微生物的常规鉴定技术

微生物的常规鉴定技术第1页/共22页微生物的常规鉴定技术第2页/共22页微生物的常规鉴定技术一、形态结构和培养特性观察二、生理生化试验第3页/共22页一、形态结构和培养特性观察形态结构：染色（形状、大小、排列方式）、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性培养特性：菌落(colony)第4页/共22页细胞的特殊结构第5页/共22页菌落特征描述大小、形态、颜色、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征第6页/共22页特殊结构菌落特征①细菌菌落的共同特征湿润、粘稠、易挑起（菌体和基质结合不紧密），质地均匀、菌落各部位的颜色一致等。 但不同细菌的菌落也具有自己特有特征，例无鞭毛、不能运动的细菌。②球菌菌落常形成较小、较厚、边缘较整齐的菌落；③有鞭毛的细菌菌落较大、扁平，边缘波状、锯齿状等；④有荚膜………较大且表面光滑，无荚膜者则表面较粗糙。⑤有芽孢………表面常有皱褶且很不透明。第7页/共22页各类微生物的菌落特征微生物类别菌落特征单细胞微生物菌丝状微生物细菌酵母菌放线菌霉菌主要特征细胞形态特征小而均匀、个别有芽孢大而分化细而均匀粗而分化相互关系单个分散或按一定方式排列单个分散或假丝状丝状交织丝状交织菌落含水情况很湿或较湿较湿干燥或较干燥干燥外观特征小而突起或大而平坦大而突起小而紧密大而疏松或大而致密参考特征菌落透明度透明或稍透明稍透明不透明不透明菌落与培养基结合度不结合不结合牢固结合较牢固结合菌落的颜色多样单调十分多样十分多样菌落正反面颜色差别相同相同一般不同一般不同细胞生长速度一般很快较快慢一般较快气味一般有臭味多带酒香常有泥腥味霉味第8页/共22页根据菌丝形态和功能的不同，放线菌菌丝可分为基内菌丝、气生菌丝和孢子丝三种。放线菌的结构第9页/共22页二、生理生化试验微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。第10页/共22页二、生理生化试验１、糖酵解试验２、淀粉水解试验3、V-P试验4、甲基红（MethylRed）试验5、靛基质（Imdole）试验6、硝酸盐（Nitrate）还原试验第11页/共22页二、生理生化试验7、明胶（Gelatin）液化试验8、尿素酶（Urease）试验9、氧化酶（Oxidase）试验10、硫化氢（H2S）试验11、三糖铁（TSI）琼脂试验12、硫化氢-靛基质-动力（SIM）琼脂试验第12页/共22页其他鉴定手段染色体DNAG+Cmol%含量生物体的遗传物质DNA中四种碱基G、C、A、T的排列和比例是DNA特性的决定因素。染色体DNAG+Cmol%含量即DNA的碱基组成具有种特异性且不受菌龄和外界因素的影响,成为细菌分类和菌种鉴定的重要指标测定方法：纸层析法纸、浮力密度法、高效液相色谱法、热变性温度(Tm)测定法、连续荧光检测法第13页/共22页微生物与乳酸菌的鉴定参见《伯杰氏细菌手册》与《乳酸细菌分类鉴定及方法》第14页/共22页API微生物鉴定试剂条法国梅里埃公司生产第15页/共22页第16页/共22页第17页/共22页3、V-P试验某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V-P（+）反应。第18页/共22页4、甲基红（MethylRed）试验

肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基pH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。第19页/共22页5、靛基质（Imdole）试验

某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。第20页/共22页6、硝酸盐