仿制药分析方法的验证和药品稳定性的研究-谭海松2011.11.27

仿制药分析方法的验证和药品稳定性的研究谭海松PhDNov27,2011主要内容仿制药的GMP要求仿制药分析方法的验证仿制药稳定性的研究FDA官员来制药公司检查时的留言我们并不期望在检查过程中所有事情都是完美无缺的,但是我们的确希望所检查到的东西全在你们的有效控制之中.药检局对仿制药的要求仿制药品系指仿制国家已批准正式生产并收载于国家药品标准的品种.仿制药与被仿制药应具有相同的剂型,剂量,质量,用途,用法,效果和安全度.仿制药的质量控制药品测试分析方法分析方法验证科学性(理论正确)药品质量可靠性(避免人为和仪器误差)准确性(正确反映真实值)分析方法验证的前提:GMP标准标准物和试剂仪器操作人员分析方法验证标准作业程序

(SOP)实验室……标准物和试剂的SOP要求包装上注明生产厂家,批号和有效期如生产厂家没有提供有效期,SOP要规定有效期实验记录要有所用到的标准物和试剂的生产厂家,批号和有效期分析仪器的SOP要求所有分析仪器都要有使用记录分析仪器在使用前要用标准物校准分析仪器每半年进行一次仪器校准HPLC在使用前用标准物校准举例溶剂空白定量限或分离效率检查标准物溶液-1(注射3次)标准物溶液-2(注射3次)样品溶液(每隔10个样品注射标准物溶液-1,2)

. .标准物溶液-1标准物溶液-2定量限或分离效率检查溶剂空白实验室的SOP要求所有仪器都要有校准日期或相应的注释所有样品和溶液都要有批号,有效期和来源实验室中的工作人员要有必要的安全防护实验室要保持整洁工作人员的SOP要求每个工作人员都要有相关SOP的培训记录工作人员每年至少参加一次GMP培训主要内容仿制药的GMP要求仿制药分析方法的验证仿制药稳定性的研究仿制药的研发过程找到原料药稳定性的研究专利保护将失效或专利挑战生物等效性临床试验简化新药(ANDA)申请分析方法的研究和验证配方和生产工艺的研究

成品药片分析样品的制备实例把10片药品放于500毫升容量瓶中,加入400毫升溶剂,以200rpm摇30分钟,然后加入溶剂到刻度.摇匀后,以8,000rpm高速离心10分钟,取上清液用高压液相色谱(HPLC)进行分析.分析方法的验证API全部溶于溶剂HPLC正确分析出样品溶液的浓度分析结果的可靠性分析方法验证的内容API全部溶于溶剂 准确度,精密度正确分析出样品溶液的浓度 专属性,线性,范围,检测限,定量限分析结果可靠性

耐用性,精密度分析方法验证内容专属性线性准确度精密度范围检测限,定量限耐用性样品溶液稳定性分析方法验证-专属性专属性的定义

在其它成分可能存在下,分析方法能够正确检测出被分析物的特性.专属性的测定举例:高压液相色谱高压液相色谱的系统适用性色谱峰的容量因子:1<k<20色谱峰分辨率:R>=1.5色谱峰的拖尾系数:T<2.0主要成分色谱峰纯度:>=99.9%(LC/MS,DAD,UV)高压液相色谱的系统适用性色谱峰的容量因子:k=t/tM-1色谱峰分辨率:R=2(t2-t1)/(W1+W2)高压液相色谱的系统适用性色谱峰的拖尾系数:T=W0.05/(2f)高压液相色谱的系统适用性色谱峰分辨率:2.0色谱峰的拖尾系数:1.0分析方法验证-线性线性的定义

在测定范围内,检测结果与被分析物浓度呈线性关系的程度.线性的测定 在被分析物浓度20%-150%内,至少测5个浓度.例如20%,80%,100%,120%,150%

最小二乘法线性回归,R>=0.999线性举例-HPLC线性举例-HPLC分析方法验证-准确度准确度的定义

测定结果与真实值之间的接近程度.向制剂中加入已知量的被测物进行回收率测定来验证.

准确度的测定 在3个浓度(80%,100%,120%)中,每个浓度制备3个样品.每个浓度3个样品的平均回收率必须在98-102%.分析方法验证-精密度精密度的定义

同一样品多次取样测试结果的接近程度

精密度的测定:%RSD<=2%(6个样品) 重复性:同一分析人所得结果的精密度 中间精密度:同一实验室,不同的日期,设备和人员所得结果的精密度 重现性:不同实验室,不同人员所得结果的精密度分析方法验证-范围范围的定义

分析药品达到一定准确度,精密度和线性的区间.范围的要求 含量测定:80-120%

含量均匀度测定:70-130% 溶出度:50-150%

杂质测定:规定限度±20%分析方法验证-检测限和定量限

检测限:试样中被分析物能被检测到的最低量,一般定义为信噪比大于3:1定量限:试样中被分析物能被定量测定的最低量,一般定义为信噪比大于10:1

检测限和定量限信噪比的测量分析方法验证-耐用性

耐用性的定义

测定条件发生小的变动时,测定结果不受影响的承受程度

耐用性测定的举例:高压液相色谱 流动相:组成,pH值,流速的变动

色谱柱:厂家,批号,柱温的变动

分析方法验证-样品溶液稳定性

样品溶液稳定性的定义

样品溶液在一定储藏条件下可被重复使用的时间样品溶液稳定性的测定 样品溶液稳定性测定结果是初始结果98.5-101.5%.

仿制药分析方法的来源中国药典美国药典（USP）欧洲药典（EP）日本药典（JP）原料药厂家文献分析方法验证的参考文献ICHQ2-ValidationofAnalyticalProcedures美国药典（USP）主要内容仿制药的GMP要求仿制药分析方法的验证仿制药稳定性的研究稳定性测试目的考察原料药或制剂的性质在温度,湿度,光线等条件的影响下随时间变化的规律.为药品的生产、包装、贮存、运输条件和有效期的确定提供科学依据,以保证临床用药安全有效.稳定性测试的趋势包括更多的贮藏条件以使临床实验可在不同国家进行提早开始稳定性研究来附和不同国家药检局的要求稳定性测试需要控制的条件测试内容和标准贮存条件

测试频率测试完成时间原料药的测试内容和标准外观变化:颜色物理性质变化:晶型,熔点,热失重,水含量

主要成分含量:97-103%杂质含量：<0.15%仿制药对原料药的要求与被仿制药品的原料药具有相同的物理化学性质:如盐,晶型和异构体(对映体)原料药的杂质限度原料药杂质的含量应低于质控限度杂质的种类和含量与被仿制药相同如杂质的含量明显高于质控限度且与被仿制药不同,应做必要的安全性研究原料药中基因毒性杂质要被有效控制原料药的杂质限度最大日剂量报告限度鉴定限度质控限度<=2g0.05%0.10%或1.0mg0.15%或1.0mg>2g0.03%0.05%0.05%原料药中基因毒性杂质的控制基因毒性杂质举例alkylatingelectrophiliccenter,unstableepoxide,aromaticamines,aromaticnitro,azo-structure,N-nitroso-group基因毒性杂质的控制限<1.5ug/day药物制剂的测试内容和标准外观变化:颜色主要成分含量：变化小于5%降解产物:<0.2%溶出度:>70%at45min物理性质:水含量,颗粒度制剂的杂质限度最大日剂量报告限度鉴定限度质控限度<1mg0.1%1.0%,5ug1.0%,50ug1-10mg0.1%0.5%,20ug1.0%,50ug10-100mg0.1%0.2%,2mg0.5%,200ug100mg-1g0.1%0.2%,2mg0.2%,3mg1g-2g0.05%0.2%,2mg0.2%,3mg>2g0.05%0.1%0.15%溶出度测定模拟人体的消化过程溶出度测定的重要性控制药物制剂质量的一个重要指标决定药物制剂稳定性的一个重要依据用来评价药物制剂质量是否受原料药,配方,生产工艺和生产地变化的影响

USP1:转篮法溶出度测试过程中,药品滞留在转篮里可以调节缓冲液的值而不影响篮里的药品适用于片剂,胶囊等USP2:桨法溶出度测试过程中,药品留在容器底部的中间适用于片剂,胶囊和悬浮液等USPII

溶出度测定仪器USPII溶出度测定举例USP3:往复式圆筒法药品随圆筒在溶液中做上下运动不同缓冲液可放在不同容器中适用于片剂,胶囊和缓释药等USPIII

溶出度测定仪器52USPIII溶出度测定举例USPIII溶出度测定举例溶出度测定方法的要素选择适当缓冲液(pH):API在缓冲液中的溶解度是药品100%释放的5-10倍.设定适当的转速(USPI,USPII):50rpm,75rpm,100rpm使用适当的分析方法:UV,HPLC

海南华益泰康药业有限公司成立于2010年6月，海口市引进的重大科技项目，总投资1亿元人民币。以新药研发为主，集生产、销售于一体的综合性国际化医药企业。公司关键核心研发人员均来自美国，有10年以上在美国著名制药医药公司药物制剂开发和技术管理的经验。海南华益泰康药业有限公司公司总建筑面积达1万多平方米，4000平米的制剂研发和生产车间，2500平米的分析研发和质量控制实验室。生产车间及研发实验室完全按照美国GMP要求标准建设，并引入国外药厂的现代化设计和管理理念为产品把关。目前有近十个项目处于研发阶段，大部分是缓释和肠溶等复杂剂型。分析实验室仪器设备液相色谱：安捷伦1260和1100型气相色谱：安捷伦7890加顶空自动进样紫外可见：安捷伦8453加自动进样器溶出仪：安捷伦708加自动进样器溶出仪USPIII：安捷伦(Varian)Bio-Dis傅里叶红外：岛津Prestige

稳定性测试的贮存条件气候带温度(OC)湿度(%RH)温带2145地中海气候,亚热带2560干热带3025湿热带3070国际气候带

稳定性测试的贮存条件贮存条件最短时间(月)长期试验25°C/60%RHor30°C/65%RH12加速试验40°C/75%RH6稳定性测试的储存条件贮存条件最短时间(月)长期试验5°C±3°C12加速试验25°C/60%RH6稳定性测试的储存条件贮存条件最短时间(月)长期贮存-20°C±5°C12光照稳定性的测试总光照：1.2millionluxhours光强：200watthours/㎡实验要求：裸露在光源下放在包装中成品药有效期的确定稳定性好的药品一般以长期试验结果来确定有效期综合加速试验和长期试验结果进行统计分析如三批统计分析结果差别较小,取平均值为有效期如统计分析结果差别较大,取最短的为有效期稳定性的测试频率

长期试验第一年:每三个月测一次第二年:每六个月测一次第二年以后:每年测一次加速试验六个月时间:至少测三次,包括起始点和第六个月的点.稳定性的测试时间和有效期贮存条件(°C/%RH)测试时间(月)13691218每年结束5

T

T

T30/65or25/60

TTTTTTT40/75(T)TT

50TT

光照试验T

有效期61212182430+12结束

测试完成时间测试时间(月)完成时间(天)<1141-321>328稳定性测试样品的选择最少采用三批样品采用一定规模生产的样品能够代表大规模生产条件下的产品质量合成路线配方包装

稳定性测试样品生产规模的要求口服固体制剂:片剂,胶囊等10000个制剂单位大体积包装的制剂:静脉输液稳定性试验所需总量的10倍以上哪些变化需要重测原料药的稳定性改变合成路线改变合成过程中最后的纯化步骤改变大规模生产的步骤改变分析方法和规格要求哪些变化需要重测成品药的稳定性不同的制剂和配方改变主要添加剂的比例改变生产步骤,生产设备和生产地改变药品的包装稳定性研究的特点周期长样品选择较严格重测率高成本较高稳定性研究的参考文献ICHQ1A-StabilityTestingofNewDrugSubstancesandProductsICHQ1B-StabilityTesting:PhotostabilityTestingofNewDrugSubstancesandProductsICHQ3-ImpuritiesFDA483举例YourfirminvalidatedanalyticaldatawithoutanyscientificjustificationYourinvestigationattributesanunknownpeaktoinjectorcontaminationbutthispeakwasnotpresentinprevioussystemsuitabilityorsampleinjectionsYourcorrectiveactionaddressesproductdispositionbutdoesnotaddresshowtopreventreoccurrenceoftheOOSresultFDA483举例Stabilityfailureswereattributedtoinexperiencedanalystswhenexpertanalystsrepeatedtheresultsandobtainedpassingresults.Thebatchwasreleasedonretestdatawithoutjustificationforignoringtheoriginalresults.TheQualityUnitwasunawareoftheoriginalfailingresults.Laboratoryinvestigationandcorrectiveactionswerenotcompletedinatimelymanner.FDA483举例Somereagents,buffersolutions,referencecompound,andwaterusedforanalysis,presentinthelaboratoryarea,werenotappropriatelylabeled,wereexpiredorcarriednoexpirydate.Refrigeratordoesnothavetemperaturerecorderfor24hours.SOPdoesnotdefinefreezertemperature(e.g.below-10C).UseofprotectiveclothinginthelaboratoryareaisnotdescribedinanSOP.Thequalificationrecordsofthecomputeradministratorarenotcompleteandthejobdescriptionisnotavailable.附录资料:不需要的可以自行删除常见职业病简介

尘肺病一、尘肺病的概念和种类：生产过程中长期吸入生产性粉尘所引起的以肺组织纤维化为主的疾病称尘肺病。1.矽肺2.煤工尘肺3.石墨尘肺4.碳黑尘肺5.石棉肺6.滑石尘肺7.水泥尘肺8.云母尘肺9.陶工尘肺10.铝尘肺11.电焊工尘肺12.铸工尘肺13.根据《尘肺病诊断标准》和《尘肺病理诊断标准》可以诊断的其他尘肺病二、影响粉尘致病的因素1、粉尘的理化性质，无机粉尘中以游离二氧化硅致纤维化能力最强，游离二氧化硅含量超过10%的粉尘，称为矽尘，是矽肺的致病因素。2、粉尘的浓度和暴露时间。3、粉尘的分散度：即粉尘粒径的大小，粒径越小，分散度越高。4、粉尘的硬度5、粉尘的溶解度、荷电性和爆炸性。三、粉尘的致病机理粉尘的致病机理有脂质过氧化学说，钙离子通道学说，免疫学说等。但无论通过何种机理，都是以下过程空气中的粉尘→经呼吸道进入肺泡→肺泡中的吞噬细胞吞噬矽尘颗粒→尘粒通过不同机制对吞噬细胞发生毒作用→吞噬细胞分泌致纤维化因子→肺组织纤维化→吞噬细胞破裂→释放出矽尘颗粒→矽尘颗粒被另一吞噬细胞吞噬→继续发生毒作用四、尘肺病的临床表现1、症状和体征：早期有咳嗽、咳痰、胸闷气短、胸痛等表现，并进行性加重。但尘肺病人的临床表现与病变程度往往不一致。2、胸部X-线表现：肺间质纤维化的表现3、并发症：最常见的有肺结核、肺源性心脏病、气胸、肺部感染等。:五、尘肺病的诊断:应遵循职业病诊断原则1、有职业病诊断资质的医疗机构中，3名以上有诊断资质的医生集体诊断。2、本人提出职业病诊断申请（可以在户口所在地、工作单位所在地和常住地职业病诊断机构）。3、用人单位提供职业史证明材料、及以往职业卫生检测、健康监护等资料。4、依据国家职业病诊断标准和病人临床表现进行综合分析。汞中毒一、汞的理化特性和接触机会汞常温下呈液体，表面张力大易形成很小的汞珠，易挥发，质量大易沉积在车间空气的底部。遇碘形成碘化汞沉淀。常用与灯具、仪表灯行业。二、汞中毒的机理和临床表现1、中毒机理：空气中的汞通过呼吸道极易吸收进入体内，在体内主要分布于肝脏、中枢圣经系统。汞与细胞内蛋白质上的巯基结合，使含巯基的酶失去活性而发生中毒。2、汞中毒的临床表现：1）口腔炎2）震颤：舌、指尖、眼睑3）易兴奋征三、汞中毒的防治1、改革生产工艺、汞作业车间地面应光滑、并在车间内四周设沟槽、排风扇设在车间的下部、定期用碘对车间进行熏蒸。2、严格的健康监护措施3、治疗：二巯基丙磺酸钠或二巯基丁二酸钠铅中毒铅可通过消化道、呼吸道吸收进入体内，职业接触主要通过呼吸道，生活接触主要通过消化道吸收。铅对神经系统、造血系统、肝脏有毒性作用，尤其是对神经系统和造血系统。

儿童高铅血症和铅中毒要依据儿童静脉血铅水平进行诊断。

高铅血症：连续两次静脉血铅水平为100～199mg/L；