血液学一般检验(绪论、第一章)

现在是1页\一共有80页\编辑于星期日1903年美国宾西法尼亚州立医院成立了第一个专门的临床检验实验室1931年，恩斯特·鲁斯卡通过研制电子显微镜，使生物学发生了一场革命。

1950年美国学者Levey和Jennings发表第一篇关于使用质控图的实验室室内质控，临床检验实验室的室内质控工作正式拉开序幕，该方法至今仍被各临床实验室所使用。国外医学检验学发展简史现在是2页\一共有80页\编辑于星期日19世纪70年代，德国学者Koch创造固体培养基，将细菌从环境或病人排泄物等标本中分离成单一菌落1959放射免疫分析技术及1975年单克隆抗体技术的创立均获得诺贝尔生物医学奖。

1985年美国PECetus公司人类遗传研究室的Mullis等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应技术国外医学检验学发展简史现在是3页\一共有80页\编辑于星期日新中国成立时，检验专业技术人员4000余人1979年9月成立了中华医学会检验分会，并在WHO的支持指导下，同年成立了卫生部临床检验中心国内医学检验学发展简史

现在是4页\一共有80页\编辑于星期日70年代我国参加了世界卫生组织的临床化学质量评价活动1991年我国卫生部部长令：首批淘汰三十五项检验项目

1990年后，一些高科技、分子生物学技术在检验医学方面应用迅速增多2000年《中华医学检验杂志》正式更名为《中华检验医学杂志》，检验医学作为一个学科名称正式确立。国内医学检验学发展简史现在是5页\一共有80页\编辑于星期日clinicallaboratorytechnologyorscience临床检验

通过实验室的各种检查方法，包括感官检查、理学检查、化学检查、显微镜检查以及自动化仪器检查等，对病人的血液、体液、分泌物和排泄物等标本进行检查、分析，以获得病原、病理变化及脏器功能状态等资料。现在是6页\一共有80页\编辑于星期日医院检验科临检室生化室免疫室血液室基因室微生物室病理室现在是7页\一共有80页\编辑于星期日从手工检测进行仪器自动化检测检验试剂批量化、专业化、多样化检验方法标准化实施了全面的质量管理和保证床旁检测（pointofcaretest,POCT）医学检验学的现状现在是8页\一共有80页\编辑于星期日临床检验基础的临床应用

1、为准确诊断、及时治疗提供依据

临床检验的结果是支持诊断、鉴别诊断、甚至确定诊断的主要依据例：anemia依据：血中红细胞和血红蛋白量减少leukemia依据：血象和骨髓象变化肾脏有实质性损伤依据尿液中出现蛋白、细胞、管型tumor？现在是9页\一共有80页\编辑于星期日2、为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据

在疾病过程中，血液、体液、分泌物和排泄物也会随之发生相应的变化3、为预防疾病提供资料

如血象和肿瘤细胞学的普查等临床检验的临床应用4、为科学研究提供医学检验数据现在是10页\一共有80页\编辑于星期日目视检查:

直接观察标本：颜色、透明度、性状，有无凝块或寄生虫理学检查:

液体的相对密度、血液比粘度、红细胞沉降率、红细胞比积等病理变化临床检验的一般方法（1）现在是11页\一共有80页\编辑于星期日化学检查:

定性和定量检测标本化学成分的病理变化显微镜检查:

观察有型成分的数量和形态自动化仪器检查:

电子技术、程序控制的发展临床检验的一般方法（2）现在是12页\一共有80页\编辑于星期日

理论联系实践实验技能和方法学评价检验结果参考值及临床意义检验工作者的医德学习临床检验的基本要求现在是13页\一共有80页\编辑于星期日thanks现在是14页\一共有80页\编辑于星期日现在是15页\一共有80页\编辑于星期日血液标本的采集现在是16页\一共有80页\编辑于星期日一、血液生理血液的组成血液的理化特性血液的功能现在是17页\一共有80页\编辑于星期日血液血浆血细胞红细胞白细胞血小板

水：90～92％

血浆蛋白

溶质：8～10％小分子物质营养物质激素代谢产物有机物无机盐（电解质）白蛋白球蛋白纤维蛋白原血液的组成及血浆成分现在是18页\一共有80页\编辑于星期日现在是19页\一共有80页\编辑于星期日现在是20页\一共有80页\编辑于星期日血液的功能1

营养2运输3缓冲

4参与机体免疫参与凝血和抗凝现在是21页\一共有80页\编辑于星期日二、血液标本的采集现在是22页\一共有80页\编辑于星期日全血静脉全血：G-6-PD、糖化血红蛋白、基因检测动脉全血：血气分析末稍全血：用于细胞计数、分类、形态观察分类现在是23页\一共有80页\编辑于星期日血浆：全血去除血细胞,用于血栓止血检测血清：全血自然凝固后析出的液体,用于生物化学、免疫学检测等分类现在是24页\一共有80页\编辑于星期日采血用品现在是25页\一共有80页\编辑于星期日1、皮肤采血法：微量检测(thecollectionofcapillaryblood)

采血部位：耳垂或手指末梢血液标本采集的方法现在是26页\一共有80页\编辑于星期日2、静脉采血法(thecollectionofvenousblood)

用于血沉、免疫、生化等检测项目部位：以肘部静脉为主采集方法现在是27页\一共有80页\编辑于星期日注血标本法现在是28页\一共有80页\编辑于星期日采血的注意事项现在是29页\一共有80页\编辑于星期日现在是30页\一共有80页\编辑于星期日头盖颜色临床用途标本类型采血量（ml）红色

血清生化血库试验血清3.04.05.07.0绿色快速血浆生化血流变试验血浆3.04.05.0黄色快速血清生化药代动力学试验血清3.55.0

紫色血液常规、全血试验血流变试验全血2.05.0

浅蓝色凝血试验凝血因子试验血浆1.82.7

黑色手工血沉试验全自动血沉试验全血1.82.4

真空采血管颜色及应用现在是31页\一共有80页\编辑于星期日多管血分配顺序黄色红色紫色黑色绿色浅蓝色现在是32页\一共有80页\编辑于星期日动脉采血法通常选用桡动脉（方便）、股动脉、肱动脉现在是33页\一共有80页\编辑于星期日标本采集时应规范操作，以减少误差毛细血管采血时应避开伤损部位，避免挤压皮肤，血液应自然流出静脉采血时压脉带压迫时间不宜太长动脉采血后应立即与空气隔绝，阻止血气交换

标本采集的注意事项注意：严禁在静脉输液管中采集血液现在是34页\一共有80页\编辑于星期日两种采血方法的应用皮肤采血法静脉采血法缺点限制了重复实验和追加实验，标本量少，局部炎症可得假结果，组织液可混入不同抗凝剂的使用，改变血液性质，影响有形成分的形态优点价廉、快速、操作简便，标本可直接测定标本代表性大，无组织液影响，适于临床研究，可重复实验和追加其他实验现在是35页\一共有80页\编辑于星期日

标本送检、保存与处理

唯一标识、生物安全原则、尽快运送接收与拒收标本原则;未检测标本的保存、检测后标本析保存检验后血液标本的处理

现在是36页\一共有80页\编辑于星期日抗凝剂的选择和运用抗凝

用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性，以阻止血液凝固，称为抗凝。抗凝剂

钙拮抗剂、肝素。概念现在是37页\一共有80页\编辑于星期日抗凝原理：形成草酸钙沉淀使用方法：草酸钠0.1mol/L和血液1:9优点：溶解性好，价廉缺点：对凝血因子保护功能差，影响凝血因子；形成草酸钙沉淀物，影响自动凝血仪器的使用使用范围：双草酸盐维持红细胞体积，使血小板聚集、白细胞形态改变草酸盐现在是38页\一共有80页\编辑于星期日抗凝原理：与钙离子生成可溶性的鳌合物使用方法：配成109mmol/L的浓度和血液1:9,106mmol/L的浓度和血液1:4优点：对凝血因子有很好的保护作用缺点：血液中溶解度低，抗凝作用较弱使用范围：止血学检验、血沉、输血保养液（毒性小）枸橼酸钠现在是39页\一共有80页\编辑于星期日抗凝原理：生成可溶性的鳌合物。使用方法：15g/LEDTA和血液1:10。优点：对红细胞和白细胞形态影响小。缺点：影响血小板的聚集。使用范围：全血细胞分析和血细胞比容测定，不适用于出凝血实验和血小板功能乙二胺四乙酸（EDTA）盐现在是40页\一共有80页\编辑于星期日抗凝原理：加强抗凝血酶作用使用方法：肝素钠1g/L与血液1:10优点：抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易溶血、能耐高温缺点：引起白细胞聚集，使白细胞计数降低，不利于制备血涂片，价格昂贵使用范围：红细胞脆性实验，科学研究等肝素现在是41页\一共有80页\编辑于星期日谢谢现在是42页\一共有80页\编辑于星期日血涂片的用途：

血细胞形态学检验网织红异常寄生虫检验四、血涂片

血涂片的制备技术现在是43页\一共有80页\编辑于星期日涂片技术是制备血液样品最常用的技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、细胞大小测量等工作。实验原理现在是44页\一共有80页\编辑于星期日

1．采血

2．制作涂片

3．干燥涂片

4．标记涂片

5．染色

6．观察结果血涂片制备步骤(手工推片法)现在是45页\一共有80页\编辑于星期日医用一次性采血针酒精棉球镊子经脱脂洗净的载玻片双凹片（推片）

实验器材准备现在是46页\一共有80页\编辑于星期日采血前用70％酒精棉球消毒人的指腹现在是47页\一共有80页\编辑于星期日采血现在是48页\一共有80页\编辑于星期日由于第一滴血中含单核白细胞较多，因此弃去第一滴血现在是49页\一共有80页\编辑于星期日推片：挤出第二滴血置于载玻片的右侧现在是50页\一共有80页\编辑于星期日

再取另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状。现在是51页\一共有80页\编辑于星期日30~45°

两玻片的角度以30～45°为宜，轻轻将双凹片向前匀速推进，即涂成血液薄膜。现在是52页\一共有80页\编辑于星期日

将推玻片向后稍抽回，当血液充满推玻片的宽度后，以一定均匀的速度向前方滑动。血涂片的制作现在是53页\一共有80页\编辑于星期日均匀厚薄头体尾边缘两侧血涂片质量评价注意：血滴大，速度快、角度大----血膜厚现在是54页\一共有80页\编辑于星期日现在是55页\一共有80页\编辑于星期日染料(天然染料和人工染料）

发色基团和助色基团使生物学染色剂产生颜色和被染组织亲合。五、血细胞常用的染色方法现在是56页\一共有80页\编辑于星期日碱性染料：阳离子染料，能接受质子，染细胞核的染料（如亚甲蓝、天青）酸性染料：阴离子染料，能释放质子。能结合细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白，嗜酸性颗粒成分等。复合染料：同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料染料的分类现在是57页\一共有80页\编辑于星期日物理作用：渗透、吸收、吸附作用等化学作用：a、染料的化学成分：助色基团的存在。碱性染料在溶媒中为阳离子型，易与组织和细胞内带负电荷的酸性物质结合；而酸性染料在溶媒中为阴离子型，与带正电荷的碱性物质结合。细胞着色原理现在是58页\一共有80页\编辑于星期日b.蛋白质的化学性质：蛋白质中的氨基酸含有不同数量的氨基（-NH2）和羧基（-COOH），同时还有其他活性基团。在游离状态时，-NH2获得一个H+变成带正电的-NH3+，而-COOH失去一个H+变成带负电的-COO-。分别与不同染料结合。化学作用现在是59页\一共有80页\编辑于星期日C.周围环境的酸碱度：如环境pH＜pI（pI为等电点），则蛋白质带正电，结合酸性染料；反之，pH＞pI，则结合碱性染料。化学作用现在是60页\一共有80页\编辑于星期日染色原理

分两相进行，第一相是酸性伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒结合；碱性染料天青B与细胞中的酸性物质如核染色质、特异中性颗粒、血小板结合。第二相是天青B和伊红结合在适宜条件下形成紫色的天青B-伊红复合物，结果使白细胞核染色质成紫色（疟原虫的染色质成红色），中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区成紫色。

瑞氏染色法现在是61页\一共有80页\编辑于星期日试剂

1.Wright染液瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml甲醇：有强大的脱水力，可将细胞固定为一定形态，并使蛋白质沉淀为颗粒状、网状等结构，增加细胞与染料接触表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。瑞氏染色法现在是62页\一共有80页\编辑于星期日试剂

2.磷酸盐缓冲液（PBS）磷酸二氢钾（无水）0.3g，磷酸氢二钠（无水）0.2g,蒸馏水加到1000ml。配好后用磷酸盐溶液校正pH，塞紧瓶口备用。瑞氏染色法现在是63页\一共有80页\编辑于星期日a.用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上b.加瑞氏染液覆盖血膜，固定1minc.滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色10-15分钟d.用清水冲洗，待干后油镜镜检瑞氏染色方法现在是64页\一共有80页\编辑于星期日染色

待涂片在空气中完全干燥后，滴加数滴Wright’s染液盖满血膜为止，染色1min。然后滴加等量或稍多缓冲液，使其与染液均匀混合，静置10～15min。用流水缓缓冲去染液，待干镜检。

现在是65页\一共有80页\编辑于星期日染色原理

基本成分仍然是伊红和亚甲蓝，改进了染料的质量，使细胞核着色好，结构显示更清晰，而胞浆和中性颗粒染色较差。试剂

Giemsa染液甲醇纯甘油姬姆萨染色法现在是66页\一共有80页\编辑于星期日1.甲醇固定干燥血膜3-5min2.将血膜在染液中浸染10-30min3.流水冲洗,待干后镜检姬姆萨染色方法现在是67页\一共有80页\编辑于星期日瑞氏和姬氏染粉按一定比例混合，用甲醇溶解配制成瑞-姬染液。染色过程和染色原理与瑞氏染色类似。瑞-姬染色现在是68页\一共有80页\编辑于星期日新鲜配制的染液偏碱，染色效果较差，应贮存一段时间后再用。不能使用肝素抗凝标本玻片必须清洁、干燥、无尘。使用玻片时，只能手持玻片边缘，切勿触及玻片表面染色注意事项现在是69页\一共有80页\编辑于星期日制作涂片时根据血细胞比容、血粘度的高低决定应采用血滴的大小及推片的角度和速度。血涂片干透后方可固定染色。根据染液浓度、室温及细胞多少决定染色时间低倍镜下观察血涂片染色质量。染色注意事项现在是70页\一共有80页\编辑于星期日瑞氏染色对胞浆着色好，胞浆中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性等颗粒染色清晰、色泽纯正，细胞核着色不理想姬氏染色对细胞核着色程度适中，染色后细胞核结构清晰，胞质染色较差瑞-姬染色使瑞氏及姬氏染色取长补短，优势互补方法学评价现在是71页\一共有80页\编辑于星期日染色效果观察现在是72页\一共有80