动物细胞工程第四章第二节细胞培养液

动物细胞工程第四章第二节细胞培养液第1页，共32页，2023年，2月20日，星期四4.2.1细胞培养的常用液体高纯化水：蒸馏水（密封，短储）离子交换水（含有有机物）第2页，共32页，2023年，2月20日，星期四第3页，共32页，2023年，2月20日，星期四第4页，共32页，2023年，2月20日，星期四第5页，共32页，2023年，2月20日，星期四胶原酶溶液第6页，共32页，2023年，2月20日，星期四C6H14N2O2第7页，共32页，2023年，2月20日，星期四第8页，共32页，2023年，2月20日，星期四第9页，共32页，2023年，2月20日，星期四第10页，共32页，2023年，2月20日，星期四第11页，共32页，2023年，2月20日，星期四7.谷氨酰氨培养液谷氨酰胺在细胞代谢过程中起重要作用，合成培养基中都要添加。一般配制为100倍浓缩液，配制时应加温至30℃，完全溶解后过滤除菌，分装至小瓶，储存于-20℃。使用时，在每100ml培养液中加入0．5～2ml谷氨酰胺母液，终浓度为1～4mmol/L。谷氨酰胺在溶液中不稳定，4℃放置7天可分解50%，两周以上要重新加入原来量的谷氨酰胺。

第12页，共32页，2023年，2月20日，星期四1.培养基的基本要求4.2.2培养基

（L-精氨酸、胱氨酸、组氨酸、络氨酸）第13页，共32页，2023年，2月20日，星期四第14页，共32页，2023年，2月20日，星期四，浓度：5--20%，常用10%。第15页，共32页，2023年，2月20日，星期四血清来源：牛血清（胎牛血清、新生牛血清、小牛血清）马血清、鸡血清、兔血清、羊血清、人血清等第16页，共32页，2023年，2月20日，星期四血清的不同批号含有不同的成分，所以许多人发现，应该在使用前对血清进行测试。大多数试剂商提供样品，所满意的批号即可选用，这样可以一次得到足够一年用量的血清，血清在使用前通常在56℃加热30分钟，这一过程称为灭活。

第17页，共32页，2023年，2月20日，星期四第18页，共32页，2023年，2月20日，星期四第19页，共32页，2023年，2月20日，星期四第20页，共32页，2023年，2月20日，星期四第21页，共32页，2023年，2月20日，星期四第22页，共32页，2023年，2月20日，星期四第23页，共32页，2023年，2月20日，星期四常用的合成培养基(液)

(1)199培养基：1950年为培养鸡胚细胞研制的。199培养基含有多达69种成分。其组成成分虽然很多，但单独使用时只能维持细胞存活数天，在加入血清后可以维持很多种细胞的生长。第24页，共32页，2023年，2月20日，星期四序号化合物名称含量(mg/L)序号化合物名称含量(mg/L)1无水氯化钙185.0031维生素D20.0102硝酸铁.9H2O0.7232氯化胆碱0.5003氯化钾400.0033叶酸0.0104无水硫酸镁97.6734肌醇0.0505乙酸钠50.0035维生素K0.0166氯化钠6800.0036烟酰胺0.0257无水磷酸二氢钠122.0037烟酸0.0258L-丙氨酸50.0038对氨基苯甲酸0.0509L-盐酸精氨酸70.0039泛酸钙0.01010L-门冬氨酸60.0040盐酸吡哆醇0.02511L-盐酸半胱氨酸0.1141盐酸吡哆醛0.02512L-盐酸胱氨酸26.0042维生素A醋酸盐0.10013DL-谷氨酸133.6043核黄素0.10014L-谷氨酰胺100.0044盐酸硫胺0.01015甘氨酸50.0045D2-磷酸生育酚钠盐0.01016L-盐酸组氨酸21.8846硫酸腺嘌呤10.0017L-羟脯氨酸10.0047腺嘌呤三磷酸1.0018DL-异亮氨酸40.0048腺嘌呤一磷酸0.238519DL-亮氨酸120.0049胆固醇0.20020L-盐酸赖氨酸70.0050脱氧核糖0.50021DL-甲硫氨酸30.0051葡萄糖100022DL-苯丙氨酸50.0052还原谷胱甘肽0.05023L-脯氨酸40.0053盐酸鸟嘌呤0.30024DL-丝氨酸50.0054次黄嘌呤0.30025DL-苏氨酸60.0055吐温805.0026DL-色氨酸20.0056核糖0.50027L-酪氨酸.钠盐57.6657胸腺嘧啶0.30028DL-缬氨酸50.0058尿嘧啶0.30029维生素C0.056659黄嘌呤钠盐0.30030D-生物素0.01060酚红20.00第25页，共32页，2023年，2月20日，星期四第26页，共32页，2023年，2月20日，星期四序号化合物名称含量(mg/L)序号化合物名称含量(mg/L)1无水氯化钙.2H2O265.0018L-丝氨酸42.002硝酸铁.9H2O0.1019L-苏氨酸95.003氯化钾400.0020L-色氨酸16.004无水硫酸镁97.6721L-酪氨酸72.005氯化钠6400.0022L-缬氨酸94.006无水磷酸二氢钠109.0023D-泛酸钙4.007丁二酸75.0024酒石酸胆碱7.208丁二酸钠100.0025叶酸4.009L-盐酸精氨酸84.0026肌醇7.2010L-盐酸胱氨酸63.0027烟酰胺4.0011甘氨酸30.0028核黄素0.4012L-盐酸组氨酸42.0029盐酸硫胺4.0013L-异亮氨酸105.0030盐酸吡哆辛4.0014L-亮氨酸105.0031葡萄糖1000.0015L-盐酸赖氨酸146.0032丙酮酸钠110.0016L-甲硫氨酸30.0033酚红9.30.0017L-苯丙氨酸66.00DMEM(A)细胞培养基（粉末型）成份第27页，共32页，2023年，2月20日，星期四(3)RPMl1640培养基：最初为培养小鼠白血病细胞的需要而制备。RPMl1640其组成较为简单，但可以适应很多种类细胞的生长。不仅肿瘤细胞，而且很多正常组织细胞可用RPMI1640进行体外培养。第28页，共