动物细胞融合与单克隆抗体申

动物细胞融合与单克隆抗体申第1页，共41页，2023年，2月20日，星期三(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交过程示意图动物细胞能否融合？第2页，共41页，2023年，2月20日，星期三A细胞B细胞人工诱导1.1动物细胞融合的概念杂交细胞是指两个或多个细胞融合形成一个单核细胞的过程。（也称细胞杂交）一、动物细胞融合第3页，共41页，2023年，2月20日，星期三怎样融合?过程如何?第4页，共41页，2023年，2月20日，星期三细胞膜的流动性灭活病毒、PEG、电激等融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞诱导的手段？融合后细胞的类型？AB杂种细胞遗传物质有什么特点？三种AA、AB、BB（A、B）含两种生物的遗传物质1.2动物细胞融合过程原理？第5页，共41页，2023年，2月20日，星期三1.2动物细胞融合过程

灭活丧失感染性保留融合活性为什么灭活的病毒能作诱导剂？第6页，共41页，2023年，2月20日，星期三1.3动物细胞融合技术的意义和应用突破

方法的局限，使远缘杂交成为可能为制造

开辟了新途径有性杂交单克隆抗体第7页，共41页，2023年，2月20日，星期三比较项目细胞融合的原理相关的酶诱导手段用途植物体细胞杂交细胞膜的流动性纤维素酶、果胶酶去除细胞壁离心、电刺激、振动、聚乙二醇克服远源杂交不亲和性获得杂种植株动物细胞融合细胞膜的流动性用胰蛋白酶胶原蛋白酶使细胞分散除应用植物细胞杂交手段外，还有灭活病毒使远缘杂交成为可能,获得杂种细胞制备单克隆抗体1.4比较动、植物细胞杂交技术第8页，共41页，2023年，2月20日，星期三1．动物细胞融合与植物原生质体融合所用的诱导方法有何不同？

提示：动物细胞融合可用灭活的病毒进行诱导。

2．细胞融合技术与有性杂交相比有哪些优点？提示：有性杂交有着十分严格的时空关系和种族界限。动物细胞融合则不同，①它克服了物种之间的遗传屏障，②能够按照人们的意愿，把不同物种的不同组织类型的细胞融合在一起。思考与探究第9页，共41页，2023年，2月20日，星期三强调：效应B淋巴细胞是能够产生抗体的B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。能产生抗体的细胞是浆细胞（即效应B细胞）。温故知新二、单克隆抗体B淋巴细胞效应B淋巴细胞记忆B淋巴细胞分化第10页，共41页，2023年，2月20日，星期三1、抗体的传统生产方法抗原（1）向动物体内反复注射抗原（2）从动物的血清中分离抗体（3）该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。如何解决这个问题呢？单克隆抗体！第11页，共41页，2023年，2月20日，星期三读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念

人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。2.1单克隆抗体1、概念：单个B细胞克隆产生的化学性质单一、特异性强的抗体第12页，共41页，2023年，2月20日，星期三2.2单克隆抗体的制备如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。(2)解决思路：将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合为

。杂交瘤细胞第13页，共41页，2023年，2月20日，星期三产生专一抗体的B细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量增殖的细胞1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验第14页，共41页，2023年，2月20日，星期三(3)制备过程第15页，共41页，2023年，2月20日，星期三获得产生相应抗体的B细胞①为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？BB

、B瘤、瘤瘤（B、瘤）②会有几种融合方式？√第16页，共41页，2023年，2月20日，星期三（一选）选择性培养基培养：只有杂交瘤细胞才能存活（二选）：选择能产生特定抗体的杂交瘤细胞体外培养液中培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。③杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？④是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体？⑤如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？因为用抗原刺激小鼠时会产生多种效应B细胞，不同效应B细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞产生的抗体是不同的，所以还要筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞第17页，共41页，2023年，2月20日，星期三(4)单克隆抗体的特点特异性强，灵敏度高，并能大量制备。第18页，共41页，2023年，2月20日，星期三2.3单克隆抗体的应用（1）作为诊断试剂——准确、高效、简易、快速的优点第19页，共41页，2023年，2月20日，星期三“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物单抗导向，药物为弹头（2）治疗疾病和运载药物主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。第20页，共41页，2023年，2月20日，星期三血清抗体与单克隆抗体的比较名称产生特点血清抗体由B淋巴细胞分泌一般从血清中分离，产量低、纯度低、特异性差单克隆抗体由杂交瘤细胞分泌特异性强、灵敏度高，能大量制备第21页，共41页，2023年，2月20日，星期三1．为什么要对小鼠注射抗原？提示：以获得能产生相应抗体的B淋巴细胞(浆细胞)。

2．根据单克隆抗体制备过程思考下列问题：

(1)制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？

(2)B淋巴细胞和骨髓瘤细胞经聚乙二醇处理后，培养液中存在哪几种细胞？

(3)选择杂交瘤细胞的两步筛选的目的各是什么？思考与探究提示：(1)B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体，但不能无限增殖；骨髓瘤细胞可大量快速增殖，却不能产生抗体。若将两种细胞融合在一起，既能无限增殖又能大量产生特异性抗体。

(2)未融合的B淋巴细胞、未融合的骨髓瘤细胞、B－B融合细胞、瘤－瘤融合细胞、B－瘤融合细胞。

(3)第一步筛选的目的是获得杂交瘤细胞；第二步筛选的目的是获得能产生所需单一抗体的杂交瘤细胞。第22页，共41页，2023年，2月20日，星期三【考向一】细胞融合[例1]下列对植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较，描述正确的是 (

)A．动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同，诱导融合的方法也完全相同

B．两者都可以跨越种属间的生殖隔离，突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能

C．利用动物细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为试管婴儿的诞生开辟了新途径

D．目前科学家终于实现了两个植物物种间的体细胞杂交，得到了同时具有两个物种遗传物质的超级植物，并使它们的性状全部得以体现B第23页，共41页，2023年，2月20日，星期三【考向二】单克隆抗体的制备[例2]下图是制备分泌抗X(H1N1流感病毒)抗体的过程，根据图解回答问题：(1)给小鼠注射抗原的目的是_____________。(2)在单克隆抗体制备过程中之所以选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具有_______

的特性。获得能产生相应抗体的B淋巴细胞既能无限增殖，又能产生特定抗体第24页，共41页，2023年，2月20日，星期三(3)由图中可看出，单克隆抗体制备过程运用了_________

和______

_的动物细胞工程技术手段。(4)动物细胞培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，与植物细胞培养基有所不同的是还含有________

。细胞融合细胞培养动物血清第25页，共41页，2023年，2月20日，星期三(5)在动物细胞融合过程中，需要将所选取的组织细胞分散开，以利于细胞融合，可用________

处理离体组织细胞使之分散。(6)图中有两次筛选过程，其中步骤④的目的是筛选出_

_

，步骤⑤⑥的目的是筛选出_______________________________。胰蛋白酶杂交瘤细胞能产生特定抗体的杂交瘤细胞第26页，共41页，2023年，2月20日，星期三【变式训练】单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合后,要用特定的培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是(

)①B淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞A．①②③④B．①②③

C．②④D．②③初试牛刀A在选择培养基上，只有杂交瘤细胞才能成活增殖第27页，共41页，2023年，2月20日，星期三1.动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是()A.诱导融合的方法完全相同B.所用的技术手段完全相同C.所采用的原理完全相同D.都能形成杂种细胞2.动物细胞融合和植物原生质体融合比较，在动物细胞融合中有特殊性的是

（

）A.融合的原理 B.融合的优点

C.融合的诱导手段 D.融合的过程在选择培养基上，只有杂交瘤细胞才能成活增殖DC第28页，共41页，2023年，2月20日，星期三3、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞B.不经过免疫的T淋巴细胞D.不经过免疫的B淋巴细胞A第29页，共41页，2023年，2月20日，星期三4.下图是单克隆抗体制备过程示意图，其中1过程注射的物质和A细胞的名称为 （）A.抗体、T淋巴细胞B.抗原、T淋巴细胞C.抗体、B淋巴细胞D.抗原、效应B淋巴细胞D第30页，共41页，2023年，2月20日，星期三5.单克隆抗体和血清抗体相比，其优越性在于（）A.单克隆抗体能够制成“生物导弹”B.单克隆抗体能够在体外制备C.单克隆抗体比血清抗体的特异性强、免疫活性高D.单克隆抗体制备过程简单6.“生物导弹”是指 （）A.单克隆抗体B.带有特定药物的单克隆抗体C.杂交细胞D.B淋巴细胞CB第31页，共41页，2023年，2月20日，星期三【例6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（）A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞B．用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C．用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D．筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体×B第32页，共41页，2023年，2月20日，星期三7.右图为细胞融合的简略过程，请据图回答：（1）若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已用

_____________处理，除去了

_______；由A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法是

____________________。融合完成的标志是________。（2）若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用

_______________________技术把D培养成植株。纤维素酶和果胶酶细胞壁离心、振动、电刺激产生新的细胞壁组织培养第33页，共41页，2023年，2月20日，星期三（3）若A、B是动物细胞，一般取自

_____

，然后用

使其分散开来；由A、B到C的过程中，常用的不同于植物细胞融合的手段是

_________

，所形成的D称为

__________

，A、B融合为C的过程说明了细胞膜具有

。（4）若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠效应B细胞，那么，在获得此细胞之前，小鼠已经被注射了

。注射后小鼠身体发生了相应的免疫反应，生成了______

，图中B为____________。幼龄动物的组织或器官或胚胎胰蛋白酶灭活的病毒诱导杂（交）种细胞流动性抗原效应B细胞、记忆细胞、抗体骨髓瘤细胞第34页，共41页，2023年，2月20日，星期三（5）若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到C的过程中，所形成的C有

种，用来培养的D细胞应该是_____________。从中选择出它的方法是___________

培养，获得D后，常用的培养方法是培养液中培养和_________________________。杂交瘤细胞用特定选择培养基小鼠腹腔内增殖

3

第35页，共41页，2023年，2月20日，星期三第36页，共41页，2023年，2月20日，星期三两个过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法－－灭活病毒一个新细胞－－杂交瘤细胞一个优势－－单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势本节小结重点第37页，共41页，2023年，2月20日，星期三(1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自小鼠体内的

细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_____________类物质。（2）d过程是一个_____________过程，该过程的进行常用_____________或_____________的诱导。(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成

种类型的C细胞，因此需用__________培养基筛选出D细胞用于培养，D细胞的名称是

，其特点是_________________________________________。效应B

抗原

细胞融合

聚乙二醇灭活的病毒

选择性3既能无限增殖又能产生特异性抗体

杂交瘤细胞第38页，共41页，2023年，2月20日，星期三(4)在培养时通过________分裂方式大量繁殖。D细胞体外培养需要注意的条件是（要求答5项）__________________________________。（5）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，与常规抗体相比，其特点是_________________。特异性强、灵敏度高

有丝无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和pH；适宜的气