息等。项目投资：10—14万元回收成本期限：15个月（预计）样板店地址：桂林市兴安县（具体地址待定）项目概况：先组建宝贝计划婴儿用品总店，在此基础上，创办一个以片为依托的婴儿用品连锁店。企业宗旨：一切为了宝贝计划。二、市场分析：(一)市场需求分析：1、玩具是孩子的天使，孩子是父母的心肝宝贝。父母对自己孩子的投入是心甘情愿的，但由于各种原因，又不能完全满足孩子对玩具的占有欲望。同时，由于孩子的天性，对玩具喜新厌旧，一个几百元的玩具玩几天就不感兴趣了。而市场上层出不穷的高价玩具，都是孩子永不满足的需求，这样促使了儿童玩具出租行业的萌芽和发展。比如婴幼儿大都需要童车，低档童车价格大约在60—100元，中档童车价格大约在150～300元之间，高档一点的在500元以上，而一部质量较好的童车起码可以用三五年，家庭购买的童车平均使用期为一年左右，不买童车不行，买吧，用完后又很难处理，而且又浪费，所以本店的特色是——既可以出租而可以出售的方法。相似的用品不仅仅局限于童车童床，还有学步车等等。如果开一间婴幼儿童童车童床出租出售店，可以给消费一般的家庭带来实惠，生意肯定兴隆。2、孕前孕后培训也是一个新兴的行业，据市场调查，在此之前没有任何商家以店的形式对准爸爸和准妈妈进行。因为现在的准妈妈准爸爸无法科学的照顾自己的孩子和孕妇，通过培训后，使其能够正确的操作。(二)目标群体分析：儿童车、童床、婴儿日常用品0～2岁的婴儿。由于出售的儿童车、童床、婴儿日常用品品种繁多，档次繁多，适合于各种不同层次的家庭孩子。选择在县级以上城市开店，可以说明该城市的人均家庭状况一般在小康水平或小康水平以上，对出租玩具的承受能力均没有任何问题。孕妇的孕前孕后培训主要是针对现在准妈妈准爸爸开设的课程，主要是产前的身体锻炼，饮食合理搭配及科学的锻炼；产后的小孩护理及营养搭配，常见的小孩注意事项等方面知识，让准妈妈准爸爸们科学的呵护自己的小孩。(三)竞争对手的分析：目前兴安县出售出租婴幼儿童车、童床、儿童玩具、婴儿日常用品为一体的公司或店铺寥寥无几，现在的店一本是单一性的，不是集中为一体的，而且这样做也是一个新兴的行业，我们应该有一种先人为主的优势，特别由总店然后发展成一片区为分店的一家连锁店。三、成本预算(一)样板店的成本预算15000元样板店启动资金大约在7万元左右，具体安排：(1)办理工商、税务登记等费用：200元(2)店铺租金及押金：9000元(3)装修：20000元(4)工资(1个月)：8000元(5)购买产品及维修保养费用：50000元(6)咨询顾问及资料费：5000元(7)公司其他开支：10000元(水费、电费、管理费、卫生费及流动资金得等)总计：12000元左右（估计）注：总预算里面还包括员工的首期上岗培训费用。四、盈利状况(一)、连锁总店业务收入来源：A、出售婴幼儿童车、童床、儿童玩具、婴儿日常用品。现在很大部分的家庭里面只有一个小孩，不管是男孩还是女孩，都是家长们的掌上明珠，家长们都舍得为自己的子女花钱，针对这一现象，本店采取了出售其婴幼儿童车、童床、儿童玩具、婴儿日常用品，来满足每一个小孩家庭的需求，相对这样出租婴幼儿童车、童床、儿童玩具来说，这样显得奢侈，但是很多家长为了孩子，还是舍得花钱。B、出租婴幼儿童车、童床。现在很多家庭出生的小孩只有一个，如果购买一个童车或者童床势必会造成浪费，本店将为准妈妈们准备了童车童床的出租，这样相对来说，就要节省一点开支，这也是资源的合理利用。C、孕前孕后的孕妇培训。现在的准妈妈准爸爸对孕前的营养饮食搭配、孕前的护理和孕后的营养饮食搭配、小孩的照顾等各方面的培训，培训费是按每节课多少钱来计算，顾客如果使用会员卡，可享受月底结算和打折优惠的特权。D、婴儿游泳馆。婴儿游泳是国内兴起的一个行业，在国外非常常见。因为婴儿在游泳时，可以对其全身的肌肉关节韧带均得到运动，心理放松，神情喜悦，运动所带来的外周刺激反馈至大脑皮层，对脑神经的发育有着良好的作用。E、家政服务信息。本店与当地的家政信息公司进行合作，为各位需要家政服务的家庭提供家政信息服务，盈利在于与家政公司合作的提成。（二）、连锁店业务收入的次要来源：A、本里本店的会员卡是本店次要收入来源，会员卡有效期为1年，然后经过续费后，方可继续使用，会员卡办理卡费是20元，续费费是10元，本卡将采取实行实名制，实行一卡专用。B、赔偿金收入(因顾客归还玩具时，有些玩具可能会由于关键部位的断裂，重要配件的丢失损坏等原因，按照我们的赔偿比例表，按比例赔偿)。五、市场风险预测：(一)竞争者的出现，是本店主要的市场风险当一个项目被发现巨大市场空间时，必会引来竞争者，为了能让企业在市场中生存和壮大，因此在推出玩具出租加盟样板店时，要实行五个统一的管理模式(即统一形象设计，统一宣传资料，统一会员卡销售，统一营销管理，统一售后服务)建立自身的品牌。提高服务质量和准确掌握市场行情也是增强竞争力等办法。(二)玩具、童车、童床是对儿童的伤害最大，是本行业的最大风险所在。为了避免此类风险，可采取以下三种方法：(1)进货渠道严格把关，明确与进货商或厂家的责任关系。(2)向小孩和家长详细说明玩具的使用说明；(3)明确与被租方的责任关系。(三)对玩具损害程度的鉴定，是处理客户关系的一大风险必须从日常的经验和生产厂家，逐步完善玩具损害程度的鉴定标准，明细化与客户的责任关系。（四）、产品售后服务：产品售后服务是关键。本店将对购买和出租童车、童床的用户建立客户信息档案中心（信息档案中心将属于自愿原则，顾客有权不建立）。将定期派遣技术人员为顾客购买的产品进行定期检查或者接到客户的产品故障报告后派遣技术人员进行上门服务维修，保证其产品质量（质量保修解释：凡在本店购买或者出租的童车、童床，在购买2个月内，免费更换其配件，超过2个月后，免费维修，但收取材料费用，超过4个月，收取维修费和材料费）。六、人员机构配置职员及岗位职能(1)总店经理1名：负责整个店的管理及玩具的采购工作及后备人员；(2)店员5名：负责与顾客的各项工作，2人各兼出纳与会计；(3)玩具维