耐药结核病诊断新技术演示文稿

耐药结核病诊断新技术演示文稿现在是1页\一共有35页\编辑于星期日（优选）耐药结核病诊断新技术现在是2页\一共有35页\编辑于星期日全球范围内结核病疫情严重

患病率高：新发患者1040万/年，其中有120万（11%）HIV患者；

死亡率高：每年死亡人数达140万（13.46%），HIV/TB:死亡人数40万（33.33%）；

耐药率高：48万新发的MDR-TB病例和10万耐利福平结核病（RR-TB）病例；

接受MDR检测、报告和治疗的MDR-TB不足1/3，接受治疗的MDR-TB治愈成功率只有50%

2016年全球结核病报告现在是3页\一共有35页\编辑于星期日现在是4页\一共有35页\编辑于星期日2015年全球估计MDR-TB患者数现在是5页\一共有35页\编辑于星期日结核病快速及时诊断是结核病防控

重要因素现在是6页\一共有35页\编辑于星期日灵敏准确操作简便检测时间短闭管检测检测位点全面对新型耐药检测技术的要求现在是7页\一共有35页\编辑于星期日现在是8页\一共有35页\编辑于星期日基因芯片技术现在是9页\一共有35页\编辑于星期日结核病耐药与基因64-68%

rpsL基因突变70%embB基因突变70%65%耐药基因93%95%95%

rpoB基因突变利福平异烟肼50-70%

katG基因突变5-10%

inhA基因突变6-13%

ahpC基因启动子区域突变链霉素乙胺丁醇

多数研究报告提示：耐药的发生与结核杆菌的基因突变有关。总体上是基因一个或几个核苷酸突变（表现增加、缺失、替代），造成核苷酸编码错误致氨基酸错位排列，影响药物与靶位酶结合产生耐药现在是10页\一共有35页\编辑于星期日现在是11页\一共有35页\编辑于星期日基因芯片（原理）激光共焦扫描仪软件判读样品制备仪杂交仪

基因芯片方法是基于结核杆菌的利福平和异烟肼耐药性相关的rpoB/katG/inhA的基因位点发生突变，通过PCR扩增、和固定于尼龙膜上的寡核苷酸探针进行杂交、扫描，检测荧光信号的有无，判断特定位点的突变情况和结核菌耐药性。基因芯片仪和试剂获国家SFDA和欧盟CE认证12现在是12页\一共有35页\编辑于星期日基因芯片法现在是13页\一共有35页\编辑于星期日现在是14页\一共有35页\编辑于星期日利福平的耐药位点现在是15页\一共有35页\编辑于星期日MSM耻垢分枝杆菌MTC结核分枝杆菌复合群MTR次要分枝杆菌MIN胞内分枝杆菌MAV鸟分枝杆菌MGA胃分枝杆菌MKA堪萨斯分枝杆菌MSC瘰疠分枝杆菌MUA母牛分枝杆菌MCH龟分枝杆菌龟亚种MAB龟分枝杆菌脓肿亚种MSZ苏尔加分枝杆菌MMA海/溃疡分枝杆菌MXE蟾蜍分枝杆菌MDI迪氏分枝杆菌MFO偶发/猪分枝杆菌MGI浅黄分枝杆菌MSI猿猴分枝杆菌MTE土分枝杆菌MPH草分枝杆菌CC质控点MNO不产色分枝杆菌MGO戈登分枝杆菌同时鉴定MTC与21种NTM现在是16页\一共有35页\编辑于星期日非结核分枝杆菌现在是17页\一共有35页\编辑于星期日在国内4个省的4个地市级CDC进行了评估。现在是18页\一共有35页\编辑于星期日结核病和非结核的诊断现在是19页\一共有35页\编辑于星期日特点标本：菌株、涂阳痰标本时间：约8小时优点：高通量灵敏度、特异度高现在是20页\一共有35页\编辑于星期日国家结核病参比实验室推荐建议基因芯片可以用于:

可疑耐药结核病患者筛查,它有望代替利福平和异烟肼的传统药敏试验推荐理由:在我国获得注册证书；国内研究显示其敏感性和特异性较好；民族品牌数据显示在我国具有可行性,符合成本效果；可能使用层级:

地市和省级（医疗机构和疾病预防机构）现在是21页\一共有35页\编辑于星期日探针熔解曲线技术现在是22页\一共有35页\编辑于星期日工作原理

在一定环境下，DNA双链在其长度和序列一定时，Tm值也一定，当发生错配时，Tm值下降，下降的幅度与发生错配的碱基数目、类型和位置有关。ΔTm现在是23页\一共有35页\编辑于星期日96%利福平耐药突变发生在rpoB507-533共81bp区域内利福平耐药突变检测体系示意图根据靶序列熔点的变化，检测rpoB基因

是否含有突变，获得利福平耐药信息现在是24页\一共有35页\编辑于星期日根据不同的ΔTm值可以判断出ropB可能不同的碱基发生突变现在是25页\一共有35页\编辑于星期日现在是26页\一共有35页\编辑于星期日根据不同的ΔTm值可以判断出ropB可能不同的碱基发生突变现在是27页\一共有35页\编辑于星期日异烟肼耐药突变检测体系示意图通过检测katG315、inhA启动子和、ahpC启动子区、inhA94、密码子的突变与否确定样品对异烟肼的耐药性。现在是28页\一共有35页\编辑于星期日根据不同的ΔTm值可以判断出异烟肼不同的碱基序列发生突变现在是29页\一共有35页\编辑于星期日根据不同的ΔTm值可以判断出异烟肼不同的碱基序列发生突变现在是30页\一共有35页\编辑于星期日乙胺丁醇链霉素氟喹诺酮每个突变都表现出特有的谱线对应独特的熔点,软件可以自动地给出突变类型,即使发生不均一突变的情况,也可以分辨出来.现在是31页\一共有35页\编辑于星期日步骤二加入1-96个提取样本到检测管中步骤三集成多重PCR和结果自动报告步骤一自动提取1-24份样本操作流程总耗时约3小时，手工操作时间约15分钟现在是32页\一共有35页\编辑于星期日（一）DNA提取～40min高质量的样本DNA样本类型：痰液、灌洗液、培养菌株……快速高效，1小时内完成24份样本提取；灵活可控，单次运行可处理1～24份样本；高度均一，整个提取过程均由仪器自动完成，保证了提取样本的均一性。现在是33页\一共有35页\编辑于星期日（二）加入PCR反应管现在是34页\一共有35页\编辑于星期日（三）PCR过程和自动判读菌种Tm/℃FAMHEXROXCy5耻垢分枝杆菌83.0/73.0,80.0/牛分枝杆菌62.5,75.5/73.0,80.0/瘰疬分枝杆菌69.5/73.0,80.0/结核分枝杆菌62.5/73.0,80.0/龟分枝杆菌55.5/73.0,80.0/猿猴分枝杆菌/81.073.0,80.0/嗜血分枝杆菌/76.073.0,80.0/戈登分枝杆菌/71.073.0,80.0/堪萨斯分枝杆菌/66.573.0,80.0/脓肿分枝杆菌/58.073.0,80.0/偶然分枝杆菌//65.5,73.0,80.0/海/溃疡分枝杆菌//59.5,73.0,80.0/土地分枝杆菌//55.5,73.0,80.0/不产色分枝杆菌//50.5,73.0,80.0/苏加分枝杆菌/